玄麥利咽口服液質量標準研究

若存

1.湖南國華制藥有限公司，湖南 長沙 410013；2.湖南省中醫藥研究院，湖南 長沙 410013；3.湘潭醫衛職業技術學院，湖南 湘潭 411102

玄麥利咽口服液系由玄參、麥冬、射干、桔梗、訶子等多味藥材研制而成的中藥6類新藥，具有滋陰清熱、散結利咽功效，用于熱盛津傷，熱毒內盛所致的口干、咽痛、咽部有異物，分泌物不易咳出，干燥感、刺激感及失音等癥。為了有效地控制其內在質量，對方中的主要藥材玄參、桔梗、訶子分別進行了TLC薄層鑒別，對射干中的次野鳶尾黃素采用高效液相色譜法進行了含量測定[1]。本文建立的TLC薄層鑒別方法與HPLC測定含量的方法為玄麥利咽口服液的質量控制提供了依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-20AT高效液相色譜儀(LabSolution色譜數據處理軟件，日本島津)；AL204電子分析天平(梅特勒-托利多國際股份有限公司)。

1.2 材料 玄參(批號：121008-201308)、桔梗(批號：121028-201612)、訶子對照藥材(批號：121015-201605)、次野鳶尾黃素對照品(批號：111557-200602)均由中國食品藥品檢定研究院提供；玄麥利咽口服液由課題組提供，批號分別為：20170311、20170405、20170410、20170415、20171012、20171022、20171102。甲醇、磷酸均為色譜純，其它試劑均為分析純。2TLC鑒別[1]

2.1 玄參的TLC鑒別 分別取三個批號(20170405、20170410、20170415)的玄麥利咽口服液10 mL，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內徑1.2 cm，柱高20 cm)，用水洗脫至流出液無色，再用乙醇洗脫，收集洗脫液25 mL，蒸干，殘渣加適量甲醇溶解，溶液加到中性氧化鋁柱(100～200目，內徑為1.2 cm，1.2 g，濕法上柱)上，再用甲醇15 mL洗脫，洗脫液濃縮至1 mL，分別作為供試品溶液。另取玄參對照藥材1 g，加甲醇25 mL，浸泡1 h，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水25 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為對照藥材溶液。按處方取除玄參外的藥材，照玄麥利咽口服液制備工藝制備缺玄參的陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制成缺玄參的陰性樣品溶液。照TLC法試驗，吸取上述5種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸(12∶3.5∶1∶0.05)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜圖中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，且缺玄參陰性樣品無干擾。見圖1。

2.2 桔梗的TLC鑒別 分別取三個批號(20170405、20170410、20170415)的玄麥利咽口服液10 mL，水浴蒸干，浸膏分別加75%甲醇25 mL，20%鹽酸2 mL，80 ℃加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，加乙酸乙酯振搖提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，分別作為供試品溶液。取桔梗對照藥材2 g，自加75%甲醇25 mL起，按供試品同法制成對照藥材溶液。按處方取除桔梗外的藥材，照玄麥利咽口服液制備工藝制備成缺桔梗的陰性樣品，再按供試品方法制成缺桔梗陰性樣品溶液。照TLC法試驗，分別吸取上述5種液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醚(2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜圖中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，缺桔梗陰性樣品無干擾。見圖2。

2.3 訶子的TLC鑒別 分別取三個批號(20170405、20170410、20170415)的玄麥利咽口服液6 mL，通過處理好的聚酰胺柱(30～60目，內徑為1 cm，柱高為15 cm，用水濕法上柱)上，先用水洗至流出液無色，再用乙醇洗脫，收集洗脫液25 mL，蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解，分別作為供試品溶液。另取訶子對照藥材2 g，加甲醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，作為對照藥材溶液。按處方取除訶子外的藥材，照玄麥利咽口服液制備工藝制備成缺訶子的陰性樣品，再按供試品方法制成缺訶子的陰性樣品溶液。照TLC法試驗，吸取上述5種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠 g薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與訶子對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點，缺訶子陰性樣品無干擾。見圖3。

3 含量測定

3.1 色譜條件與系統適用性試驗檢測 波長：266 nm；色譜柱：TECHI C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-0.2%磷酸溶液(53∶47)；柱溫:室溫；進樣量：10 μL。流量：1.0 mL/min；在上述條件下測定，按次野鳶尾黃素峰計理論板數應不低于4000。

3.2 對照品溶液的制備 取次野鳶尾黃素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含11.94 μg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備 精密吸取玄麥利咽口服液0.4 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3.4 陰性樣品的制備 按玄麥利咽口服液處方、工藝制備成缺射干陰性樣品，再“3.3”項下方法制成缺射干的陰性樣品溶液。

3.5 測定波長的確定 取次野鳶尾黃素對照品的甲醇溶液(C=11.94 μg· mL-1)，在紫外分光光度計200～700 nm波長間掃描。見圖4。

3.6 專屬性試驗 按“3.1”項下設定的色譜條件， 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性對照溶液各10 μL，注入液相相色譜儀，見圖5。

