血痛定噴霧劑消腫及鎮痛作用的研究

鐘沁月，呼永河 ，鄭德志，肖雯婧，侯 君

血痛定巴布貼是成都軍區總醫院和解放軍452醫院院內制劑，臨床應用至今已有十幾年，主要用于基層部隊外訓常見軟組織損傷的治療。其由中藥三七、獨一味、祖師麻組成，療效確切，未見明顯不良反應發生[1]。但血痛定巴布貼的生物利用率低，使用、攜帶不便。本課題組前期研究表明，血痛定巴布貼抗炎作用明顯，鎮痛作用較弱[2]。因此，為改善巴布貼劑型缺陷，本研究前期采用了高分子生物材料聚己內酯-聚乙二醇-聚己內酯共聚物（PCEC）制備出同時傳輸疏水性（獨一味、祖師麻）和親水性藥物（三七）的高效透皮緩釋納米粒，可促進血痛定有效成分的吸收，并制成具有較好止血作用的中藥外用噴霧劑[3]。為了解納米載體的血痛定噴霧劑是否具有快速、高效的消腫與鎮痛作用，本實驗進行了動物實驗研究。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試劑 血痛定噴霧劑凍干粉末（批號：20160701）及φ6 mm打孔器由本實驗室制備；云南白藥粉購于云南白藥集團股份有限公司；扶他林乳膠劑購于北京諾華制藥有限公司；硫化鈉、冰醋酸、二甲苯（分析純）購置于西南國藥公司。

1.1.2 儀器 恒溫水浴熱板（55℃，河北冀星實驗儀器有限公司），小鼠尾光熱痛反應儀（成都泰盟科技有限公司），扭力天平（上海實驗試劑有限公司）。

1.2 實驗動物 健康ICR小白鼠，SPF級實驗動物，體重19～22 g，雄性，購于四川大學實驗動物中心（許可證號：川實動管字第71號）。飼養條件：溫度 20～22℃，相對濕度 60%～70%，光照 12 h/12 h，明暗交替，自動定時過濾通風換氣，換氣頻度10～15次/h。

1.3 溶液配制 精密稱定凍干血痛定噴霧劑粉末0.5 g，定容至 100 ml，配制成 5 mg/ml的儲備液，臨用前稀釋。

精密稱取云南白藥粉0.3 g，定容至100 ml，配制成3 mg/ml陽性對照藥物溶液。

1.4 動物分組 將小鼠隨機分為空白組（賦形劑PCEC 3 mg/ml）、陽性對照組（云南白藥 3 mg/ml或扶他林8 g/kg）、血痛定噴霧劑高、中、低濃度組（5、3、1 mg/ml），分別用于消腫及鎮痛實驗，每個實驗每組動物8只。

1.5 實驗方法

1.5.1 消腫實驗 各組小鼠給藥前，采用硫化鈉滑石粉對背部脫毛，脫毛面積為2 cm×2 cm；涂敷藥物前，以溫水洗凈去毛區皮膚。各組按照成人體表面積法換算成小鼠給藥量為0.01 ml/g，血痛定噴霧劑高、中、低濃度組含藥量分別為 1.25、0.75、0.25 mg，陽性對照組（云南白藥）含藥量為0.75 mg。早上9:00涂敷1次，下午15:00涂敷1次，連續給藥3 d。末次給藥后1 h，各組小鼠均于右耳正反兩面均勻涂抹二甲苯0.05 ml。1 h后用直徑6 mm打孔器在左右耳相對稱部位打孔，取耳片，用扭力天平稱重，計算雙側耳片重量之差。腫脹度=右耳質量-左耳質量。

1.5.2 鎮痛實驗

1.5.2.1 熱板法 剔除痛閾反應潛伏期＜10 s和＞30 s的小鼠。給藥方案同“1.5.1”項，連續給藥3 d。各組小鼠于分別于末次給藥后0.5和1 h，置于55℃熱板上，觀察小鼠的痛覺反應。以小鼠出現舔后足為判斷指標，記錄小鼠置于熱板上至其出現舔足的時間。

