低密度脂蛋白受體相關蛋白1與胎盤植入及新生兒結局的關系

陳睿 王瑜

河南省人民醫院（鄭州 450003）

胎盤植入指胎盤絨毛異常而侵犯到子宮肌層，也有研究人員稱其為病態附著胎盤。近些年，大量研究證實，胎盤植入產婦可能出現大出血、子宮破裂以及子宮切除等一系列不良妊娠結局，嚴重威脅到產婦及新生兒的健康甚至生命［1-2］。低密度脂蛋白受體相關蛋白1（low density lipoprotein receptor adaptor protein 1，LRP）是近年來發現的一種細胞表面蛋白，屬于一種內吞性受體，系低密度脂蛋白受體基因家族中的一員。LRP1除了在細胞表面被發現以外，還在人類血漿以及腦脊液等體液中檢測到［3-4］。低密度脂蛋白受體相關蛋白與血管生成和多種血管疾病有關，但其在滋養細胞調節中的作用尚不完全清楚。近來，研究者通過測定鼠胚體外培養液發現，小鼠低密度脂蛋白受體相關蛋白基因敲除后導致胚胎死亡，提示低密度脂蛋白受體相關蛋白與小鼠胚胎生長、發育以及著床具有一定的相關性［6-8］。本研究的新穎之處是選擇胎盤植入產婦為研究對象探討胎盤植入產婦血清LRP1表達情況，目前該問題尚無研究者涉獵。本研究可分析其表達水平與產婦及新生兒結局的相關性，以為臨床診治提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料本研究選取2016年4月至2017年10月期間于我院分娩的30例胎盤植入產婦以及同期于我院分娩的健康產婦為研究對象。入組標準：（1）經病理證實的胎盤植入產婦；（2）存在既往人工流產史或宮腔操作史產婦；（3）神志、意識正常產婦。（4）臨床資料完整者。排除標準：（1）存在家族遺傳病產婦；（2）合并嚴重慢性疾病產婦；（3）有精神疾病或精神病史產婦；（4）合并惡性腫瘤產婦。本研究已經獲得醫院醫學倫理委員會批準，且受試者均已簽署書面知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 受試者的分組根據LRP1表達水平，將30例胎盤植入產婦分為兩組，其中包含17例低表達組受試者以及13例高表達組受試者。注：低表達組和高表達組分組的具體標準是（6.55±0.78）μg/mL（該水平是普通人群中該蛋白的平均表達水平）［5］。

1.2.2 樣本收集于清晨空腹狀態下，抽取3 mL靜脈血，采用離心機以3 000 r/min轉速條件下離心10 min；取上清液，置于-80℃冰箱中保存待測。

1.2.3 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）測定血清低密度脂蛋白受體相關蛋白 1、Caspase-3、Bax、bcl-2表達水平按照ELISA試劑盒操作說明中要求依次加樣，將標準品與標本分別加入每孔；反應孔采用封板膠紙封住，37℃條件下孵育1.5 h；清洗3次，每次5 min；將生物素化抗體稀釋液加入空白孔，生物素化抗體工作液加入其余孔內，反應孔采用封板膠紙封住；37℃條件下孵育1 h；清洗3次，每次5 min；打開電源，設置檢測程序；加入顯色底物，避光條件下孵育15 min；清洗3次，每次5 min；加入終止液以終止反應，采用酶標儀（芬蘭，Labsystems Multiskan MS）測定各孔450 nm波長條件下光密度值；以標準品濃度以及對應光密度值為依據標準曲線，樣本濃度根據曲線方程進行計算。ELISA試劑盒購自武漢基因美公司。

1.2.4 觀察指標（1）比較胎盤植入產婦與健康對照產婦血清LRP1表達水平；（2）比較胎盤植入產婦與健康對照產婦血清Caspase-3、Bax、bcl-2表達水平；（3）搜集血清LRP1低表達、高表達胎盤植入產婦年齡、生育史、產次、流產史以及剖宮產史等臨床資料并進行比較；（4）比較血清LRP1低表達、高表達胎盤植入產婦血清Caspase-3、Bax、bcl-2表達水平；（5）比較血清LRP1低表達、高表達胎盤植入產婦產后出血、產后輸血以及子宮切除情況；（6）比較血清LRP1低表達、高表達胎盤植入產婦娩出新生兒結局。

1.3 統計學方法采用SPSS 20.0統計分析軟件；計量資料采用均數±標準差表示，多組間比較采用單因素方差分析或者重復測量的方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗；計數資料采用百分率（%）表示，多組間比較采用χ2分析；P＜0.05代表差異存在統計學意義。

