丹參川芎嗪對大鼠脊髓損傷后神經功能恢復的作用

王小菊，蘇 軍

隨著我國經濟的發展，各類意外事故的發生率也呈逐年遞增趨勢，脊髓損傷是脊柱損傷最嚴重的并發癥。有研究顯示，發達國家脊髓損傷發生率約為每百萬人13.3～45.9例/年；我國上海1991年統計數據顯示，脊髓損傷發病率約為34.3/百萬[1-2]。脊髓損傷常會引起損傷節段及下肢功能障礙，不僅對患者生活產生較大的影響，同時還會加重社會醫療負擔。脊髓損傷后，患者損傷部位神經組織會發生極為復雜的病理變化，其損傷修復過程受多種因素的影響。西醫多選擇神經營養因子、胚胎脊髓移植等方式來阻止脊髓的繼發性損傷，但效果仍不理想[3]。丹參川穹嗪在臨床上常用于治療閉塞性腦血管疾病，同時在治療心絞痛、心肌梗死等病癥中效果較好。本課題研究了丹參川穹嗪對大鼠脊髓損傷后神經功能恢復的影響，以期為臨治療脊髓損傷提供一定的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選擇雄性SD大鼠24只，由青海生物藥品廠提供，合格證號：SYXK(青)2017-0001，體重210～250 g，隨機分為兩組，各12只。

1.2 實驗藥物 丹參川穹嗪注射液購自吉林四長制藥有限公司，規格5 ml/支。

1.3 脊髓損傷模型制作 按0.1 mg/100 g體重腹腔注射3%戊巴比妥鈉注射液麻醉大鼠，麻醉效果滿意后，備皮，將其俯臥固定于手術臺上，以T8為中心，于其背部正中做一約3 cm縱行切口，切開皮膚肌肉，暴露T7～T9棘突和錐板，咬除T8棘突及錐板，暴露T8段脊髓；選擇10 g重的沖擊錘，于5 cm高度處落下垂直撞擊脊髓，造成T8段脊髓損傷。生理鹽水沖洗傷口，逐層縫合，于大鼠大腿外側肌注青霉素，防止感染。模型成功標志：撞擊后，大鼠雙下肢迅速回縮及彈動；麻醉效力過后，大鼠雙下肢呈遲緩性癱瘓。

1.4 分組處理 建模成功后，實驗組于1 h內腹腔注射丹參川穹嗪注射液，使用劑量為20 mg/100 g，1次/d，連續使用10 d；對照組給予與實驗組相同劑量的生理鹽水。

1.5 觀察指標

1.5.1 脊髓損傷程度 分別于干預后第1、7、14及21 d時，使用脊髓運動功能（BBB）量表對大鼠的脊髓損傷程度進行評估，具體方法是：將受試大鼠置于開口盆內，輕敲盆壁，使大鼠爬行，觀察大鼠臀、膝、踝關節的行走、軀體運功及協調情況。滿分21分，得分越高，表明大鼠脊髓損傷程度越小[4]。

1.5.2 運動誘發電位（MEP） 分別于干預后第1、7、14及21 d時，采用Epoch XP神經監護儀（美國Axon公司），檢測大鼠雙后肢MEP。

1.5.3 脊髓殘存面積 于干預21 d時，腹腔麻醉戊巴比妥鈉麻醉大鼠，使用4%多聚甲醛經心灌注固定，取出完整損傷區脊髓，投入固定液中12 h，而后取出修剪，石蠟包埋，做5 μm的連續橫切片，HE染色，酒精脫水，二甲苯透明處理，樹脂封片，于顯微鏡下觀察并計算其脊髓殘存面積。

1.6 統計學方法 應用SPSS22.0統計軟件分析，計數資料以頻數和百分率表示，采用χ2檢驗；計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，組內不同時間點的比較采用單因素重復測量方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組不同時點BBB評分比較 干預后第1 d，兩組BBB評分比較無顯著差異（P＞0.05）；干預第7、14及21 d時，兩組BBB評分均逐漸升高，但實驗組BBB評分均顯著高于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組不同時點BBB評分比較(n=12)

2.2 兩組不同時點MEP比較 干預后第1 d，兩組MEP潛伏期及波幅均無顯著差異（P＞0.05）；干預第7、14及21 d時，兩組MEP潛伏期均逐漸縮短，MEP波幅均逐漸升高，但實驗組MEP潛伏期均低于對照組（P＜0.05），MEP波幅均高于對照組（P＜0.05）。 見表 2。

表2 兩組不同時點MEP比較(n=12)

2.3 兩組脊髓殘存面積比較 在干預后第21 d，兩組脊髓橫切片均顯示，脊髓組織結構出現了明顯的紊亂、萎縮現象，實驗組傷區脊髓殘存面積為（49.26±5.13）%，對照組為（27.41±4.97）%，兩組比較差異顯著（P＜ 0.05）。

