濃縮沼液對棉花黃萎病的防治作用及機理

馮自力 ，董泰麗 ，趙麗紅 ，付傳翠 ，李云卿 ，師勇強 ，馮鴻杰 ，魏鋒 ，張東明 *，朱荷琴 *

（1.棉花生物學國家重點實驗室/中國農業科學院棉花研究所，河南 安陽455000；2.山東民和生物科技有限公司，山東 蓬萊265600；3.中國農業科學院植物保護研究所/植物病蟲害生物學國家重點實驗室，北京100193）

在中國，棉花黃萎病是由大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）引起的1種土傳維管束病害，是棉花產業可持續發展的主要障礙，每年造成巨大的經濟損失[1-2]。大麗輪枝菌主要以菌核或分生孢子萌發產生菌絲對棉花進行侵染，其中微菌核是其主要的初侵染源，在沒有寄主存在條件下，微菌核可以在土壤中存活10年以上[3]。黃萎病的發病情況有明顯的累積效應，在連作地中尤為明顯，發病情況與連作年限相關。隨著棉花的區域化、集約化種植，棉花黃萎病造成的經濟損失逐年增加，其防治是世界性難題。

目前，棉花黃萎病的防治方法有化學農藥防治、培育抗病品種[2]、生物防治[4]等。其中，化學農藥大量使用造成水體、土壤污染，土壤生物多樣性銳減，病原菌產生抗藥性等系列問題；培育抗病品種年限較長，黃萎病菌遺傳分化嚴重，品種抗性易喪失；生防菌往往表現為定植能力差，對生存環境要求嚴格，在大田防治中往往難以取得預期防效。有機肥防治病蟲害已經有不少報道，如防治黃瓜枯萎病[5-6]和抑制橄欖黃萎病[7]等，同時有機肥中含有大量的 N、P、K等大量元素及Fe、B、Zn等微量元素，不僅可以改良因長期使用化肥而引起的土壤板結、土壤有機質含量降低等問題，也可以改善因長期耕作而導致的土壤微量元素匱乏、病原菌數量增加等問題[8]，增強植物抗性[9]、增加作物產量[10-12]、為拮抗菌提供營養等。因此，有機肥防治土傳病害已然成為1種重要的防治措施[13]。

生產上使用的有機肥大多為固體有機肥，雖然可以有效防治病害，但由于自身局限性不能采用灌根、噴施處理，在作物的生育期各階段施用。隨著大規模集約化養殖業的發展，沼液、沼渣、沼氣逐漸進入人們的視野。目前，用沼液噴施、灌溉防治病蟲害已有不少報道[14-16]。

棉花專用“新壯態”濃縮沼液（Concentrated biogas slurry）水溶肥是由中國農業科學院棉花研究所與山東民和生物科技有限公司共同研制生產的，主要成分為有機質（2.5%）、腐殖酸（10.2 g·L－1）、全氮（2.8 g·L－1）、硝態氮（1.7 g·L－1），并含有氨基酸及多種微量元素。本研究通過分析該產品對黃萎病初侵染源微菌核和分生孢子萌發的抑制作用，對棉花黃萎病的防治效果及防御相關基因在葉片中表達量的影響等，明確濃縮沼液防治棉花黃萎病的作用機理，為綠色高效防治棉花黃萎病奠定理論基礎。

1 材料與方法

1.1 供試材料

濃縮沼液由山東民和牧業股份有限公司提供；試驗所用棉花品種為“魯棉研21”；棉花黃萎病菌株為大麗輪枝菌Vd080，菌種保藏號：CGMCC No.5904，為強致病力菌株，由本實驗室保存。

1.2 濃縮沼液對棉花黃萎病菌的抑制效果測定

1.2.1菌落生長速率測定。采用生長速率法[17]：在超凈工作臺中，將濃縮沼液用滅菌水稀釋成不同體積分數，每處理取2mL，與98mL冷卻至60℃的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基 （Potato dextrose agar medium，PDA）混合均勻，倒入滅菌培養皿內，制成含濃縮沼液0.25%（體積分數，下同）、0.50%、1.00%、2.00%、4.00%、6.00%的培養基平板。每處理 4 個平板，空白對照（Control check，CK）用滅菌水代替。在超凈工作臺中，用打孔器（φ＝5 mm）在活化7 d的Vd080菌落邊緣打取菌餅，然后把菌餅接入制備好的培養基平板中心，每個培養皿中接1個菌餅，放入25℃恒溫培養箱中暗培養，分別于第5天和第9天采用十字交叉法測量菌落直徑，計算各處理菌落直徑抑制生長率。菌落生長抑制率（%）=[（對照菌落直徑－菌餅直徑）－（處理菌落直徑－菌餅直徑）]/（對照菌落直徑－菌餅直徑）×100。

