鄰苯二甲酸二辛脂與氯仿聯合染毒對小鼠肝臟的氧化損傷研究

金嘉民 王明霞 馮團

摘 要：本研究通過用鄰苯二甲酸二辛酯（DOP）和氯仿（CF）對小鼠進行聯合染毒，來觀察染毒小鼠脂質過氧化等指標的變化。本實驗按照聯合作用的分析方法——2×2析因分析進行分組。選擇40只昆明小鼠，體重（25±2）g。將小鼠隨機分為4組，雌雄分開，每組5只，即對照組（玉米油）、DOP單獨染毒組（1/10 LD50，540mg/kg）、CF單獨染毒組（1/10 LD50，112mg/kg）、聯合染毒組DOP（1/10 LD50）+CF（1/10LD50）。通過灌胃方式進行染毒，每天固定時間進行染毒1次，15d后處死，稱重并且稱量小鼠肝臟重量。計算肝臟器系數，測定肝臟組織中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）的活力。與對照組比較，染毒后CF組體重升高；CF組和DOP組的肝臟器系數升高；MDA含量、SOD及GSH-PX活力均降低（P<0.05），CF與DOP聯合染毒對SOD及GSH-PX表現協同作用（P<0.05）。CF與DOP聯合染毒對小鼠肝臟存在氧化損傷作用。

關鍵詞：鄰苯二甲酸二辛脂 氯仿 肝臟毒性

中圖分類號：R11 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2018）06（a）-0231-02

氯仿（CF）是工業上廣泛使用的有機溶劑及日常生活飲用水中主要的消毒副產物之一。鄰苯二甲酸二乙基己酯，又稱鄰苯二甲酸二辛酯（DOP），常作為塑料制品的增塑劑使用。人們在日常生活中通過多種途徑接觸二者，對人體造成不同程度的危害[1-3]。以往多數研究是探討某一化學物質不同劑量的毒性影響，對二者的聯合毒副作用研究較少。前期有關二者聯合染毒后對小鼠腦組織及肝臟酶等的影響[4-6]，本研究繼續探討二者聯合染毒副對小鼠肝臟脂質過氧化指標的影響，以推測二者聯合染毒后對肝臟是否存在氧化損傷作用。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

低速自動平衡離心機（北京醫用離心機廠）、-80℃低溫冰箱（SANYO，Japan）、紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限公司）、電子分析天平（上海上平儀器廠）、數顯恒溫水浴鍋（金壇市杰瑞爾電器有限公司）、KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、渦旋混勻器 VORTEX SHAKER）、氯仿（北京北化精細化學品有限公司）、鄰苯二甲酸二辛酯（天津市光復精細化工研究所）。

1.2 實驗動物分組及染毒

成年昆明普通小鼠40只，體重（25±2）g，購自齊齊哈爾醫學院動物實驗中心。實驗小鼠常規飼養，自由進食及飲水。

將昆明普通小鼠按體重隨機分為四組：即CF組（1/10LD50，112mg/kg）、DOP組（1/10 LD50，540mg/kg）、DOP（1/10LD50）+CF（1/10LD50）聯合染毒組、對照組（玉米油），雌雄分開，每組5只。連續灌胃染毒15d，每天固定時間染毒一次，稱量記錄體重，染毒容積10mL/kg，對整個實驗過程進行動態觀察。

1.3 檢測指標

灌胃染毒15d后稱量記錄體重并處死全部小鼠，迅速摘取肝組織，稱重以計算肝組織系數。其余組織液氮速凍后置于-80℃冰箱保存備用。每只小鼠稱取0.4g肝臟，加入3.6mL生理鹽水，制備成10%的勻漿液，以4000轉/分離心10min，取上清。考馬斯亮藍法測定勻漿中蛋白含量；用SOD、MDA、GSH-PX試劑盒采用分光光度法測定肝臟組織勻漿中丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX），超氧化物歧化酶（SOD）的活力。

1.4 統計學方法

實驗數據均以（）表示。采用 SPSS 22.0軟件進行統計分析，聯合作用評價采用2×2析因方差分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

⑴小鼠體重及臟器系數的測定結果DOP和CF聯合染毒對小鼠體重及臟器系數的影響見表1。

與對照組比較，DOP組體重無明顯差異（P>0.05）；CF組染毒后體重下降，差異有統計學意義（P<0.05）；CF組與DOP組的小鼠肝臟系數高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）；DOP與CF聯合染毒對小鼠體重、肝臟系數的影響尚未表現出聯合作用（P>0.05）。

⑵小鼠肝組織中脂質過氧化指標的測定結果DOP與CF聯合染毒對小鼠肝臟脂質過氧化指標的測定結果見表2。

同對照組比較，CF染毒組、DOP染毒組小鼠肝組織中MDA含量、SOD及GSH-PX活力均降低，差異有統計學意義（P<0.05）；DOP與CF聯合染毒對小鼠SOD及GSH-PX活力表現出協同作用（P<0.05）。

3 討論

本研究結果顯示，CF染毒組與DOP染毒組小鼠肝臟組織中MDA含量、SOD及GSH-PX活力均低于對照組，DOP與CF聯合染毒對小鼠肝臟組織中MDA含量尚未表現出膜脂過氧化物的損傷，SOD及GSH-PX活力表現協同作用。表明在該實驗條件下CF與DOP單獨染毒可對肝臟清除過氧化物和羥自由基產生抑制作用，可對肝臟產生過氧化損害作用，CF與DOP聯合染毒時對肝臟SOD及GSH-PX活性產生了明顯抑制作用。推測二者可能通過以下兩條途徑對肝臟產生氧化損傷：一方面抑制了機體正常的自由基生成過程，導致MDA含量下降；另一方面使機體對抗脂質過氧化的酶促系統受損，導致SOD和GSH-PX的合成減少或是活性降低。

參考文獻

[1] 于淑江，安麗紅，李杰，等.鄰苯二甲酸二（2一乙基己基）酯毒性作用[J].預防醫學論壇，2005，11（2）：236.

[2] 鄭文芝，周永強，張霖霖.PVC 塑料制品中增塑劑PAEs在水環境中遷移規律的研究[J].廣東化工，2006，33（3）：29-30.

[3] 張東，薛雅琳，朱琳，等.鄰苯二甲酸酯毒性及檢測方法研究進展[J].糧油食品科技，2014，22（5）：70-75.

[4] 王明霞，婁峰閣，于唐麗，等.氯仿和鄰苯二甲酸二辛酯聯合染毒對小鼠肝臟酶的影響[J].環境與健康雜志， 2017，34（9）：775-777.

[5] 王明霞，趙淑華，杜琳琳，等.鄰苯二甲酸二辛酯和氯仿聯合染毒對雌性小鼠單胺類神經遞質的影響[J].齊齊哈爾醫學院學報，2015，36（36）：5462-5463.

[6] 王明霞.鄰苯二甲酸二辛酯和氯仿聯合染毒對小鼠腦組織的影響[D].吉林大學， 2013.