3 討論

脊髓損傷會對相應的神經產生極大的損傷，部分患者甚至出現終生癱瘓，嚴重降低其生活質量。臨床實踐指出，急性脊髓損傷大部分并非橫斷性損傷，即仍有部分受損軸突存在，如果此時患者未得到及時有效的干預，繼發性損傷往往會使脊髓功能出現永久性喪失，因而現階段醫學研究重點在于如何保護脊髓組織，減少或預防繼發性損傷的出現，促進脊髓功能的重建。

目前西醫對脊髓損傷的治療主要為對癥治療、藥物治療及并發癥治療，其中藥物治療主要目的在于防止受損的脊髓進一步損傷，保護正常脊髓組織，最大程度保護脊髓神經功能，主要藥物有皮質類固醇、神經節苷脂、神經營養藥、脫水藥等。韓美香等[5]通過對84例急性脊髓損傷患者進行分組治療發現，甲潑尼龍聯合亞低溫療法能夠顯著提高患者治療有效率，同時能夠改善患者感知功能及運動功能。翟宏偉等[6]通過對62例脊髓損傷患者進行分組干預發現，神經節苷脂聯合神經生長因子能夠顯著提高患者日常生活能力。

丹參川穹嗪具有擴張血管、抗炎抗血栓的作用，臨床上主要被用于治療缺血性心臟病、缺血性腦病等。隨著近年對該藥物研究的深入，其新的藥理作用不斷被發現。王樂樂等[7]選擇60只脊髓損傷大鼠，分為對照組、丹參組、川芎嗪組及聯合治療組，對比了治療后4組的BBB評分及MEP評分，結果顯示，治療后聯合治療組BBB評分及MEP評分均優于對照組。其認為川芎嗪為川芎提取出的生物堿，具有消炎消腫、清除氧自由基的功效；丹參具有擴張血管、改善微循環的作用。二者聯用能夠顯著緩解個體脊髓受損后發生的炎性反應，保護受損的神經元，同時加快神經元的恢復，因而聯合應用效果較好。俞勇等[8]通過對89例急性脊髓損傷患者進行分組干預發現，加用丹參川穹嗪能夠顯著降低患者早期并發癥的發生率，同時也能夠降低患者術后深靜脈血栓、肺動脈栓塞的發生風險，分析認為這與丹參川穹嗪能夠有效緩解患者炎性反應、促進血液微循環有關。本研究結果顯示，干預第7、14及21 d時，兩組BBB評分均逐漸升高，但實驗組BBB評分均顯著高于對照組，表明丹參川穹嗪治療可顯著降低大鼠的脊髓損傷程度，促進損傷的修復。

MEP是檢查運動神經系統功能的一項神經電生理學檢查方法，廣泛用于運動神經系統疾病的診斷、術中監護等。在脊髓損傷中，脊髓破壞越嚴重，前角運動細胞損傷越多，則MEP潛伏期延長及波幅降低越顯著[7]。本研究結果顯示，干預第7、14及21 d時，兩組MEP潛伏期均逐漸降低，MEP波幅均逐漸升高，但實驗組MEP潛伏期均低于對照組，MEP波幅均高于對照組；表明丹參川穹嗪可顯著改善大鼠運動神經系統功能。脊髓標本觀察也證實，干預后第21 d，實驗組傷區脊髓殘存面積顯著大于對照組，表明丹參川穹嗪可顯著減少大鼠傷區繼發性脊髓損傷。分析原因可能是[9]：（1）丹參川穹嗪具有較好的中樞神經保護作用，能夠降低神經細胞氧耗，盡量延長神經細胞的生物活性；（2）丹參川穹嗪具有較好的抗氧自由基作用，能夠降低大鼠體內SOD的含量，進而降低過氧化物對神經細胞的損害；（3）丹參川穹嗪能抑制脊髓損傷小鼠脊髓組織TNF-α，IL-1β和COX-2 mRNA的上調，顯著抑制小膠質細胞活化和中性粒細胞浸潤，通過調節小膠質細胞活化的作用，保護脊髓；（4）丹參川穹嗪能夠擴展血管，改善受損區域血供，減少缺血缺氧帶來的繼發性損傷；（5）丹參川穹嗪促進脊髓表達神經營養素4（NT4）及酪氨酸激酶受體、促進神經絲蛋白（NF）及神經營養因子（NGF、BDNF、NT3）的表達，促使受損的神經元修復。

總之，丹參川穹嗪能夠顯著減少大鼠脊髓損傷后傷區的繼發性損傷，促進脊髓下肢活動及神經功能的恢復，可能成為治療脊髓損傷的藥物之一，有待臨床進一步研究驗證。