1.2.2菌絲形態觀察。用插片培養法[18]觀察濃縮沼液中揮發性氣體對Vd080菌絲形態的影響。將直徑為40 mm、高10 mm的無蓋培養皿置于直徑90 mm、高15 mm的培養皿中，把冷卻至60℃的PDA培養基倒入直徑為40 mm的培養皿內，冷卻凝固后，在培養皿中心處接種新鮮的Vd080菌餅（φ＝5 mm）。在距離菌餅 5 mm處，用無菌鑷子取無菌蓋玻片，以45°角斜插入培養基內。在直徑為90 mm的培養皿內分別加入5 mL體積分數2.00%、4.00%、8.00%的濃縮沼液，以無菌水為對照。25℃暗培養5 d后觀察菌絲形態。

1.2.3產孢量測定。參考張蕓等[17]將Vd080接種于 Czapek 液體培養基中，25 ℃ 140 r·min－1震蕩培養7 d。在超凈工作臺中，用3層無菌紗布過濾培養液，稀釋至分生孢子含量1×107mL－1，備用。

將濃縮沼液稀釋成一系列體積分數，每處理取1 mL與24 mLCzapek液體培養基混勻，使濃縮沼液的體積分數為 0.50%、1.00%、1.50%、2.00%、4.00%，每處理 3次重復，分別加入 100 μL的棉花黃萎病分生孢子懸浮液，25℃振蕩培養，分別于4 d和6 d用血球計數板計數，計算分生孢子含量和產孢量抑制率。產孢量抑制率（%）＝[（對照分生孢子含量－處理分生孢子含量）/對照分生孢子含量]×100。

1.2.4分生孢子萌發率測定。采用凹玻片懸滴法[19]：棉花黃萎病分生孢子懸浮液用滅菌擦鏡紙雙層過濾，分生孢子體積分數稀釋至1×106mL－1。將濃縮沼液按照一定比例加入到Czapek液體培養基中定容至1.3 mL，分別加入200 μL的分生孢子懸浮稀釋液（1×106mL－1）充分混勻，配制成濃縮沼液體積分數為0.25%、0.50%、1.00%、2.00%、4.00%、6.00%、8.00%、10.00%的 Czapek液體培養基，重復3次。吸取20 μL的不同體積分數的Czapek液體培養基于蓋玻片上，倒置于凹槽內，用無菌水密封。將凹玻片于25℃恒溫保濕培養，3 h后鏡檢分生孢子萌發情況，每個重復5個視野，對照為Czapek液體培養基，計算分生孢子萌發率和抑制率。分生孢子萌發率（%）＝萌發分生孢子數/分生孢子總數×100，分生孢子萌發抑制率（%）＝[（對照分生孢子萌發率－處理分生孢子萌發率）/對照分生孢子萌發率]×100。

1.2.5微菌核萌發率測定。參考Wang等[20]制備pH 10.0的基礎改良培養基 （Basal agar medium modified，BMM）[21]，在培養基表面鋪 2 層滅菌的玻璃紙，用1×106mL－1的大麗輪枝菌分生孢子懸浮液涂布，每皿（φ＝90 mm）涂布 100 μL，23 ℃暗培養20 d，備用。將玻璃紙上的菌核和菌絲用蓋玻片輕輕刮下，加水劇烈震蕩，過篩（φ＝38 μm），充分洗滌，除去菌絲及分生孢子，用移液槍吸取微菌核和水的混合液并移至1.5 mL離心管中。菌核現洗現用。

將濃縮沼液按照一定比例加入到Czapek液體培養基中，充分混勻，使濃縮沼液的體積分數為0.25%、0.50%、1.00%、2.00%、4.00%、6.00%、8.00%和10.00%。將微菌核加入1.5 mL不同體積分數的濃縮沼液稀釋液中，25℃ 150 r·min－1振蕩培養24 h，在顯微鏡下觀察菌核萌發情況。每個處理重復3次，每次觀察100個微菌核的萌發情況。