2 結果

2.1 兩組受試者LRP1表達水平比較觀察組受試者LRP1表達水平低于對照組［（4.10±0.63）μg/mL vs.（8.16 ± 1.12）μg/mL］，且兩組間差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組受試者LRP1表達水平比較Tab.1 Comparison of LDL receptor associated protein 1 expression level between two groups（n=30）±s

表1 兩組受試者LRP1表達水平比較Tab.1 Comparison of LDL receptor associated protein 1 expression level between two groups（n=30）±s

組別對照組觀察組t值P值例數30 30低密度脂蛋白受體相關蛋白（μg/mL）8.16±0.112 4.10±0.063 17.305 0.001

2.2 兩組受試者Caspase-3、Bax、bcl-2表達水平比較觀察組受試者Caspase-3表達水平高于對照組（0.606±0.082 vs.0.238±0.039）、Bax表達水平高于對照組（0.558±0.073 vs.0.146±0.021）、bcl-2表達水平低于對照組（0.185±0.026 vs.0.540±0.070），且兩組間差異具有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組受試者Caspase-3、Bax、bcl-2表達水平比較Tab.2 The expression levels of Caspase-3，Bax and bcl-2 in two groups were compared（n=30）±s

表2 兩組受試者Caspase-3、Bax、bcl-2表達水平比較Tab.2 The expression levels of Caspase-3，Bax and bcl-2 in two groups were compared（n=30）±s

組別對照組觀察組t值P值Caspase-3 0.238±0.039 0.606±0.082-12.198 0.000 Bax 0.146±0.021 0.558±0.073-9.708 0.001 bcl-2 0.540±0.070 0.185±0.026 16.039 0.000

2.3 兩組胎盤植入產婦一般資料比較調查結果顯示，兩組受試者年齡、生育史、產次、流產史以及剖宮產史等臨床資料均不存在顯著差異（P＞0.05），故可排除上述因素對研究結果造成的影響，數據具有可比性，見表3。

表3 兩組胎盤植入產婦一般資料比較Tab.3 Comparison of general data of two groups of placenta implantation women（n）

2.4 兩組胎盤植入產婦Caspase-3、Bax、bcl-2表達水平比較高表達組受試者Caspase-3表達水平低于低表達組（0.525±0.068vs.0.761±0.092）、Bax表達水平低于低表達組（0.403±0.046vs.0.755±0.088）、bcl-2表達水平高于低表達組（0.268±0.049vs.0.132±0.028），且兩組間差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 兩組胎盤植入產婦Caspase-3、Bax、bcl-2表達水平比較Tab.4 Comparison of expression levels of Caspase-3，Bax and Bcl-2 in two groups of placenta accreta ±s

表4 兩組胎盤植入產婦Caspase-3、Bax、bcl-2表達水平比較Tab.4 Comparison of expression levels of Caspase-3，Bax and Bcl-2 in two groups of placenta accreta ±s

組別低表達組高表達組t值P值例數17 13 Caspase-3 0.761±0.092 0.525±0.068 7.757＜0.05 Bax 0.755±0.088 0.403±0.046 14.516＜0.05 bcl-2 0.132±0.028 0.268±0.049-9.580＜0.05

2.5 兩組胎盤植入產婦產后情況比較高表達組受試者產后出血率高于低表達組（30.77%vs.17.65%）、產后輸血率高于低表達組（20.08%vs.11.76%）、子宮切除率高于低表達組（15.38%vs.0.00%），且兩組間差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表5。

表5 兩組胎盤植入產婦產后情況比較Tab.5 Comparison of postpartum outcomes between two groups of placenta accreta例（%）

2.6 兩組胎盤植入產婦娩出新生兒結局比較兩組受試者娩出新生兒出生體重、Apgar評分、分娩孕周均不存在顯著差異（P＞0.05）；高表達組受試者娩出新生兒病死率高于低表達組（15.40%vs.5.90%），且兩組間差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表6。

表6 兩組胎盤植入產婦娩出新生兒結局比較Tab.6 Comparison of neonatal outcomes of two groups of placenta implanted mothers ±s

表6 兩組胎盤植入產婦娩出新生兒結局比較Tab.6 Comparison of neonatal outcomes of two groups of placenta implanted mothers ±s

組別低表達組高表達組χ2（t）值P值例數17 13分娩孕周（周）36.26±2.68 36.43±2.74-0.171＞0.05出生體重（kg）2.86±0.57 2.89±0.55-0.145＞0.05 Apgar評分（分）1 min 8.90±1.36 8.92±1.44-0.039＞0.05 5 min 9.45±1.63 9.39±1.55 0.108＞0.05病死率［例（%）］1（5.90）2（15.40）-4.765＜0.05

