亞洲人群MTHFR基因多態性與非綜合征性唇腭裂易感性的Meta分析

馬荷花 査菁 張旭 石宏彩 王金玉 陳燕

唇腭裂是新生兒中較為常見的一種先天發育畸形，在不同種族和地域其發病率有很大的差異，其中以亞洲黃種人最高、歐洲白種人次之、非洲黑種人最低[1]。根據其是否伴發有其它各系統的先天畸形，可分為綜合征性和非綜合征性唇腭裂，后者又包括唇裂(CLO)、唇裂合并腭裂(CLP)以及單純性腭裂，CLO和CLP統稱唇裂伴或不伴腭裂(non-syndromic cleft lip and or palate, NSCL/P)[2]。NSCL/P約占整個唇腭裂發病率的70%[3]。

研究表明NSCL/P具有家族遺傳傾向性，其易感性與多組基因相關[4]。這些基因中，5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T受到學者們的關注，研究表明MTHFR基因C677T位點基因多態性在NSCL/P的遺傳中起重要作用[5]，但當前研究存在諸多問題，如單個研究樣本量過少、研究結果不一致，因此，本文采用Meta分析評價亞洲人群中MTHFR基因C677T位點基因多態性與NSCL/P易感性的相關性。

1 資料與方法

1.1 文獻來源

檢索自各數據庫建庫日期至2016-07中國學術期刊全文數據庫(CNKI)、萬方中文科技期刊全文數據庫(WanFang)、中國生物醫學文獻數據庫(CBM)及維普中文科技期刊全文數據庫(VIP)等,檢索詞如下：“非綜合征型唇腭裂”、“5， 10-亞甲基四氫葉酸還原酶”、“基因多態性”，外文數據庫Pubmed、Embase、Web Of Science等，檢索詞如下：“Cleft Lip”、“Cleft Palate”、“MTHFR”，并結合文獻追查納入文獻的參考文獻。

1.2 納入標準

①亞洲人群非綜合征性唇腭裂患者為研究對象； ②設計類型為病例對照研究；③提供病例組和對照組的各基因型頻數；④對照組基因型分布符合哈溫平衡。

1.3 數據提取

提取納入文獻以下信息:第一作者姓名、發表年份、研究國家地區、對照的來源、基因檢測的方法、病例和對照的樣本量、樣本量總數、各個基因型頻數。

1.4 Meta分析

用Stata 12.0統計軟件對所納入文獻進行Meta分析。納入研究間統計學異質性(P>0.10)者，用固定效應模型(fixed-effects model，FEM)， 反之則用隨機效應模型(random-effects model，REM),并分別計算合并比值比(OR)、95%可信區間(95% CI) 及P值。基因多態性分析包括：等位基因模型(Tvs.C)、雜合子模型(CTvs.CC、TTvs.CT)、純合子模型(TTvs.CC)、顯性模型(CT+TTvs.CC)和隱形模型(TTvs.CC+CT)各模型的比較。并采用Begg’s檢測發表偏倚。

2 結 果

2.1 納入文獻情況

初次電子檢索納入文獻110 篇，通過閱讀題目及摘要排除明顯不符合納入標準者及重復利用數據者72 篇，符合納入標準者37篇，閱讀全文后排除無法提取相關數據者及對照組基因型頻數不符合哈溫平衡者，最終納入研究文獻15 篇(圖 1)。其中1 篇研究泰國人群[6]、1 篇研究印度人群[7]、1 篇研究土耳其人群[8]，1 篇研究伊朗人群[9]，其余為中國人群[10-20](表 1)。各研究中病例組與對照組等位基因頻數與各基因型頻數分布統計見表 2。