1.5.2.2 甩尾法 選擇反應潛伏期4～6 h的小鼠。給藥方案同“1.5.1”項，各組小鼠分別于末次給藥后0.5和1 h，置小鼠尾于光熱痛反應測試儀上，觀察記錄小鼠出現甩尾的時間。

1.5.2.3 扭體法 空白組和血痛定各組每次給藥劑量同前，陽性對照組（扶他林）按照體表面積法換算成小鼠給藥量8 g/kg，0.2 g/只。各組小鼠腹部去毛，暴露2 cm×2 cm的皮膚為給藥區，各組分別于早上9:00和下午15:00各涂藥1次。于末次給藥后0.5 h，腹腔注射1%冰醋酸0.2 ml，觀察記錄 15 s內，小鼠出現扭體反應的次數。

1.6 統計學方法應用SPSS19.0統計軟件進行數據分析，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 消腫作用 血痛定噴霧劑的消腫作用呈劑量依賴性，且高劑量組的消腫作用與陽性對照組無顯著差異（P＞ 0.05，表 1）。

表1 小鼠耳殼二甲苯炎癥消腫實驗（n=8）

2.2 鎮痛作用

2.2.1 熱板法 血痛定各濃度組及陽性對照組的痛覺反應潛伏期均延長，其中給藥后1 h的作用明顯長于給藥后0.5 h，并呈劑量依賴性，而血痛定高濃度組的痛覺反應潛伏期長于陽性對照組（P＜0.05，表 2）。

表2 熱板法各組痛覺反應潛伏期比較（n=8）

2.2.2 甩尾法 血痛定各濃度組及陽性對照組的痛覺反應潛伏期均延長，給藥后1 h鎮痛作用長于0.5 h，并呈劑量依賴性（P＜ 0.05，表 3）。

表3 甩尾法各組痛覺反應潛伏期比較（n=8）

2.2.3 扭體法 血痛定各濃度組及陽性對照組的扭體痛次數均減少，血痛定噴霧劑的作用呈劑量依賴性（P＜0.05，表4），其中高濃度組的抑制率與陽性對照組相當。

表4 扭體法各組扭體反應次數比較（n=8）

3 討論

部隊日常訓練或執行任務過程中，戰士容易出現創傷出血、皮膚擦傷和肌肉、韌帶挫傷或撕裂傷、關節和腰部損傷、過勞性損傷等。在后送至醫院進行專科治療前，主要進行各種外傷藥膏的貼敷治療，以達到止痛、消腫的目的。但目前部隊配發的外傷藥膏要么粘附性差，容易脫落；要么粘附性過強，在用后揭撕時引起皮膚過敏或刺激、拔掉汗毛、甚至造成局部皮膚撕裂導致極度疼痛等。本研究在原組方不變的情況下，運用高分子納米材料，制備了新型的血痛定噴霧劑，其有效成分為PCEC[3]，增加了中藥的生物利用度，較巴布貼劑型而言，提高了中藥組分的鎮痛作用，且方便攜帶，適用于皮膚、關節肢體表面等部位給藥，同時兼具止血鎮痛作用，適合惡劣野戰條件下官兵自救。

耳殼二甲苯炎癥腫脹實驗結果表明，血痛定噴霧劑具有明確的消腫作用，其中高劑量的效果最顯著，與陽性對照藥物云南白藥相當，顯示其較好的消腫作用。小鼠熱板法、甩尾法實驗結果表明，血痛定噴霧劑對熱刺激所致疼痛感具有明確的抑制作用，尤其以高劑量的抑制作用最強，甚至超過了云南白藥的作用。小鼠扭體法實驗結果表明，血痛定噴霧劑能減輕醋酸對試驗小鼠內臟所致的疼痛，顯示較強的鎮痛作用，也是以高劑量的鎮痛作用最強，與陽性對照藥物扶他林的作用相當。

綜上所述，血痛定噴霧劑具有強效的消腫及鎮痛作用，具有使用便捷的特點，可作為治療軍隊訓練傷的常用藥和特需藥，亦是臨床所急需的中藥新品種。