1.3 濃縮沼液對棉花黃萎病防治效果測定

1.3.1溫室噴霧濃縮沼液對棉花黃萎病防治效果測定。將無菌沙子與蛭石以體積比4∶6充分混勻，分裝于直徑6 cm、高10 cm的無底紙缽中；用50～60℃熱水浸泡魯棉研21號種子6 h后，每缽播種8～10粒，覆蓋滅菌沙子厚2～3 cm。棉苗出齊后，每缽留5～6株長勢相同的棉苗。在日光溫室內，每個處理隨機擺放，環境溫度控制在25～28℃，土壤相對濕度控制在60%以上，光線良好。

棉苗第1片真葉露尖時，分別用體積分數為0.25%、0.50%、1.00%、2.00%、4.00%、6.00%、8.00%和10.00%的濃縮沼液稀釋液對棉苗進行葉面噴施處理，每個處理30 mL，每6缽為 1個處理，每個處理重復4次，清水噴施為對照處理。4 d后，采用無底紙缽蘸菌液法[22]，接種Vd080分生孢子懸浮液（1×107mL－1），每缽 10 mL；接菌 4 d 后，對棉苗進行第2次噴施處理；25 d后根據實際發病情況進行調查，按5級分級標準進行病情指數調查，分級標準參考朱荷琴等[22]的方法，計算病情指數及防治效果。病情指數＝[Σ（各級病株數×相應病級）/（調查總株數×4）]×100；防治效果（%）＝（對照病情指數－處理病情指數）/對照病情指數×100。

1.3.2溫室灌根濃縮沼液對棉花黃萎病防治效果測定。采用無底紙培育棉苗，方法同1.3.1，出苗后保留5～6株長勢相同的棉苗，當第1片真葉露尖時，用體積分數 0.25%、0.50%、0.75%、1.00%、1.25%、1.50%和1.75%的濃縮沼液對棉花進行灌根處理，每缽16 mL，每6缽為1個處理，每個處理重復4次，清水灌根為對照處理，灌根處理4 d后接菌，接菌4 d后，對棉苗進行第2次灌根處理。25 d后調查病情指數及防治效果，調查方法和計算方法同1.3.1。

1.3.3重病田滴灌濃縮沼液對棉花黃萎病防治效果測定。濃縮沼液滴灌試驗于中國農業科學院棉花研究所黃萎病人工病圃內進行。病圃統一施用底肥，2016年 4月下旬播種。于 5月30日、6月 15日、6月 21日、7月 14日、7月 29日和 8月5日對棉花進行灌根處理。其中，根部滴灌設置為4個劑量， 分別為濃縮沼液 （原液）45 L·hm－2、75 L·hm－2、120 L·hm－2、150 L·hm－2，隨清水滴灌，對照為清水滴灌，每次滴灌用水量為150 m3·hm－2；每個處理行長3 m，行寬0.6 m，每行留苗 10～15株；每處理3行區，重復4次。

1.4 棉花種子萌發率及生物量的測定

用3%（體積分數）的H2O2浸泡魯棉研21號種子 30 min，分別用體積分數 0.25%、0.50%、1.00%和2.00%的濃縮沼液對魯棉研21號浸種處理8 h，再將種子均勻排列在墊有2層紗布的培養皿內，每個處理重復4次，每個重復30粒，置于25℃恒溫培養箱保濕培養，3 d后統計萌發率、芽長，并種于滅菌的蛭石中，生長15 d后，分別測定其株高、根長和鮮物質質量。

1.5 棉花葉片活性氧含量觀察

對脫絨的魯棉研21號種子進行表面消毒，方法同1.4，無菌水浸泡12 h后，播種，方法同1.3.1。待2片真葉完全展開后，用1.25%的濃縮沼液進行灌根處理，4 d后接種Vd080，12 h后取樣，清水灌根后接菌為對照處理，每個處理重復3次；將處理葉片用無菌水洗凈后置于5 mL離心管內，取適量 3，3-二氨基聯苯胺（3，3-diaminobenzidine，DAB）染液（1 g·L－1，pH 7.5）加入 5 mL 離心管，將葉片浸泡其中進行染色，室溫避光保存8 h；去除染液后，加入95%（體積分數）乙醇去除葉綠素，沸水浴至脫色，用移液槍吸出管內液體，再加入無水乙醇繼續水浴直至葉片綠色完全褪去，取出葉片，將葉片浸泡在70%（體積分數）甘油中，葉片軟化后趕出氣泡，移至載玻片上鏡檢、拍照，根據褐色沉淀顏色深淺比較活性氧的含量。