圖 1 文獻篩選流程圖

表 1 納入文獻的基本特征表

表 2 納入文獻中MTHFR基因C677T基因多態性分布

2.2 Meta分析結果

等位基因模型Tvs.C組OR值為1.333、95%CI為(1.062-1.672)；雜合子模型CTvs.CC組OR值為1.484、95%CI為(1.048-2.101)；TTvs.CT組OR值為1.169、95%CI為(0.959-1.425)；純合子模型TTvs.CC組OR值為1.778、95%CI為(1.091-2.898)；隱性模型TTvs.CC+CT組OR值為1.421、95%CI為(1.027-1.967)；顯性模型CT+TTvs.CC組OR值為1.580、95%CI為(1.098-2.274)。只有雜合子模型TTvs. CT組無統計學異質性選用固定效應模型外，其余模型均選用隨機效應模型(表 3)。

表 3 等位基因及各基因型與NSCL/P易感性分析結果

2.3 敏感性分析

通過逐項剔除單個研究項目觀察該研究對合并效應量的影響，進行敏感性分析，計算合并OR值及95%CI。發現合并效應量異質性較小，它們的區間對總的實驗結果并未產生逆轉，OR值穩定，說明Meta分析結果穩定性好。

2.4 發表偏倚檢測

Begg’s Test示等位基因模型Tvs.C組Z=1.09，雜合子模型CTvs.CC組Z=0.59，TTvs. CT組Z=1.00，純合子模型TTvs.CC組Z=0.49，隱形模型TTvs.CC+CT組Z=0.20，顯性模型CT+TTvs.CC組Z=0.89，且漏斗圖基本對稱，所納文獻間發表偏倚小。

3 討 論

MTHFR能還原5，10-亞甲基四氫葉酸為5-甲基四氫葉酸，二者在DNA合成修復和DNA甲基化中起重要作用，脫氧尿苷酸(dUMP)經5，10-亞甲基四氫葉酸可轉化為脫氧胸腺苷三磷酸(dTTP),而dTTP則參與DNA的合成與損傷修復；5-甲基四氫葉酸經甲硫氨酸合成酶等的作用提供甲基進行DNA和蛋白質的甲基化[5,21]。因此，MHTFR基因表達異常會影響DNA的合成與修復，導致染色體損傷，導致機體發生畸形。C677T 是 MTHFR基因最常見的不耐熱單核苷酸多態性突變位點，該基因第677位上密碼子中的胞嘧啶(C)突變為胸腺嘧啶(T)，導致編碼后的丙氨酸突變為纈氨酸，使MTHFR熱穩定性降低，無法正常發揮酶活性，最終導致甲硫氨酸-葉酸代謝出現異常[21]。研究表明孕母補充足夠的葉酸可以減低新生兒患唇腭裂的危險性[22]，但是葉酸補充量充足的孕母也會發生NSCL/P， MTHFR基因C677T位點多態性影響了葉酸代謝酶的活性，進而增加了NSCL/P的發病風險，提示NSCL/P的發生還與葉酸代謝酶的活性相關。

本文結果與朱博等[5]對中國人群的薈萃分析結果一致。但與王維等[23]關于中國漢族人群的Meta分析結果不符，其原因可能是納入研究數量過少，且本研究納入文獻基于亞洲人群，擴大了研究人群范圍。亞組分析結果顯示中國人群中攜帶突變基因T，新生兒會增加罹患NSCL/P的風險性，且基因型為突變純合子(TT)時會增加罹患機率；其他人群數據分析顯示，攜帶突變基因T會有罹患NSCL/P的風險。這可能與人群遺傳異質性、飲食習慣、生活環境等因素有關，有待進一步研究。

本研究所納入文獻間發表偏倚小，各單個研究對合并結果影響小，結果較可靠。但是，本研究納入文獻基于亞洲人群，納入文獻以中國人群為主，納入研究在基因多態性檢測水平、生活環境、飲食習慣等方面也存在差異， Meta分析受制于納入研究固有的偏倚和缺陷，病例對照研究也存在回憶偏倚及選擇偏倚，因此Meta分析結果會有一定的局限性，因此研究結果具有一定局限性。

綜上所述，MTHFR基因C677T位點表達異常是NSCL/P的危險因素之一，突變基因T會增加其發病幾率，而基因型TT會明顯增加NSCL/P的罹患風險。