南京市6774份HIV抗體初篩陽性標本復(fù)檢與確證結(jié)果分析

吳詠梅 許文炯 董瀟瀟 董曉慶 王 燕

HIV抗體是機體針對HIV病毒產(chǎn)生免疫反應(yīng)的產(chǎn)物，理論上采用針對病毒的檢測方法能夠有效地進行病原學(xué)診斷[1]。但實際上，HIV分離培養(yǎng)的方法敏感性低，操作繁瑣，很難應(yīng)用。HIV 抗體檢測是常規(guī)使用的診斷艾滋病病原學(xué)的實驗方法。南京市疾病預(yù)防控制中心艾滋病實驗室在疾控、醫(yī)療、采供血等部門中設(shè)立HIV抗體篩查實驗室67家，全HIV抗體檢測網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)形成一定規(guī)模。抗體檢測分為篩查、復(fù)檢和確認三個步驟，篩查、復(fù)檢呈陽性反應(yīng)的標本需要經(jīng)過確證以后才能下結(jié)論。本文擬分析南京市2012-2017年HIV 抗體初篩陽性標本的復(fù)檢與確證結(jié)果，為指導(dǎo)與提高各篩查實驗室的檢測水平提供依據(jù)，為確證實驗室尋找更準確的方法提供建議，提高全市HIV實驗室檢測水平。

1 材料與方法

1.1 標本來源 2012年1月至2017年12月南京市各艾滋病初篩實驗室送檢HIV抗體陽性標本6774份。

1.2 試劑和儀器 初篩試驗中化學(xué)發(fā)光法試劑由雅培提供，用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)果；復(fù)檢試驗酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)雙抗原夾心法試劑由珠海麗珠提供；膠體金(硒)標快速法試劑由雅培硒標提供；確證試驗免疫印跡法(WB)試劑由新加坡GENELABS公司提供。所有試劑均在有效期內(nèi)使用，嚴格按本實驗室SOP標準操作程序進行檢測。酶標儀為安圖斯Anthos2010型，洗板機為安圖斯Anthos fluido。

1.3 復(fù)檢程序 根據(jù)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2015年修訂版)》[2]要求，用原有試劑和另一種不同方法或原理的試劑進行復(fù)核，如果兩種試劑均陽性或一陰一陽者必須進行確證試驗。

1.4 確證程序 復(fù)檢試驗陽性的樣品，進行WB確證試驗。結(jié)果陰性者，報告“HIV抗體陰性”；結(jié)果陽性者，報告“HIV-1抗體陽性”，按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報告；結(jié)果不確定者，報告“HIV抗體不確定”。

1.5 結(jié)果判斷 對同時符合以下兩條標準可判為陽性：①至少有2條env帶(gp41和gp160/gp120)出現(xiàn)，或至少1條env帶和p24帶同時出現(xiàn)；②符合試劑盒提供的陽性判定標準。如出現(xiàn)HIV抗體特異帶(如env帶:gp41，gp160/gp120；gag帶:p55，p24，p17；pol帶:p66，p51，p31)，但不足以判定陽性者判定為不確定，不確定結(jié)果不能作為HIV感染的診斷依據(jù)。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)分析均采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料進行χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)檢雙陽性WB確證結(jié)果 復(fù)檢結(jié)果6774份初篩陽性標本經(jīng)金標和酶標復(fù)檢，復(fù)檢雙陽性4821份，確證陽性4736份，確證陰性3份，不確定82份。各年度檢測情況見表1。

2.2 復(fù)檢一陰一陽WB確證結(jié)果 金標和酶標復(fù)檢一陰一陽 總共有97 份， 51份為確證陰性，3份為確證陽性，43份為不確定。其中ELISA陰性和金標陽性39份，1份為確證陽性，20份為確證陰性，18份為不確定；ELISA 陽性和金標陰性58份，確證陽性2份，31份為確證陰性，25份為不確定。各年度檢測情況見表2。

表1 2012-2017年度ELISA(酶標)、金標復(fù)檢及確證結(jié)果

2.3 三年中各種分析指標的變化情況 各種發(fā)生率結(jié)果HIV不確定率逐年上升；篩查真陽性率和篩查陽性的復(fù)檢陽性率在2014年最高，2015年以后逐年減少；復(fù)檢真陽性率2012年最高；復(fù)檢效率2014年最低，2015年以后逐年上升；確認效率2015年以后逐年減少。各年度檢測情況見表3。

