紫黃銀金甘組方對雞NDV抗體效價、體重和料肉比的影響

駱雨欣，閻 俊，季鳳艷 ，焉智偉，單文琪，李金鳳，張師源，李敬雙?

（1.錦州醫科大學，遼寧 錦州 121001；2.遼寧省瓦房店市李官動物衛生監督所，遼寧 瓦房店 116300；3.遼寧省葫蘆島市建昌縣黑山科動物衛生監督所，遼寧 建昌 125300）

雞群生產性能的高低主要取決于傳染病尤其是病毒性傳染病的防控效果，目前病毒性傳染病的控制主要采取疫苗防疫的方法，而免疫失敗時有發生，免疫增強劑是提高免疫效果的有效措施。化學免疫增強劑藥物殘留量大，對食品衛生造成危害，易造成生產性能降低[1]。中藥免疫增強劑藥物殘留量小，安全性好，能延長免疫時間，有的還能提高生產性能。特別是復方中藥免疫增強劑通過藥物配伍藥效更佳，越來越受到科研人員的重視[2]。

紫錐菊、黃芪、銀杏、金銀花和甘草都是我國傳統的中藥，廣泛應用于醫學和獸醫臨床。紫錐菊主要含有多酚類（主要包括菊苣酸、綠原酸、咖啡酸和紫錐菊皂甙）、黃酮類、多糖類和揮發油等，具有抗病毒、抗菌、抗炎、抗氧化和提高免疫力等功效[3]。黃芪主要含有黃芪多糖、黃酮和三萜皂甙類等，具有增強免疫、抗菌、降血壓、益氣和活血等功效[4]。銀杏主要含有銀杏黃酮、萜內酯、兒茶素和多酚類等，具有增強免疫功能、抗菌、消炎、抗病毒、改善心血管和降血脂等功效[5]。金銀花主要含有綠原酸類、三萜皂苷類、黃酮類和揮發油等，具有提高免疫力、抗菌、清熱解毒、保肝利膽和降血脂等功效[6]。甘草主要含有三萜類、黃酮類和多糖類等，具有增強免疫、抗菌、抗病毒和抗過敏等功效[7]。我國是世界上研究甘草最早的國家，在《神農本草經》中就有記載，稱為“中藥之王”[8]。本研究按照中醫和中獸醫理論，辨證施治的原則，依據紫錐菊、黃芪、銀杏葉、金銀花和甘草的性能與功效，采用紫錐菊、黃芪、銀杏葉、金銀花和甘草提取物（簡稱紫黃銀金甘）組方，探討紫黃銀金甘組方對雞的免疫功能和生產性能的影響，為復方中藥的開發和利用提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物1日齡海蘭褐公雞雛，購自錦州醫科大學實習農場。

1.1.2 飼料雛雞配合飼料購自大成農技（葫蘆島）有限公司。

1.1.3 疫苗和試劑雞新城疫活疫苗（La sota株）購自中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所（批號201702）；肝素抗凝管購自南京奧多福尼生物科技有限公司（批號20170422）；雞新城疫病毒血凝抑制試驗抗原購自中國獸醫藥品監察所（批號201703）。

1.1.4 試驗藥品紫錐菊提取物主要成分為紫錐菊多酚（菊苣算、綠原酸、咖啡酸和紫錐菊皂甙），總酚含量4%；黃芪提取物（批號為RL170316）主要成分為黃芪多糖，總含量90%（批號為RL170401）；銀杏葉提取物主要成分為萜內酯類和黃酮類，黃酮含量24%～26%，萜內酯含量8%～10%（批號為RL170410）；金銀花提取物主要成分為綠原酸，總含量30%（批號為RL170415）；甘草提取物主要成分為甘草甜素、后幕比檀素、槲皮素、刺芒柄花素、甘草甙、甘草類黃酮和甘草酸，總含量30%（批號為RL170418）。均購自西安瑞林生物科技有限公司。左旋咪唑購自廣東華南藥業集團有限公司（批號為201702）。

1.2 方法

1.2.1 紫黃銀金甘藥液的制備 紫錐菊、黃芪、銀杏葉、金銀花和甘草提取物粉劑均為水溶性。按質量份數，將紫錐菊、黃芪、銀杏葉、金銀花和甘草提取物粉劑混合成紫黃銀金甘粉劑（紫錐菊、黃芪、銀杏葉、金銀花和甘草提取物粉劑分別占40%、20%、20%、10%和10%），分別取紫黃銀金甘粉劑20、40和80 g加自來水稀釋至1 L，即為20、40和80 g/L紫黃銀金甘藥液[9-10]。

1.2.2 試驗分組與飼養方法利用1日齡海蘭褐公雞雛，設20、40和80 g/L紫黃銀金甘組、空白對照組和陽性對照組，每組60只。自由采食、飲水。1日齡開始，在20、40和80 g/L紫黃銀金甘組飲水中加入紫黃銀金甘（分別按20、40和80 g/L加入紫黃銀金甘），在陽性對照組的飲水中加入左旋咪唑（按0.05 g/L加入左旋咪唑），連喂28 d。7日齡所有雞用雞新城疫活疫苗免疫，操作與用量參考疫苗說明書進行。

