慢性阻塞性肺病急性加重期治療前后肺泡灌洗液中皮質(zhì)抑素的變化及意義

施維 馬升俊 鄺敏

（廣西醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院<南寧市第二人民醫(yī)院>呼吸內(nèi)科 廣西 南寧 530031）

慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是呼吸系統(tǒng)常見的疾病，其本質(zhì)為持續(xù)氣道慢性炎癥，在COPD的發(fā)生發(fā)展中起了重要作用，但其確切發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚[1]。慢性阻塞性肺病的炎癥過程和各類炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子的釋放，炎性因子相互促進(jìn)、炎癥反應(yīng)逐級(jí)放大，最終導(dǎo)致氣道炎癥的不可逆性損傷。糖皮質(zhì)激素對(duì)該病的治療有占據(jù)重要地位，但仍有一定的局限性。新的GOLD指南也提出了制定個(gè)體化的治療[2]。皮質(zhì)抑素（cortistatin，CST）是新的生長抑素家族成員，是1996年發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)內(nèi)分泌多肽，具有和生長抑素相似的結(jié)構(gòu)，廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)及外周組織，包括免疫系統(tǒng)、心臟、肝臟、胃腸道、肺及腎臟等，參與多種炎癥性疾病的病理生理過程[3-4]。但在慢性阻塞性肺病的發(fā)病機(jī)制中的作用研究甚少。本研究旨在通過探討皮質(zhì)抑素在慢阻塞性肺病患者肺泡灌洗液中的表達(dá)和炎癥關(guān)系，為慢性阻塞性肺病的治療提供新的思路。

1.對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2016年1月至2018年1月在我院收治的中重度慢性阻塞性肺病急性發(fā)作患者55例，年齡在40歲至75歲，診斷符合最新《慢性阻塞性肺疾病診斷指南》[5]，F(xiàn)EV1%＞30%預(yù)計(jì)值，并排除呼吸衰竭，慢性肺源性心臟病，肺結(jié)核，肺癌，間質(zhì)性肺疾病，糖尿病，冠心病，高血壓，腎衰竭。其中男性38例，女性17例，平均年齡（65.33±8.54）歲。正常對(duì)照組30例，來自不明原因胸痛或健康自愿者，無吸煙史，入院行血液檢查、痰菌檢查，肺功能，胸部影像學(xué)等檢查無異常發(fā)現(xiàn)，排除有冠心病、慢性阻塞性肺病等肺部炎癥病變。其中男性29例，女性11例，平均年齡（43.1±9.6）歲，入選對(duì)象經(jīng)過倫理委員會(huì)同意，簽署支氣管鏡檢查知情同意書。

1.2 材料和方法

正常對(duì)照組和COPD發(fā)作組患者入院當(dāng)天或次日采血，行氣管鏡檢查。治療組達(dá)臨床緩解后采集標(biāo)本。（1）清晨空腹采靜脈血4mL于促凝管，標(biāo)本靜置15rain，1000r/rain離心15rain，取血清約1.5mL于EP管，-20℃凍存。（2）所有研究對(duì)象在肺功能測定之前均休息20min，然后在肺功能檢測醫(yī)師指導(dǎo)下使用德國耶格肺功能儀測定肺功能，包括FEV1%pred和FEVl/FVC指標(biāo)。（3）行支氣管鏡檢查肺泡灌洗術(shù)，用生理鹽水灌洗，總量60～100mL，回收30～50%，所得肺泡灌洗液進(jìn)行預(yù)處理，取上清，同時(shí)檢測細(xì)胞學(xué)分類和皮質(zhì)抑素的測定。細(xì)胞學(xué)分類根據(jù)總細(xì)胞計(jì)數(shù)，以PBS混懸細(xì)胞沉淀，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×106個(gè)細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液，甩片機(jī)甩片，Wright-Giemsa染色，在高倍鏡下按一定方向 數(shù)200個(gè)除上皮細(xì)胞以外的有核細(xì)胞，分別計(jì)算出嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等細(xì)胞所占細(xì)胞總數(shù)的百分比。皮質(zhì)抑素測定采用放射免疫法（美國Phoenix Pharmaceuticals公司提供，批號(hào)20170901），按照放射免疫商品試劑盒說明書進(jìn)行操作，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線讀取樣品皮質(zhì)抑素含量，以pg/ml表示。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以（±s）表示，采用方差分析和q檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 BALF細(xì)胞學(xué)檢測

三組BALF淋巴細(xì)胞百分比差異均無統(tǒng)計(jì)，慢阻肺組BALF嗜中性粒細(xì)胞百分比顯著高于對(duì)照組且巨噬細(xì)胞百分比低于對(duì)照組（P＜0.05）見表1。

表1 3組治療前后肺功能結(jié)果（±s）

表1 3組治療前后肺功能結(jié)果（±s）

注：A組：正常對(duì)照組，B組：慢性阻塞性肺病患者急性加重組。C組：慢性阻塞性肺病患者治療組。與A組比較，#P＜0.05。

組別 例數(shù) 嗜中性粒細(xì)胞（%） 淋巴細(xì)胞（%） 巨噬細(xì)胞（%）A 組 30 9.56±4.55 2.1±3.25 87.53±7.78 B 組 55 28.12±7.45# 2.46±3.2 68.47±12.16#C 組 55 23.22±6.71# 2.3±4.52 73.54±16.23#