3.7 線性關系考察 精密吸取次野鳶尾黃素對照品溶液(C=11.94 μg·mL-1)1、5、10、15、20 μL進樣，測定其峰面積積分值，以進樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，其回歸方程為：Y=6E+06x，r=0.9999。結果表明次野鳶尾黃素在0.01194～0.2388 μg范圍內具有良好的線性關系。

3.8 穩定性考察 分別精密吸取供試品溶液于0、4、8、12、24 h進樣，每次進10 μL，以次野鳶尾黃素峰面積積分值計，RSD為3.19%，結果說明室溫條件下供試液24 h內穩定。

3.9 精密度考察 精密吸取“3.3”項下供試品溶液，重復進樣6次，每次進10 μL，以次野鳶尾黃素峰面積積分值計，RSD為0.32%，表明儀器精密度良好。

3.10 重復性考察 取批號20170311樣品，6份，按“3.3”項下制備，測定，計算次野鳶尾黃素含量，以含量計，RSD為1.55%，結果說明方法重復性好。

3.11 中間精密度試驗 取批號20170311樣品，6份，按“3.3”項下制備(由不同人員操作)，用不同的液相色譜儀進行測定，計算次野鳶尾黃素含量，以含量計，RSD為1.52%，結果說明中間精密度良好。

3.12 樣品加樣回收率試驗 精密量取已知含量為0.236m g·mL-1的樣品(批號20170311)溶液0.2 mL，6份，分別精密加入次野鳶尾黃素對照品溶液(12.05 μg.mL-1)4 mL，即0.0482 mg，按上述供試品溶液制備方法制備，測定含量，計算回收率，平均值為102.52%，RSD為2.85%。，結果見表1。

3.13 含量測定 取6批中試產品， 按上述方法測定，結果見表2。

表1 回收率測定結果

表2 含量測定 (n=3)

4 討論

4.1 薄層鑒別 玄參為方中的君藥，具有清熱涼血、滋陰降火、解毒散結的功能，主要含環烯醚萜和苯丙素2大類成分，包括珊瑚苷、毛蕊花糖苷、苯乙醇苷、哈巴苷、哈巴俄苷、麥角甾苷、安格咯苷C等。上述成分是玄參抗炎、抗血小板聚集及調節免疫功能的主要有效成分[2-4]，由于本品其他藥味含苷類成分多，鑒別時相互干擾，所以本試驗采用D101型大孔樹脂柱及氧化鋁柱純化供試品，去除了干擾成分，結果玄參特征斑點清晰，玄參陰性樣品無干擾。桔梗為方中臣藥，具有宣肺，利咽，祛痰，排膿的功能。主要成分為皂苷類，包括桔梗皂苷A、B、D，遠志苷D、D2等成分，藥理研究表明上述成分有抗炎、抗氧化、止咳祛痰作用[5-6]。本試驗對供試品采用酸水解，三氯甲烷提取苷元的方法，結果桔梗特征斑點清晰，桔梗陰性樣品無干擾。訶子為方中臣藥，具有澀腸止瀉、斂肺止咳、降火利咽的功能。主要含酚酸類，沒食子酰葡萄糖類，其中以莽草酸、兒茶酸、沒食子酸和糅花酸的含量較高。藥理研究表明上述成分為抗病毒、抗炎、抗菌及抗氧化的有效成分[7-9]。本法依據訶子所含的酚性成分與聚酰胺形成氫鍵而與復方中干擾成分分離，結果訶子特征斑點清晰，訶子陰性樣品無干擾。

4.2 含量測定

4.2.1 含量指標的選定 玄參與麥冬為方中君藥，實驗中曾對其主要成分進行了含量測定試驗，結果表明陰性有干擾。射干為方中臣藥，主要成分為黃酮類及三萜類化合物等，包括次野鳶尾黃素、野鳶尾黃素、德鳶尾素、鳶尾黃素、射干苷、野鳶尾苷、白射干素等約20個，其中次野鳶尾黃素為治療咽痛喉痹的主要有效成分之一[10-11]，《中國藥典》2015年版規定該成分為射干藥材含量測定指標成分，因此選其作為本品質量控制指標。

4.2.2 樣品的制備 文獻報道復方制劑中對次野鳶尾黃素的純化有很多種方法[12]，本試驗比較了乙酸乙酯萃取法與本品直接取樣經0.22 μm 濾膜過濾法，結果前一種方法提取不完全，而后一種方法簡單，缺射干的陰性樣品無干擾，因此選擇了該法。

4.2.3 樣品的測定 使用所建立的方法對6批中試產品進行次野鳶尾黃素的含量測定，結果表明本法方法準確、靈敏、簡便、快速、重復性好，可作為本產品的質量控制方法。