艾炭炮制工藝研究

呂佳美，李曦凝，王俊桐，甄翱翾，王昌輝，李 勇*

（1.長春中醫藥大學藥學院，長春 130117；2.長春醫學高等專科學校，長春 130031）

艾葉為菊科植物艾（Artemisia argy Levl. Et Vant.）的干燥葉，性溫，味苦，具有理氣、溫經脈等作用。因艾葉有小毒，需經過炮制加工處理可降低或消除毒副作用[1-9]。漢代《華氏中藏經》最早記載于“艾葉，炒”，至明代提出了“存性”的要求，且艾葉在炒炭后具有祛瘀止血，驅寒止痛的功效[10-11]?，F代炮制方法以醋制和制炭2種方法，各炮制品質量良莠不齊。本研究以艾炭中總黃銅的含量為評價指標，同時結合古代炮制過程中外觀形狀特征，不僅量化了炮制關鍵影響參數，優選出了最佳艾炭炮制工藝，為艾葉炭工業化生產加工提供了科學依據，而且也為炒炭存性的中醫藥理論提供了強有力的客觀依據，為進一步建立國家標準奠定了基礎。

1 材料

1.1 藥材 艾葉購于吉深大藥房，經長春中醫藥大學中藥鑒定教研室張景龍教授鑒定，樣品均為菊科植物艾（Artemisia argy Levl. Et Vant.）的干燥葉。

1.2 儀器 FA105型十萬分之一電子天平（上海精科實驗有限公司）；TP-A500電子天平（福州華至科學有限公司）；KQ-C型玻璃儀器氣流烘干器（鞏義市予華儀器有限責任公司）；HL-2B型手提式中藥粉碎機（杭州華菱設備有限公司）；W210D型恒溫水浴鍋（上海申順科技公司）；ST80型紅外溫度儀為（哈爾濱市側電器廠）；CYJ型滾筒式炒藥機（江陰市鑫達藥化機械制造有限公司）；101型鼓風干燥箱（北京科偉永興儀器有限公司）；UV-1780紫外可見分光光度計（島津儀器蘇州有限公司）。

1.3 試藥與試劑 盧丁對照品（購于中國藥品生物制品檢定所，3:100080-200707）；亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉及其他試劑均為分析純（購于北京化工廠）。

2 方法與結果

2.1 因素水平設計 設計正交L9（34）因素水平表,考察加熱溫度、加熱時間對艾葉炒炭質量的影響。將炒藥機轉速定為20 r/min，將炒制溫度、炒制時間作為考察因素，因素設計，見表1。

表1 因素水平

2.2 試驗方法 照正交設計方案，取吉深大藥房凈艾葉50 g，輕揉至散，將炒藥機定為20 r/min，按照因素設計的溫度和時間進行炒炭，取出，放涼，即得。

2.3 考察指標及指標選擇依據

2.3.1 質量評價指標的選擇 飲片傳統的質量評價是在傳統中醫藥發展的過程中慢慢形成，直到現代中藥加工的研究，也在一定程度上顯示中藥飲片的質量。按照傳統炮制外觀質量的標準，能在一定程度上顯示炮制品的質量，因此將其作為正交試驗的評價指標之一。根據《中華人民共和國藥典》（2015版）對艾炭飲片的描述，確定艾炭外觀達到“呈不規則碎片，表面黑褐色”為最佳品，將此最佳品定為100分，炮制后的艾炭請有經驗的炒藥師傅，按照炒炭后顏色、片形及完整度分為5等：100、80、60、40、20 分。

2.3.2 內在質量評價指標的選擇 根據傳統的炒炭存性要求，參考相關文獻，艾葉中黃酮是其有效成分之一，具有抗菌、抗過敏、消炎等多種生物活性。因此，艾葉及其炮制品種選用總黃酮類成分的含量作為內在的評價指標，將測定黃酮含量為選擇依據[12-18]。

2.3.3 對照品溶液的制備 精密稱取蘆丁（25.03 mg），轉移到量瓶中（25 mL），加適量乙醇試劑，放置水浴鍋上，微熱、溶解、放冷，加乙醇至刻度，搖勻，取20 mL轉移到100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻得到蘆丁0.2 mg/mL。

