幾種常見動物疫病的化驗室診斷

席冬麗

隨著對動物檢疫工作的發展與完善，僅依靠獸醫的經驗檢查已經不能滿足現今動物疫病診斷的需求，因此，病理化驗室開始發揮重要作用。如藍耳病的病原學檢測方式需要采集病豬的扁桃體、淋巴結、肺、肝、脾等，利用10%的中性福爾馬林進行固定，經過石蠟切片、HE染色之后使用光鏡對樣本進行病理學組織檢查得出結論，又如豬瘟的病理學檢查方式主要有免疫熒光實驗、酶聯免疫吸附實驗、核酸探針技術、基因芯片檢測技術等。筆者通過對口蹄疫、豬丹毒、旋毛蟲、巴氏桿菌、豬鏈球菌等病原學檢測進行詳細描述，著重分析集中常見動物疫病的化驗室診斷過程。

1豬丹毒化驗室診斷方式

1.1涂片鏡檢

采集相關檢測組織之后將其用瑞氏染色法、革蘭氏染色法進行染色，鏡檢過程中可在組織上發現細小的桿菌，桿菌菌體呈現或彎或直的狀態，常單獨、成對或大量聚集，尤其在白細胞內或白細胞周圍常能發現大量菌體，具有較為明顯的診斷意義。采集動物的腎臟、脾臟組織制作抹片檢查出菌體的概率最高。

1.2分離培養

采集新鮮組織之后可將其直接接種于血液瓊脂或血清瓊脂培養基礎上，保持培養溫度在37°C左右，培養時間約為24～48小時，培養后明顯可見培養基表面出現透明的露滴狀微小菌落，在普通瓊脂培養基上生長狀態較為貧瘠。在肉湯內表現出程度較輕的渾濁狀態，會出現少量的灰白色粘稠狀沉淀物，明膠不會液化，生長狀態呈現試管刷狀態生長。

1.3動物接種

采集新鮮組織加生理鹽水制作成為組織懸液，比例為1：10，還可利用肉湯培養物接種，主要實驗動物為鴿子或小白鼠。組織懸液在鴿子胸肌注射量為0.5ml～1.0ml，小白鼠皮下注射量為0.2ml;純菌液在鴿子胸肌的注射量為0.5ml，在小白鼠皮下的注射量為0.1ml。接種時間為3～4小時之后，實驗動物出現死亡狀態。將死亡動物的心臟血液或臟器組織制作成為涂片鏡檢，若發現豬丹毒桿菌即可確診該疫病。

2旋毛蟲化驗室檢測方式

2.1采集樣品

從死亡動物身上采集左右橫膈膜肌角，重量在20g以上，使其編碼與死亡動物的尸體保持一致，將樣品送入化驗室進行檢查。

2.2觀察（肉眼）

送來的樣品首先使用肉眼進行檢查，如在樣品上課件淡白色、灰白色呈微塵狀的小點，則認為該組織疑有旋毛蟲，需要對病變組織制片進行鏡檢。

2.3制片

用化驗室內的弓形剪刀沿樣品肌理取下可疑部位，并在其他部位取下其他小樣，每種越需要12塊（共24塊），將所取小樣粘貼在夾壓器的玻璃板上，蓋上蓋玻片壓扁并保證螺旋扭緊固定，使壓片保持能看到報紙上小字的狀態。

2.4鏡檢

將已準備好的壓片放置在50～70倍放大的低倍顯微鏡下，或使用旋毛蟲檢驗器對其進行觀察，仔細檢查每一個小肉塊，絕對不能漏下任何一個樣品。

3巴氏桿菌病化驗室檢測方式

3.1涂片鏡檢

使用無菌手段從得病或死亡動物身上采集新鮮組織作為檢查樣品。血液制作成推片或涂片，其他部分制作觸片或涂片，使用瑞氏染色法、美蘭染色法完成染色工作，若樣品內含有巴氏桿菌，鏡檢后可發現組織內存在卵圓形或球桿狀的菌體，菌體兩端染色較濃，呈現出兩級著色狀態，若使用革蘭氏染色法則為陰性。

3.2分離培養

將選擇的樣品組織置于鮮血瓊脂平板、瓊脂斜面與普通的肉湯（溫度保持在37°C）中，培養時間為24小時。培養后血瓊脂平板上出現細小、濕潤、圓整且微帶閃光的灰白色露滴狀菌落，在45°折射光線低倍鏡檢查后呈現藍綠色，且該菌落會呈現微微的金光，菌落周邊若呈現紅黃光帶則為FG型菌落。瓊脂斜板上會出現光滑濕潤的灰白色菌落，肉湯內則會出現程度較輕的渾濁狀態。若菌株較粗糙則會出現絮狀沉淀。

3.3動物接種

從得病或死亡動物身上采集的新鮮組織與生理鹽水混合，制成1：5或1：10的乳劑，吸取定量上清液或肉湯培養物接種在接受實驗的小動物肌肉中、皮下，劑量大約為0.5ml～1ml，以實驗動物的體型為準。豬巴氏桿菌對小白鼠、兔子表現出感染性，注射后約18～24小時內會出現死亡;雞巴氏桿菌對所有的實驗動物均表現出強烈的感染性，注射后10～24小時內會出現死亡;牛便是桿菌對兔子與小白鼠有感染性，但僅表現在腹腔注射，注射后18～24小時之內死亡;羊巴氏桿菌對兔子的感染性最強。實驗動物受影響死亡之后，應采集其心臟血液或其他器官制作涂片進行檢查或對其組織進行分離培養，一旦滿足上述情況，便可確診為巴氏桿菌。

4豬鏈球菌病化驗室檢測方式

4.1涂片鏡檢

從得病或死亡動物身上采集的新鮮組織使用革蘭氏染色法進行染色，之后對其鏡檢，若該動物已患有鏈球菌病，會出現大量單獨、成對或三五相連的革蘭氏陽性球菌，甚至會有30～70個單球相接后呈長鏈狀。若使用瑞氏染色法可看見菌體周圍出現明顯的莢膜。

4.2分離培養

從得病或死亡動物身上采集的新鮮組織至于培養基中，普通瓊脂的斜面上會出現生長狀態較為貧瘠，灰白色半透明狀的露滴菌落;血液瓊脂上則出現粘稠狀、光滑且邊緣整齊的半透明露滴菌落，該菌落周圍出現明顯的B型溶血環;馬丁肉湯內最開始表現出較為均勻的渾濁狀態，約48小時左右之后渾濁物開始下降，而液體逐漸變得清亮。

4.3動物接種

將從得病或死亡動物身上采集的新鮮組織制作成為5～10倍的生理鹽水懸液，或使用純菌液接種在兔子、小白鼠身上。生理鹽水懸液在兔子腹腔內注射的劑量為1.0ml～2.0ml，在皮下注射的劑量為2ml;生理鹽水懸液在小白鼠身上注射的劑量為0.2～0.3ml;純菌液在兔子身上注射的劑量為0.5ml～1ml，皮下注射劑量為1ml。接種后，兔子在12～26小時之內死亡，而小白鼠于18～24小時之內死亡。接種動物死亡之后，對其心臟血液、腹水、肝臟抹片、脾臟抹片等會進行鏡檢，若發現有大量單獨、成對或三五相連的球菌，則為鏈球菌病。

（作者單位：474350河南省南陽市內鄉縣動物疫病預防控制中心）