1.2.3 紫黃銀金甘對NDV抗體效價的影響

1.2.3.1 分離血清 在21、28、35和42日齡，不同濃度中藥組、空白對照組和陽性對照組分別隨機抽取20只雞，翅靜脈采血分離血清，2 000 r/min 4℃離心5 min。

1.2.3.2 1%雞紅細胞懸液制備 用成年未進行新城疫疫苗免疫的公雞，翅靜脈采血20 mL，加入肝素抗凝管中，2 000 r/min離心10 min，棄上清，加100 mL生理鹽水洗滌血細胞，2 000 r/min 4℃離心10 min，棄上清，反復3次，至上清液透明，收集沉淀的紅細胞用生理鹽水配制成1%的懸液。

1.2.3.3 血凝和血凝抑制試驗檢測NDV抗體效價按照姚火春[11]試驗方法操作，在96孔“V”形微量反應板上進行。

1.2.4 紫黃銀金甘對雞體重的影響 于7、14、21、28、35、42和49日齡，不同濃度中藥組、空白對照組和陽性對照組每組分別隨機抽取16只雞，稱量體重。

1.2.5 紫黃銀金甘對料肉比的影響 不同濃度中藥組、空白對照組和陽性對照組每組設3個小組，每小組10只。在7、14、21、28、35、42和49日齡，每小組稱取消耗飼料量和雞重量，料肉比=消耗飼料重（kg）/雞體重（kg）。

1.2.6 統計學處理 數據用平均數±標準差表示，用統計軟件SPSS 17.0進行一維方差分析組間差異顯著（P＜0.05）和極顯著（P＜0.01）。用相同字母表示差異無統計學意義的各組，用不同字母表示差異有統計學意義的各組；字母A表示均值最大組，B、C、D按大小順序分別表示有統計學意義（P＜0.01）的其他各組，用字母a表示均值最大組，b、c、d、e按大小順序分別表示有統計學意義（P＜0.05）的其他各組。

2 結果與分析

2.1 紫黃銀金甘對N N D D V V抗體效價的影響 紫黃銀金甘對NDV抗體效價的影響見表1。

陽性對照組、紫黃銀金甘各濃度組與空白對照組比較：21日齡和28日齡，陽性對照組、紫黃銀金甘各濃度組NDV抗體效價均極顯著（P＜0.01）高于空白對照組。35日齡和42日齡，陽性對照組NDV抗體效價顯著（P＜0.05）高于空白對照組，紫黃銀金甘各濃度組NDV抗體效價均極顯著（P＜0.01）高于空白對照組。表明在刺激NDV抗體產生上紫黃銀金甘具有促進作用。

表1 紫黃銀金甘對NDV抗體效價（Log2）的影響Table 1 Effect of ZHYJG on NDV Antibody Titers

紫黃銀金甘各濃度組與陽性對照組比較：21日齡，紫黃銀金甘各濃度組NDV抗體效價與陽性對照組均無統計學意義（P＞0.05）。28日齡，20 g/L和40 g/L紫黃銀金甘組NDV抗體效價與陽性對照組均無統計學意義（P＞0.05）。35日齡和42日齡，40 g/L紫黃銀金甘組NDV抗體效價顯著（P＜0.05）高于陽性對照組；20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組NDV抗體效價與陽性對照組均無統計學意義（P＞0.05）。表明在刺激NDV抗體產生上紫黃銀金甘藥物的有效性。

紫黃銀金甘各濃度組之間比較：21日齡，40 g/L紫黃銀金甘組NDV抗體效價高于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組，無統計學意義（P＞0.05）。28日齡，40 g/L紫黃銀金甘組NDV抗體效價極顯著（P＜0.01）高于80 g/L紫黃銀金甘組，且顯著（P＜0.05）高于20 g/L紫黃銀金甘組。35日齡和42日齡，40 g/L紫黃銀金甘組NDV抗體效價高于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組，無統計學意義（P＞0.05）。表明40 g/L紫黃銀金甘組對刺激NDV抗體產生的效果優于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組。

2.2 紫黃銀金甘對雞體重的影響 紫黃銀金甘對雞體重的影響見表2。

表2 紫黃銀金甘對雞體重的影響Table 2 Effect of ZHYJG on Chicken Weight

陽性對照組、紫黃銀金甘各濃度組與空白對照組比較：各日齡，陽性對照組、紫黃銀金甘各濃度組雞體重均極顯著（P＜0.01）高于空白對照組。表明在促進雞生長發育上紫黃銀金甘能夠發揮作用。

紫黃銀金甘各濃度組與陽性對照組比較：7日齡，40 g/L紫黃銀金甘組雞體重與陽性對照組無統計學意義（P＞0.05）。14、21、28和35日齡，20 g/L和40 g/L紫黃銀金甘組雞體重與陽性對照組均無統計學意義（P＞0.05）。42日齡，20 g/L和40 g/L紫黃銀金甘組雞體重均極顯著高于陽性對照組（P＜0.01）；80 g/L紫黃銀金甘組雞體重與陽性對照組無統計學意義（P＞0.05）。49日齡，紫黃銀金甘雞增重各濃度組均極顯著高于陽性對照組（P＜0.01）。表明在促進雞生長發育上紫黃銀金甘藥物的有效性。

