HPLC測定通脈刺五加膠囊中金絲桃苷的含量

劉鑫，郭文婷

摘 要：建立反相高效液相色譜法測定通脈刺五加膠囊中金絲桃苷的含量。方法：采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）為流動相，檢測波長為360nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。金絲桃苷在10～100μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。金絲桃苷平均回收率分別為99.6%。結論：本法簡便、準確，可用于通脈刺五加膠囊中金絲桃苷的含量測定。

關鍵詞：通脈刺五加膠囊；含量；測定

通脈刺五加膠囊為膠囊劑，內容物為黃褐色至棕褐色的顆鐐粉末；味苦、微澀。通脈刺五加膠囊用于瘀血閉阻所致的胸痹心病，癥見胸痛，胸悶，心悸等。刺五加在中國醫藥學中做為藥物廣泛應用已有悠久的歷史，具有“補中益精、堅筋骨、強志意”的作用。《別錄》記載：“療男子陰痿，囊下濕，小便余瀝，女人陰癢及腰脊痛，兩腳疼痹風弱，五緩虛羸，補中益精，堅筋骨，強志意。”金絲桃苷又名槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷，由槲皮素的3位O原子以β糖苷鍵與糖基相連。金絲桃苷具有抗炎、降壓、抗抑郁、增強免疫、降低膽固醇、蛋白同化、解痙、利尿、止咳、局部和中樞鎮疼等多種生理活性[1-6]。本文采用高效液相法對通脈刺五加膠囊中的金絲桃苷的進行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：電子天平FA1004型（南京華欣分析儀器制造有限公司）；YL9100液相色譜儀（汕頭市科毅儀器設備有限公司）；長城獅鼎SHB-III型臺式循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）；美國澤拉布Super超越系列全觸屏超純水系統（上海和泰儀器有限公司）；新芝scientz-T超聲波提取機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；天星進樣瓶清洗機TX-500型（北京天星科儀科技有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：金絲桃苷

1.4 試劑：醋酸鈉（昆山諾普森實驗室用品科技有限公司）、四氫呋喃（昆山諾普森實驗室用品科技有限公司）、磷酸二氫銨（昆山諾普森實驗室用品科技有限公司）、冰醋酸（杭州蕭山創益化工儀器有限公司）、甲醇（昆山諾普森實驗室用品科技有限公司）、三乙胺（昆山諾普森實驗室用品科技有限公司）、乙腈（昆山諾普森實驗室用品科技有限公司）。

1.5 試藥：通脈刺五加膠囊

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下。流動相：乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）為流動相，檢測波長：360nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數按金絲桃苷峰計算應不得低于2500。

2.2 對照品溶液的制備

取在60℃減壓干燥4小時的金絲桃苷對照品適量，精密稱定，加流動相制成每lml含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品內容物適量，精密稱定，加60毫升70%甲醇溶液超聲處理0.5小時，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量70%甲醇溶液分次洗滌容器和殘渣，洗液濾人同一量瓶中，加70%甲醇溶液至刻度，搖勻，即得。

2.4 精密度試驗

精密稱取金絲桃苷對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為20μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.78%，表明本方法精密度良好。

2.5 對照品的線性考察

精密稱取適量金絲桃苷對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含10、20、30、40、50、60、70、80、90、100微克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明，金絲桃苷在10～100μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.6 重現性試驗

稱取同一批的金絲桃苷樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.87%，結果表明此方法的重現性良好。

2.7 準確度試驗

取對照品適量，精密稱取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入金絲桃苷對照品，按項下方法制備成80%、100%、120%。取模擬樣品照“ 含量測定”項下方法試驗，計算回收率為99.6%，RSD為0.88%。

2.8 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定通脈刺五加膠囊三批樣品。

3 討論

分別考察甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），甲醇-水-冰醋酸（40∶60∶0.5），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸（2：2：30：80），乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）不同比例的流動相，結果以乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）為流動相為流動相。本實驗采用高效液相法效果好、方法簡便、快捷、準確、專屬性好，可用于通脈刺五加膠囊中金絲桃苷的含量測定。

參考文獻

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