1.6 棉花防御基因表達量測定

棉種的處理、培育、0.50%濃縮沼液噴施和1.25%濃縮沼液灌根及Vd080的接種等，參考方法1.3。每個處理6個營養缽，每缽留苗5～6株，重復 3 次。 接種 Vd080 后 12 h、24 h、48 h、72 h和96 h取樣。樣品沖洗干凈后，立即用液氮處理，－80℃冷凍保存，備用。采用RNAprep Pure Plant Kit（TIANGEN）提取棉花葉片總 RNA，檢測RNA質量及質量體積分數，并將質量體積分數調制 1 g·L－1；RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit（Thermo）合成 cDNA 第 1條鏈，稀釋 10倍，－80℃冷凍保存。利用Primer premier 5.0軟件設計防御相關的過氧化物酶（Peroxidase，POD）、幾丁質酶 （Chitinase，CHI）、β-1，3-葡聚糖酶（β-1，3-glucanase，GLU）、 杜松烯合酶 （Cadinene synthase，CAD）、 苯丙氨酸解氨酶（Phenylalnine ammonialyase，PAL）和多酚氧化酶（Polyphenol oxidase，PPO）編碼基因的特異性引物，以棉花高度保守的ubiquitin基因為內參，特異引物序列參考卜冰武等[23]，見表1。實時熒光定量聚合酶鏈式反應 （Quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測基因表達量，數據處理參考張蕓等[17]的方法。

1.7 數據統計與分析

數據采用SPSS 17.0軟件進行方差分析，采用最小顯著差異法進行差異顯著性檢驗 （α＝0.05）。

2 結果與分析

2.1 濃縮沼液對棉花黃萎病菌的抑制作用

2.1.1濃縮沼液對棉花黃萎病菌菌落生長的抑制作用。PDA培養基中加入0.25%～6.00%的濃縮沼液后，隨著濃縮沼液體積分數的增加，棉花黃萎病菌的菌落直徑逐漸減小；當濃縮沼液體積分數為6.00%時，棉花黃萎病菌的菌落直徑為0 cm，生長抑制率達到100%。第9天與第5天測定結果一致（表2）。因此，濃縮沼液在一定體積分數范圍內對棉花黃萎病菌具有較好的抑制作用。

表1 防御相關基因特異引物序列Table1 Specific primer sequences of resistance related genes

2.1.2濃縮沼液中揮發性氣體對棉花黃萎病菌菌絲形態的影響。通過顯微鏡觀察發現，經體積分數2.00%、4.00%、8.00%的濃縮沼液處理后，Vd080的菌絲明顯畸形、斷裂（其中4.00%濃縮沼液處理的菌絲形態見圖1）。這些變化可能是由于濃縮沼液中某些揮發性氣體干擾了菌絲生長及細胞壁合成相關酶的活性，從而導致菌絲畸形、斷裂。

2.1.3濃縮沼液對棉花黃萎病菌產孢量的抑制作用。由表3可知，Czapek液體培養基暗培養4 d，對照組（CK）分生孢子含量為 1.55×107mL－1，當加入體積分數0.50%～4.00%的濃縮沼液后，各處理分生孢子含量均低于對照。高于1.50%的濃縮沼液處理分生孢子含量均顯著低于對照；其體積分數在2.00%以上時，產孢量抑制率為100.00%。第6天分生孢子含量測定結果顯示，除體積分數0.50%處理的產孢量抑制率較低外，其他處理的抑制率均較高（表3）。

2.1.4濃縮沼液對棉花黃萎病菌分生孢子萌發的抑制作用。懸滴法測定結果表明，不同體積分數的濃縮沼液處理Vd080分生孢子12 h后，分生孢子的萌發率顯著低于對照，萌發抑制率為21.83%～92.96%，且抑制效果與濃縮沼液體積分數正相關。當濃縮沼液體積分數達10.00%時，分生孢子萌發抑制率為92.96%（表4）。

表2 濃縮沼液對棉花黃萎病菌的抑制作用Table2 Inhibition effect of concentrated biogas slurry on colony diameters of V.dahliae

