清熱益氣中藥對2型糖尿病小鼠胰島細胞凋亡及炎癥因子表達的影響

王 松，房 芳，魯 冰，籍胤璽，付莉萍

（南陽市中心醫院，河南 南陽 473009）

糖尿病是常見的一種慢性內分泌系統疾病，其發病率正在逐年增加[1]。2型糖尿病是常見的糖尿病類型，占糖尿病95%以上。2型糖尿病早期階段主要為胰島素抵抗，且隨著糖尿病病程的延長，胰島β細胞功能減退，導致2型糖尿病病情進一步惡化[2-3]。近年來中醫藥在2型糖尿病治療中取得了良好效果[4-6]。本文研究清熱益氣中藥對2型糖尿病小鼠胰島細胞凋亡及炎癥因子表達的影響。

1 實驗材料

由武漢生物制品研究所提供的SPF級ICR小鼠60只，體質量（18±2）g，生產許可證號：SCXK（鄂）2008-0003。清熱益氣中藥組成：黃連9 g，黃芩9 g，人參9 g，黃芪9 g，甘草6 g；格列美脲片（國藥準字H20010571，山東新華制藥股份有限公司）。小鼠胰島素（INS）試劑盒（美國Sigma公司），鏈脲菌素（STZ）（美國Sigma公司），小鼠C-反應蛋白（CRP）試劑盒（上海恒斐生物科技有限公司），小鼠腫瘤壞死因子-α（TNF-α）試劑盒（上海恒斐生物科技有限公司），小鼠白介素-6（IL-6）試劑盒（上海恒斐生物科技有限公司）。美國Thermo離心機，日本日立7160型全自動生化分析儀，雅培血糖儀。

2 實驗方法

2.1 清熱益氣中藥制備 取黃連9 g，黃芩9 g，人參9 g，黃芪9 g，甘草6 g，加水300 mL浸泡30 min后煎煮40 min，將藥渣去掉，再繼續煎煮40 min，以60 ℃恒溫條件下將其濃縮成1 mL含生藥2.5 g，放置于4 ℃條件下保存。

2.2 2型糖尿病小鼠模型建立 60只小鼠晝夜交替12 h，維持室溫23～25 ℃，適應性喂養1周。隨機分為5組，每組12只。對照組給予普通飼料，剩余48只小鼠給予高脂高糖飼料（成分：72%普通飼料、3%蛋黃、10%豬油、15%蔗糖），觀察活動狀態、飲食狀況，喂養第3周后，進食12 h，腹腔注射STZ，劑量為30 mg/kg一次性腹腔注射，喂養1周，于小鼠尾靜脈取血，測定小鼠空腹血糖3次，取空腹血糖＞11.1 mmol/L的小鼠為2型糖尿病小鼠。

2.3 實驗分組 48只小鼠造模成功41只，取其中40只用作實驗。12只正常小鼠取10只用作實驗。分為對照組、模型組、格列美脲組、清熱益氣低劑量組、清熱益氣高劑量組，10只/組。對照組給予等劑量生理鹽水灌胃；模型組于造模后給予等劑量生理鹽水灌胃；格列美脲組于造模后給予格列美脲4 g（/kg·d）灌胃，1次/d；清熱益氣低劑量組于造模后按生藥4 g（/kg·d）灌胃，1次/d；清熱益氣高劑量組于造模后按生藥12 g（/kg·d）灌胃，1次/d，每組灌胃4周，灌胃量均為5 mL/次。

2.4 小鼠空腹血糖測定 血糖測定采用尾靜脈取血，應用羅氏血糖試紙讀數法測定。

2.5 血清標本采集 灌胃4周后，取小鼠4只/組，眼球取血0.6 mL，以離心半徑15 cm，轉速3 000 r/min，離心10 min，分離血清，放置于-20 ℃下冷凍保存，待測。2.6 血清炎癥因子測定 采用酶聯免疫吸附法測定CRP、TNF-α和IL-6含量，嚴格按照試劑盒說明書標準測定。

2.7 統計學處理 以SPSS19.0軟件分析，針對本研究數據中計量資料以t檢驗，針對本研究數據中計數資料以卡方檢驗。

3 結果

3.1 各組小鼠空腹血糖比較 見表1。

3.2 各組小鼠INS和ISI變化比較 見表2。

3.3 各組小鼠血清炎癥因子含量比較 見表3。

表1 各組小鼠空腹血糖比較（x± s ，n = 10）

表2 各組小鼠INS和ISI變化比較（x± s ，n = 10）

表3 各組小鼠血清炎癥因子含量比較（x± s ，n = 10）

4 討論

中醫學認為2型糖尿病屬“消渴病”范疇，認為其基本病機為虛、痰、濁、瘀互結，其中瘀、濁、痰均屬內生之毒范疇，內生之毒，郁而化熱，造成熱毒郁結、耗傷[7]。臨床上應以清熱解毒，益氣生津為治療法則。本研究采用清熱益氣中藥，其中黃連、黃芩清熱解毒，人參、黃芪益氣，甘草調和諸藥。本研究結果表明，清熱益氣中藥可降低空腹血糖，降低INS而提高ISI，從而改善患者胰島功能。

近年來研究證實，炎癥因子與2型糖尿病發生、發展密切相關。CRP是一種急性時相蛋白，主要經細胞因子刺激肝臟而產生[8]。有學者研究證實新發病或已確診2型糖尿病CRP明顯升高[9]。IL-6主要由2條糖蛋白鏈構成的一種多肽，是重要的細胞因子之一，主要來源于內皮細胞、脂肪細胞和巨噬細胞，已被證實與機體多種病理生理過程相關[10]。研究證實，心血管疾病及2型糖尿病患者體內IL-6含量較高，且胰島素分泌不足和胰島素抵抗導致的高血糖均能夠促進胰島素細胞分泌大量的IL-6，進一步促進T淋巴細胞過度激活和促進B淋巴細胞分化，能夠導致胰島β細胞死亡，以及加重胰島素抵抗[11-12]。TNF-α主要由巨噬細胞、單核細胞和脂肪細胞產生，體內TNF-α含量與脂肪組織量成正相關[13-14]。有學者研究證實TNF-α可顯著降低胰島素的敏感性[15]。本文研究結果表明，清熱益氣中藥可降低CRP、TNF-α和IL-6含量，認為其可改善慢性炎癥，提高靶器官對胰島素的敏感性，進一步能夠改善胰島素抵抗癥狀。

綜上所述，清熱益氣中藥可降低2型糖尿病小鼠空腹血糖、胰島素，增加胰島素敏感指數，降低炎癥因子CRP、TNF-α和IL-6表達。