3 討論

LRP1屬于低密度脂蛋白受體超家族成員之一，最初被發現是作為淀粉樣蛋白Aβ以及ApoE內吞受體，隨著研究的不斷深入，發現其可作為活化的α2巨球蛋白、基質金屬蛋白酶-9以及組織型纖溶酶原激活劑等多種配體的細胞信號受體［9-10］。LRP1激活劑可通過NPXY的酪氨酸磷酸化使得細胞信號通路被激活。此外，LRP1還能夠與PDGF受體、結合素類以及uPAR等多種受體相互作用。總的來說，LRP1與細胞的信號通路、遷徙、代謝以及血腦屏障的完整性等多種生物過程相關［11］。研究人員通過破壞小鼠的LRP1基因發現，小鼠胚胎的著床以及繼續發育受阻，分析原因是由于LRP1通過對纖溶酶原激活物抑制物1表達進行調節從而影響其著床，證同時也說明了LRP1的表達水平與胚胎著床密切相關［12-14］。另有研究發現，LRP1在胚胎著床位置侵入的合體滋養細胞、細胞滋養細胞以及體外培養的滋養層細胞中均有表達，提示在胚胎著床時滋養層細胞的侵襲過程中低密度脂蛋白受體相關蛋白扮演重要角色，而胚胎著床植入子宮內膜的前提即為囊胚滋養層細胞的正常增殖與黏附。有研究對移植患者妊娠組與未妊娠組胚胎培養液中LRP1的表達水平進行比較，發現妊娠組胚胎培養液中LRP1的表達量高于未妊娠組，提示LRP1的高表達量與胚胎形態學以及妊娠結局良好相關。由此可以推斷，對LRP1的表達水平進行檢測有利于預測產婦妊娠結局。

胎盤植入能夠造成產婦發生嚴重產后出血、凝血障礙以及臟器受損等多種并發癥、嚴重可造成死亡［15］。近年來我國胎盤植入發病率呈逐年攀升的趨勢，也得到了越來越多產科醫師的幫助。由于胎盤植入產婦主要為瘢痕子宮，手術過程中涉及大量輸血、處理子宮與比鄰器官以及并發癥防治，為了改善胎盤植入產婦及其免除新生兒結局，需要探索有效的生物指標以進行早期診斷以及處理方案的制定。本研究采用ELISA法對胎盤植入產婦與健康對照產婦血清LRP1表達水平進行測定，發現胎盤植入產婦血清LRP1表達水平低于健康對照產婦，提示胎盤植入產婦存在LRP1表達水平下降。LI等［16］發現，脂蛋白受體相關蛋白敲除抑制了HTR-8/SvNo細胞的增殖、遷移、侵襲和管形成，以及誘導細胞凋亡，LRP敲除也顯著降低MMPs、PLGF和VEGF的表達和Wnt/β-catenin信號通路的激活。LRP可能通過血管形成和滋養細胞浸潤來積極調節母體動脈的重塑。該研究的結論與本研究可相互印證，即LRP是滋養層細胞存活和侵襲的關鍵，胚胎植入后母體螺旋動脈的重塑依賴于緊密調節的滋養細胞功能，是確保妊娠成功的關鍵。

為進一步分析LRP1與胎盤植入以及新生兒結局的相關性，本研究將30例胎盤植入患者分為LRP1低表達組與高表達組，通過分析發現，高表達組受試者Caspase-3、Bax表達水平低于高表達組，bcl-2表達水平高于低表達組，且產婦產后出血率、輸血率、子宮切除率以及娩出新生兒病死率均高于低表達組，提示LRP1表達水平降低可上調Caspase-3與bax活性，進而下調Akt的磷酸化以及Bcl-2表達水平［17-18］。已有研究［19］指出，Caspase-3與Bax被激活后與細胞凋亡相關，而敲低LRP1后細胞二者表達水平會增加。本研究的新發現是，LRP1低表達的細胞Bcl-2表達水平降低，而Bcl-2的作用為阻止腫瘤壞死因子所誘導的細胞凋亡。這提示LRP1在促細胞生存與抗凋亡方面具有重要作用，該發現也是本研究的的新穎之處。

綜上所述，胎盤植入患者LRP1表達水平降低，可能通過上調Caspase-3與bax活性，下調Bcl-2表達水平對產婦及新生兒結局造成不良影響。