表2 2012-2017年度ELISA( 酶標) 、金標復(fù)檢及確證結(jié)果

表3 HIV抗體檢測各種發(fā)生率一覽表 %

3 討論

本文統(tǒng)計結(jié)果，6774份初篩陽性標本總復(fù)檢符合率為72.6%[(4821+97)/6774]；總確證符合率為96.4%[(4736+3)/(4821+97)]。有報道北京及廣西等地區(qū)的確證符合率多在80%以上[3,4]，南京地區(qū)與報道相似。其中，酶標法和金標法單陽復(fù)檢符合率為1.4%(97/6774)，確證符合率3.1%(3/97)；雙陽復(fù)檢符合率為71.2%(4821/6774)，確證符合率為98.2%(4736/4821)。單陽、雙陽的復(fù)檢和確證符合率結(jié)果差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。本次結(jié)果有兩點值得注意：①2014年有3例復(fù)檢雙陽，但確證為陰性，需要進一步結(jié)合臨床資料隨訪分析；②在復(fù)檢單陽中共有3例確證為陽性，說明為避免漏檢，采用兩種不同方法復(fù)檢十分必要。根據(jù)本文統(tǒng)計結(jié)果，不確定結(jié)果在雙陽中占1.7%(82/4821)，在金標單陽中占46.2%(18/39)，在酶標單陽中占43.1%(25/58)，金標、酶標單陽和雙陽不確定結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

篩查策略分析：篩查陽性的復(fù)檢陽性率是指首次篩查陽性標本的復(fù)檢陽性概率。篩查真陽性率反映了篩查實驗的準確性。從表3中看出2014年這兩個指標較高，分析原因可能是因為加強了實驗室規(guī)范性的建設(shè)，隨著試劑的成熟度不斷提升，檢測能力和檢測水平不斷提高，2012年至2014年就有上升趨勢。但從2015年開始有下降趨勢，分析其主要原因可能是初篩實驗室大部分由以前的手工酶標法變更為上機操作的化學(xué)發(fā)光法，其靈敏度提高，從而造成的假陽性也增多。這種現(xiàn)象要引起足夠重視，有必要多培訓(xùn)疾控部門掌握化學(xué)發(fā)光學(xué)的質(zhì)量保證內(nèi)容，加強對各初篩實驗室的督導(dǎo)檢查，全面提高各初篩實驗室的檢測水平。

復(fù)檢策略分析：復(fù)檢真陽性率指復(fù)檢陽性人群中確認為陽性的概率，從表3中看出2012年這個指標是最高的，2016-2017年有下降趨勢，分析可能是與2016年以后出現(xiàn)的不確定結(jié)果增多有關(guān)。復(fù)檢效率指通過復(fù)檢去除篩查陽性標本中假陽性的能力，2014年此指標是最低的，2015-2017年有上升趨勢，說明了復(fù)檢的必要性。復(fù)檢時建議除原標本外還需再采集一份新鮮標本,一方面可核對兩份結(jié)果的一致性，一方面也可以了解原標本是否受到污染。有條件的實驗室，復(fù)檢時建議應(yīng)盡量使用不同原理的試劑。

確證策略分析：確認效率指復(fù)檢陽性標本通過確認能夠得出肯定診斷的概率。2015-2017年有下降。說明確證試驗WB方法有一定的局限性。有報道說WB的特異性不是很好，只有97.8%[5]。HIV不確定率是指用WB檢測方法出現(xiàn)HIV抗體不確定結(jié)果的概率，本研究中其整體呈逐年上升趨勢，其原因可能是早期HIV攜帶者增多，抗體還沒完全產(chǎn)生；艾滋病晚期患者增多，免疫系統(tǒng)長期受損，體內(nèi)抗體量低于診斷試劑的檢測限時；混合感染的標本來源增多，其非特異性反應(yīng)也增多。美國CDC建議對此結(jié)果一個月后復(fù)查；同時也認為，對臨床和實驗室專家來說，核酸檢測對初始免疫印跡“不確定”的個體判斷是否感染是有用的。有研究認為，病毒核酸定量針對HIV早期感染的敏感性可達97.6%～100%，特異度為100%[6]。

綜合以上分析，對于不確定結(jié)果，建議有三點：一是增加1～2種性能穩(wěn)定成熟的確證試劑用于不確定結(jié)果的檢測工作，如條帶免疫印跡，因其條帶上不含雜抗原，不帶有宿主細胞的成份，因而特異性更好[7]。二是增加核酸檢測進行輔助診斷，有研究表明對于不確定的標本，可以應(yīng)用核酸檢測作為輔助診斷[8]。HIV RNA定量檢測技術(shù)降低了污染的危險，逐漸被應(yīng)用于HIV感染的診斷[9]。三是輔以抗原檢測，抗原是早期診斷和縮短窗口期的一種重要方法[10]。核酸和抗原的陽性結(jié)果只能作為感染的輔助診斷。所有結(jié)果應(yīng)結(jié)合流行病學(xué)資料進行隨訪觀察，以避免報告假陽性結(jié)果。

南京市HIV抗體初篩陽性標本復(fù)檢與確證結(jié)果分析有兩點結(jié)論：一是隨著各篩查實驗室化學(xué)發(fā)光法的使用增多，初篩假陽性增多現(xiàn)象應(yīng)引起重視。二是隨著確證實驗室不確定性結(jié)果逐年增多，有必要找到適合中國人群的HIV感染確認標準，找到快速鑒別HIV抗體不確定的方法和策略。