2.3.4 供試品溶液的制備 取艾葉及各批次艾葉炮制品，稱取0.5 g粉末，精密稱定、分別置于圓底燒瓶中（100 mL）。精密加入乙醇（40%）50 mL，再次稱重，用水浴進行回流提取，放置1 h，放涼，再次稱重，用乙醇（40%）補定減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 測定波長的選擇 取蘆丁對照品溶液1 mL，轉移到5 mL容量瓶，進行顯色處理，首先加入5%亞硝酸鈉0.2 mL，搖勻后放置6 min，接著加入10%硝酸鋁0.2 mL，搖勻后靜置6 min，再加入5%氫氧化鈉2 mL，加水定容，搖勻。靜置15 min后放入紫外分光光度計中，進行光譜掃描模式。結果對照品溶液在511 nm處有最大吸收。

2.4.2 標準曲線的制備 精密稱取蘆丁標準品溶液1、2、3、4、5、6 mL，分別置于25 mL容量瓶中，加水至6 mL，按2.4.1項下進行顯色處理后放入紫外分光光度計中。以相應試劑為空白，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標。結果表明：Y = 12.418 X - 0.012 7，r =0.999，蘆丁濃度在0.014 8～0.051 8 mg/mL 范圍內與吸收呈良好的線性關系。

2.4.3 精密度試驗 精密吸取對照品溶液1 mL，照上述方法連續測定6次。結果，蘆丁對照品溶液吸光度的RSD值為0.04%，表明儀器精密度良好。

2.4.4 穩定性試驗 精密吸取艾葉供試品溶液1 mL，分別于0、2、4、6、8、12 h，照上述方法測定，供試品溶液的RSD值為0.06%，表明艾葉提取溶液在12 h內穩定。

2.4.5 重復性試驗 取同批艾葉供試品5份，分別采用上述供試品溶液和對照品溶液的制備方法，并依法顯色進行紫外測定，測得總黃酮含量的平均質量分數為16.30%，RSD值為0.02%，表明本法重復性良好。2.4.6 回收率試驗 取同一批已知含量的艾葉供試品9份，分為3組。將3組分別各精密加入蘆丁標準品，相當于樣品濃度的80%、100%、120%。按供試品溶液的提取方法提取，另取蘆丁標準品溶液測定作對照，并計算蘆丁低、中、高3個濃度的加樣回收率。結果見表2。

2.5 綜合評分標準 在艾炭樣品中總黃酮含量的測定發現，艾炭中的黃酮含量較生艾葉下降，其下降率在44%～81%。并聯系傳統外觀性狀進行分析，確定艾炭總黃酮下降率在65%者為炮制佳品。因此，本工藝研究將內在指標下降65%者定為滿分，總黃酮下降率每增加或減少0.37%減1分。根據正交表綜合性評分中外觀評分和總黃酮下降率的分各占權重系數0.5，并計算綜合得分，結果見表3，表4。

表2 回收率試驗結果

表3 正交設計方案及炮制結果

表4 正交試驗各指標評分結果

2.6 結果分析 由正交試驗直觀分析表分析，從極差（R）值可以分析出在該正交試驗設定的因素、水平條件中，各因素對綜合得分的影響程度依次為A＞B，即A因素最大，B因素影響次之；A因素選擇水平2、B因素選擇水平2。且結合外在指標正交5中的研究外觀和得率，聯系分析結果，選擇最佳炮制工藝組合為 A2B2。且在方差分析中表明,炒制時間、炒制溫度2項因素都是影響的顯著性因素，見表5，表6。

表5 艾炭正交試驗結果分析（直觀分析）

表6 艾炭正交試驗結果分析（方差分析）

2.7 工藝驗證 為了驗證工藝，稱取吉深大藥房艾葉3份 （每份50 g），按照研究的工藝參數制備艾葉炭飲片，并對其黃酮含量進行測定，結果第1批含量為5.950 4%，第二批含量為5.951 2%，第3批含量為5.948 4%。RSD值為0.02%，表明工藝穩定可行。

3 小結

為了更全面的反映溫度和時間對艾葉炭質量的影響，利用外在指標（傳統質量評價），內在指標（黃酮含量）雙重的綜合評分對炮制品進行分析，經過對工藝的研究，確定具體參數。

艾葉炮制炭化和灰化有本質差別，艾葉炭中的總黃酮成分再次證明了炒炭存性，是炭化而不是灰化?，F代藥理學研究[19-20]亦表明，黃酮具有止血功能，這與“炒炭止血”的傳統中醫藥理論相一致。綜上所述，本項研究為建立科學合理的艾炭質量控制標準提供了實驗依據，同時，也表明艾炭的化學和藥理學等系統研究還有待進一步深化。