圖1 濃縮沼液對黃萎病菌菌絲形態的影響Fig.1 Effect of Concentrated biogas slurry on mycelia morphology of V.dahliae

2.1.5濃縮沼液對棉花黃萎病菌微菌核萌發的抑制作用。在加入不同體積分數的濃縮沼液Czapek 液體培養基中，25 ℃ 150 r·min－1振蕩培養大麗輪枝菌微菌核24 h，對照組微菌核萌發率為98.67%，濃縮沼液處理的微菌核萌發率為2.34%～94.00%，均低于對照。當濃縮沼液體積分數高于0.25%時，微菌核萌發率均顯著低于對照（表4）。

2.2 濃縮沼液對棉花黃萎病的防治效果

2.2.1溫室葉面噴施濃縮沼液對棉花黃萎病的防治效果。體積分數4.00%和10.00%的濃縮沼液噴霧處理，影響棉花生長，導致葉片萎蔫；而 0.25%～2.00%濃縮沼液噴霧處理后，棉苗長勢良好，未受影響。體積分數0.50%的濃縮沼液噴霧處理對棉花黃萎病的防治效果最好，為64.89%；隨著濃縮沼液體積分數繼續增加，防治效果逐漸降低（表5）。

2.2.2溫室灌根處理對棉花黃萎病的防治效果。溫室中，不同體積分數的濃縮沼液稀釋液灌根處理棉苗對棉花黃萎病的防治效果為49.56%～78.01%。當濃縮沼液體積分數為1.25%時，防治效果最好；當濃縮沼液體積分數低于1.25%時，防治效果與其體積分數呈正相關；當濃縮沼液體積分數高于1.25%時，防治效果隨著其體積分數增加而降低（表6）。

圖2 濃縮沼液灌根后棉花葉片活性氧爆發情況Fig.2 Concentrated biogas slurry triggered ROS in cotton leaves

表3 濃縮沼液對棉花黃萎病菌產孢量的影響Table3 Effect of concentrated biogas slurry on conidia yield of V.dahliae

表4 濃縮沼液對棉花黃萎病菌分生孢子和微菌核萌發的影響Table4 Inhibitory effect of concentrated biogas slurry on conidia and microsclerotia germination of V.dahliae

2.2.3濃縮沼液滴灌對重病田棉花黃萎病的防治效果。在重病田的調查結果表明，6月28日，濃縮沼液不同劑量處理的棉花黃萎病病情指數均低于對照，但差異不顯著；其防治效果為17.86%～31.76%（表7）。7月21日，濃縮沼液不同劑量處理的棉花黃萎病病情指數顯著低于對照，防治效果最高達25.16%。3次調查結果表明，濃縮沼液滴灌對棉花黃萎病具有一定的防治效果，且以120 L·hm－2的防治效果最好。

2.3 濃縮沼液浸種對棉花種子萌發率及其生物量的影響

播種后3 d時萌發結果表明，隨著濃縮沼液體積分數增大，種子萌發率逐漸增加，芽長呈現先升高后降低的趨勢 （濃縮沼液體積分數為1.00%時，芽長最長），與對照均無顯著差異（表8）。

播種15 d后，棉苗根長隨著濃縮沼液體積分數增大呈先升高后降低的趨勢，與對照相比均無顯著差異；當濃縮沼液體積分數為2.00%時，株高最高，但與對照相比無顯著差異；濃縮沼液處理組，鮮物質質量均高于對照，但與對照差異均不顯著。

2.4 濃縮沼液灌根誘導活性氧爆發

圖2顯示，濃縮沼液灌根處理的棉花葉片中褐色沉淀較多（顏色深），而對照棉花葉片中褐色沉淀較少，表明濃縮沼液可以誘導棉花葉片的活性氧爆發。

表5 溫室中濃縮沼液噴霧對棉花黃萎病的防治效果Table5 Control efficacy of concentrated biogas slurry on cotton Verticillium wilt by foliage spray in greenhouse

表6 溫室中濃縮沼液灌對棉花黃萎病的效果Table6 Control efficacy of concentrated biogas slurry on cotton Verticillium wilt by irrigation in greenhouse

表7 不同劑量濃縮沼液滴灌對重病田棉花黃萎病的防治效果Table7 Control efficacy of concentrated biogas slurry on cotton Verticillium wilt in field by drip irrigation

