復(fù)方肺心安片中黃芪甲苷的含量

洪艷蘋(píng)

摘 要：本文采用高校液相測(cè)定了復(fù)方肺心安片中黃芪苷的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）為流動(dòng)相，ELSD檢測(cè)器漂移管溫度90℃，氣體流速：3.0L·min-1，柱溫：30℃。黃芪苷在20～350微克/毫升范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。黃芪苷的平均回收率為99.3%，RSD為0.93%（n=6）；此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方肺心安片中黃芪苷的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：復(fù)方肺心安片；黃芪苷；含量

復(fù)方肺心安片主要用于治療慢性肺心病。黃芪為復(fù)方肺心安片主要成分之一。黃芪的藥用迄今已有2000多年的歷史，具有補(bǔ)氣固表，利尿托毒，排膿，斂瘡生肌的功效。清朝繡宮內(nèi)稱其為“補(bǔ)氣諸藥之最”，意思是說(shuō)經(jīng)常用黃芪煎湯或用黃芪泡水代茶飲，具有良好的防病保健作用。黃芪屬補(bǔ)氣良藥，常用于虛脫、休克等急癥，效果較好。《日華子本草》記載：“助氣壯筋骨，長(zhǎng)肉補(bǔ)血。”黃芪含皂甙、蔗糖、多糖、多種氨基酸、苦味素、黃芪皂苷、甜菜堿、膽堿、葉酸及硒、硅、鋅、鈷、銅、鉬等多種微量元素。黃芪有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、保肝、、調(diào)節(jié)血壓、抗病毒性心肌炎、利尿、抗衰老、抗應(yīng)激、降壓和較廣泛的抗菌作用。本文采用高校液相測(cè)定了復(fù)方肺心安片中黃芪苷的含量。

1 儀器與試藥

JHT2800高效液相色譜儀（深圳市天友利標(biāo)準(zhǔn)光源有限公司）；SB25-12DTS雙頻超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（上海通微分析技術(shù)有限公司）；全自動(dòng)內(nèi)校分析天平（常州市幸運(yùn)電子設(shè)備有限公司）；恒溫油槽（南京恒星實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；DBT-IV-20高端型超純水機(jī)（杜伯特（北京）科技有限公司）；10升數(shù)控型超聲波清洗器（天津市瑞普電子儀器公司）。黃芪苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。乙腈（上海展云化工有限公司）、乙醇（上海展云化工有限公司）、磷酸（上海展云化工有限公司）、甲醇（安徽勝達(dá)化工科技有限公司）、冰醋酸（安徽勝達(dá)化工科技有限公司）、磷酸氫二鈉（安徽勝達(dá)化工科技有限公司）、三乙胺（安徽勝達(dá)化工科技有限公司）、正丁醇（安徽勝達(dá)化工科技有限公司）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5um）；甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）為流動(dòng)相，ELSD檢測(cè)器漂移管溫度90℃，氣體流速：3.0L·min-1。理論板數(shù)按黃芪苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取復(fù)方肺心安片，研細(xì)，精密稱取，加60毫升50%乙醇溶液超聲處理0.5小時(shí)，放冷，濾過(guò)，蒸干濾液，殘?jiān)?0毫升純化水溶解，用水飽和過(guò)的正丁醇萃取三次，每次30毫升，合并正丁醇層，水浴蒸干，殘?jiān)?0%乙醇溶液溶解轉(zhuǎn)移至25毫升容量瓶?jī)?nèi)并分次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加50%乙醇溶液至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芪苷對(duì)照品約10毫克，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1ml中含100微克的溶液，作為對(duì)照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

依照處方取除黃芪以外的藥材，按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，照供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在黃芪苷出峰處陰性液無(wú)色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒(méi)有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為20微克/毫升、50微克/毫升、100微克/毫升、150微克/毫升、200微克/毫升、250微克/毫升、300微克/毫升、350微克/毫升的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（微克）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，黃芪苷對(duì)照品在20～350微克/毫升范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液，精密吸取黃芪苷對(duì)照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.55%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的復(fù)方肺心安片樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.89%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時(shí)精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，供試品黃芪苷峰面積積分值的RSD為0.81%。結(jié)果表明黃芪苷至少在4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的黃芪苷對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測(cè)定含量（同時(shí)測(cè)定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.3%，RSD為0.93%。

2.10 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定復(fù)方肺心安片三批樣品中黃芪苷的含量，含量為2.35毫克/克、2.16毫克/克、2.22毫克/克。

3 討論

分別考察甲醇-乙腈-水（20∶20∶60），甲醇：水=55∶45，各加1%冰醋酸，甲醇-乙腈-水（10∶30∶60），乙腈-水，梯度洗脫（0～30min，乙腈20.5%，30～70min，乙腈20.5%→38%），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），0.02mol/L磷酸二氫鈉∶甲醇（體積比為15∶85），不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）為流動(dòng)相。此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方肺心安片中黃芪苷的含量測(cè)定。復(fù)方肺心安片中黃芪苷的含量應(yīng)為不少于2毫克/克。

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