2.2 皮質(zhì)抑素和C反應(yīng)蛋白水平

慢阻肺組BALF皮質(zhì)抑素水平和C反應(yīng)蛋白水平顯著高于對(duì)照組（均P＜0.05）見表2。

表2 3組患者治療前后 BALF皮質(zhì)抑素和C反應(yīng)蛋白水平（±s）

表2 3組患者治療前后 BALF皮質(zhì)抑素和C反應(yīng)蛋白水平（±s）

注：A組：正常對(duì)照組，B組：慢性阻塞性肺病患者急性加重組。C組：慢性阻塞性肺病患者治療組。與A組比較，#P＜0.05，與B組比較，*P＜0.05。

組別 例數(shù) 皮質(zhì)抑素（ng/ml）C反應(yīng)蛋白（mg/L） FEV1% FEV/FVC A 組 23 18.673±5.453 5.45±2.1 86.54±10.25 82.34±11.5 B 組 45 46.348±25.322# 53.647±29.38# 45.9±12.7# 61.34±11.25#C 組 45 43.68±26.441# 26.44±13.38*# 56.77±13.46*# 67.58±18.25*#

2.3 BALF皮質(zhì)抑素和C反應(yīng)蛋白水平相關(guān)性分析

COPD患者治療前后BALF中皮質(zhì)抑素與C反應(yīng)蛋白無明顯相關(guān)性，分別為治療前比較（r=0.221，P＞0.05），治療后比較（r=0.280，P＞0.05）。

3.討論

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一種常見的以持續(xù)性呼吸道癥狀持續(xù)氣流受限為特征的可以預(yù)防和治療的疾病[2]，由于氣流受限和呼吸道癥狀的持續(xù)存在，其內(nèi)在的表現(xiàn)為慢性氣道炎癥造成肺泡結(jié)構(gòu)的破壞，氣道重塑。氣道內(nèi)出現(xiàn)巨噬細(xì)胞增加，中性粒細(xì)胞活化，在疊加哮喘時(shí)還出現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞增加的炎癥改變[6]。引起一系列炎癥因子和介質(zhì)的釋放，因而其慢性炎癥機(jī)制復(fù)雜，迄今未能完全闡明。

皮質(zhì)抑素已被證明來源于生長抑素的神經(jīng)肽類，可發(fā)揮不同于生長抑素功能的神經(jīng)肽類[7]。2005年ALLIA用RT-PCR檢測出皮質(zhì)抑素可分布于甲狀腺，腎上腺，肺，腸道等外周組織器官中，并能調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)分泌激素的釋放[8]。CST能作用于淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞，減少炎癥因子的生成并促進(jìn)抗炎因子的釋放，參與免疫炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)過程[9]。但皮質(zhì)抑素發(fā)揮生理作用的信號(hào)通路還在研究，其特異性受體沒有準(zhǔn)確定論[10]。近年來有關(guān)皮質(zhì)抑素在一些炎癥性疾病的研究成為其功能學(xué)研究的重大突破。體外研究證實(shí)CST能夠抑制活化的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、白介素-12（interleukin-12，IL-12等，在膿毒血癥、三硝基苯磺酸（TNBS）所致的結(jié)腸炎和膠原所致的關(guān)節(jié)炎等嚙齒類動(dòng)物模型中，CST能夠改善臨床癥狀，減輕組織病理性改變參考文獻(xiàn)[11]。這些數(shù)據(jù)表明，CST的效應(yīng)與降低Thl介導(dǎo)的自身免疫和炎癥反應(yīng)，以及增加調(diào)節(jié)T細(xì)胞維持免疫耐受有關(guān)。在肺組織的研究中，廖程程，陳亞紅[12]等研究發(fā)現(xiàn)慢阻肺組大鼠血漿皮質(zhì)抑素顯著高于對(duì)照組，BALF中皮質(zhì)抑素含量也顯著高于對(duì)照組，而大鼠肺組織皮質(zhì)抑素較對(duì)照組升高超過1倍。本研究針對(duì)皮質(zhì)抑素可能存在的炎癥抑制作用，檢測了慢性阻塞性肺病急性加重和激素治療緩解后肺泡灌洗液的皮質(zhì)抑素水平，結(jié)果提示兩組慢阻肺患者組BALF中皮質(zhì)抑素含量均顯著高于正常對(duì)照組，兩組慢阻肺患者組中C反應(yīng)蛋白亦明顯高于正常對(duì)照組，但皮質(zhì)抑素與C反應(yīng)蛋白無明顯相關(guān)性，C反應(yīng)蛋白的增高往往反應(yīng)的是急性炎癥狀態(tài)，與感染關(guān)系較大，結(jié)果有可能說明皮質(zhì)抑素未能提示與感染誘發(fā)的氣道炎癥的相關(guān)性。而激素治療后慢性阻塞性肺病組與未治療前組相比無顯著性差異，說明皮質(zhì)抑素在慢性阻塞性肺病緩解過程中的變化仍需進(jìn)一步分析。

在慢性阻塞性肺病的發(fā)病機(jī)制中，往往存在炎癥性Th細(xì)胞的炎癥極化失衡[13]與調(diào)節(jié)性／抑制性T細(xì)胞失衡的學(xué)說[14]，盡管激素在慢性阻塞性肺病的急性加重期和慢性緩解期都是可推薦用藥，但其療效和療程仍需個(gè)體化分析。本研究初步發(fā)現(xiàn)皮質(zhì)抑素在慢阻肺患者肺泡灌洗液中表達(dá)升高，但皮質(zhì)抑素作為一種能調(diào)節(jié)神經(jīng)激素釋放的神經(jīng)內(nèi)分泌多肽如何參與炎癥過程，是否作為一種有效的炎癥抑制因子，為慢性阻塞性肺病治療的新思路目前尚需進(jìn)一步的臨床研究。