表8 濃縮沼液浸種對棉花種子萌發率及其生物量的影響Table8 Effect of Concentrated biogas slurry on seeding germination rate and biomass of cotton

圖3 濃縮沼液處理后棉花防御相關基因表達情況Fig.3 Expression levels of defense genes of cotton after treated with concentrated biogas slurry

2.5 濃縮沼液對棉花防御相關基因表達的影響

2.5.1濃縮沼液葉面噴施誘導棉花防御相關基因表達。圖3A～E結果表明，噴施0.50%濃縮沼液4 d后再接種Vd080分生孢子懸浮液處理下，棉花過氧化物酶基因、β-1，3-葡聚糖酶基因、杜松烯合酶基因均在接菌后4 d時表達量最高，分別為對照的2.58倍、4.61倍、21.28倍；幾丁質酶基因、苯丙氨酸解氨酶基因均在接菌后0.5 d時表達量達到最高，最高表達量分別達到對照的2.85、14.92倍。該結果說明濃縮沼液噴施能激活棉苗的防御體系，增強棉花防御相關基因的表達。

2.5.2濃縮沼液灌根對棉花防御相關基因表達量的影響。圖3F～J結果表明，1.25%濃縮沼液灌根處理后，杜松烯合酶基因表達量在0.5 d時為對照的6.16倍，4 d時為對照的 1.52倍；過氧化物、多酚氧化酶基因表達量均在1 d時達到最大，分別為對照的 3.52倍、3.53倍；β-1，3-葡聚糖酶和幾丁質酶基因表達量在0.5 d時最大，分別為對照的4.72倍和3.16倍。上述結果表明，濃縮沼液灌根處理，也可誘導棉花相關防御基因的表達。

3 結論與討論

黃萎病為土傳病害，主要以微菌核或分生孢子形式對作物進行侵染，因此其治理策略主要以抑制菌核萌發、分生孢子萌發[5]為主，同時抑制菌絲在植株體內的生長及提高作物對病原菌的防御能力。本研究表明，濃縮沼液可以顯著抑制菌核萌發、分生孢子萌發、產孢量；黃萎病菌菌絲生長亦被顯著抑制，最高抑制率為100.0%；濃縮沼液內揮發性氣體可以使菌絲變形、斷裂，菌絲結構發生明顯變化；濃縮沼移浸種對出苗率、生物量均無副作用。說明濃縮沼液具有通過熏蒸、灌溉等方法減少土壤中菌核及分生孢子萌發率，從而減少病原基數，降低棉花黃萎病病情指數的潛力。

本研究中，濃縮沼液在溫室噴施、灌根及病圃滴灌對棉花黃萎病均有一定的防治效果。其結果與有機肥可以有效防治土傳病害[24]，如抑制黃瓜枯萎病[25]、甜瓜枯萎病和茄子黃萎病[5]、橄欖落葉型黃萎病[24]、絲核菌[25]等結果相似。

已有大量研究表明，植物在受到病蟲害及不利環境因素，植物通過增加過氧化物酶、幾丁質酶、β-1，3-葡聚糖酶、杜松烯合酶、苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶活性的表達，來增強自身的抗病性。當病菌入侵植物時，過氧化物酶可以產生氧化酚等毒性物質殺死病原菌，同時也參與木質素合成阻止病原菌進一步侵染；幾丁質酶和β-1，3-葡聚糖通過降解細胞壁抑制并殺死病原菌；苯丙氨酸解氨酶抗病機制是參與木質素和植保素的合成；杜松烯合酶是棉酚合成的關鍵酶；多酚氧化酶通過把植物體內相關酚生成醌類，阻止病原菌的侵染。本研究中，濃縮沼液葉面噴施或灌根后，再采用無底紙缽接菌法對棉苗進行接菌（Vd080），與空白對照相比可以大幅提高這些基因的表達量，說明濃縮沼液可以通過誘導部分防御酶基因的大量表達從而增強棉花對黃萎病的抗性。因此，進一步分析其誘導防御基因表達的關鍵成分及誘導防御基因大量表達的分子機制是非常必要的基礎工作。

濃縮沼液是1種以雞糞為原料，經中溫發酵、過濾而得到的液態有機肥。本研究結果表明，濃縮沼液既可以用于葉面噴施，又可以根部滴灌，使用比固態肥更加方便快捷，因此具有較好的應用前景。