紫黃銀金甘各濃度組之間比較：7日齡，40 g/L紫黃銀金甘組雞體重顯著（P＜0.05）高于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組；14、21、28和35日齡，40 g/L紫黃銀金甘組雞體重極顯著（P＜0.01）高于80 g/L紫黃銀金甘組，高于20 g/L紫黃銀金甘組無統計學意義（P＞0.05）；42日齡和49日齡，40 g/L紫黃銀金甘組雞體重極顯著（P＜0.01）高于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組。表明40 g/L紫黃銀金甘組對促進雞的生長發育效果優于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組。

2.3 紫黃銀金甘對料肉比的影響 紫黃銀金甘對料肉比的影響見表3。

陽性對照組、紫黃銀金甘各濃度組與空白對照組比較：各日齡，陽性對照組、紫黃銀金甘各濃度組料肉比均極顯著（P＜0.01）低于空白對照組。表明在降低料肉比上紫黃銀金甘能夠發揮作用。

紫黃銀金甘各濃度組與陽性對照組比較：7日齡和14日齡40 g/L紫黃銀金甘組、21、28、35、42和49日齡20 g/L和40 g/L紫黃銀金甘組各日齡料肉比與陽性對照組無統計學意義（P＞0.05）。表明在降低料肉比上紫黃銀金甘藥物的有效性。

表3 紫黃銀金甘對雞料肉比的影響Table 3 Effect of ZHYJG on Chicken Feed Conversion Ratio

紫黃銀金甘各濃度組之間比較：7日齡，40 g/L紫黃銀金甘組料肉比顯著（P＜0.05）低于80 g/L紫黃銀金甘組；低于20 g/L紫黃銀金甘組無統計學意義（P＞0.05）。14、21、28、35和42日齡，40 g/L紫黃銀金甘組料肉比極顯著（P＜0.01）低于80 g/L紫黃銀金甘組；低于20 g/L紫黃銀金甘組無統計學意義（P＞0.05）。表明40 g/L紫黃銀金甘組對降低料肉比的效果優于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組。

3 討論

3.1 紫黃銀金甘對 N D V抗體效價的影響NDV抗體的高低決定著雞對NDV的抵抗力以及雞群的感染程度。張月等[12]研究苜蓿多糖對新城疫弱毒苗免疫雞所產生的免疫調節作用，選擇1日齡海蘭雛雞120羽，隨機分為4組，每組30羽，7日齡每羽用雞新城疫活疫苗（La Sota株）免疫，28日齡以相同劑量進行加強免疫。其中3個試驗組從7日齡開始分別肌肉注射低、中、高劑量（10、25、50 μg/mL）的苜蓿多糖，對照組注射生理鹽水，1次/d，連用7 d。于14、21、28、35、42、49、56日齡，通過靜脈采血，用微量法檢測血清中新城疫病毒血凝抑制（HI）抗體效價。結果苜蓿多糖能夠顯著提高血清中新城疫病毒HI抗體效價，中劑量組免疫后期抗體存在時間長，抗體高峰期持續時間也長。甘輝群等[13]利用黃芪、白術、黨參、甘草和板藍根組成的復方制劑（黃芪占40%、黨參占20%、白術占20%、板藍根占15%、甘草占15%），用海蘭褐雛雞設陰性對照組、陽性對照組、復方制劑低、中、高劑量組（按10、20和40 g/kg體重灌服復方制劑，1次/d，連喂5 d），7日齡時除陰性對照組不免疫，其他各組用新城疫滅活疫苗皮下注射。14、21、28、35和42日齡采用微量板法測定抗體效價，結果復方中藥制劑能提高NDV抗體效價。柳風祥等[10]利用黃芪、淫羊藿、黨參和甘草等中藥提取物（黃芪占40%、淫羊藿占25%、黨參占25%、甘草占10%），用海蘭褐雛雞設不接病毒對照組，感染網狀內皮組織增生癥病毒誘發了免疫抑制組，中藥提取物在1日齡開始飲水加入2%，直到試驗結束。7日齡滴鼻、點眼和肌肉注射新城疫弱毒疫苗。28、35、42日齡采用血凝抑制試驗測定NDV抗體效價，結果中藥提取物能提高NDV抗體水平。靳雙星等[14]利用板藍根、茯苓、連翹、黃芪、枳實、山楂和白術組成的復方中藥制劑，用AA肉仔雞設對照組、復方中藥制劑低、中、高劑量組（飲水中加入0.5%、1%、1.5%的復方中藥制劑，連用28 d），7日齡用NDClone-30疫苗滴鼻點眼，14日齡用IBDV疫苗滴口。14、21、28和35日齡采用瓊脂擴散沉淀反應測定抗體效價，結果復方中藥制劑能提高NDV和IBDV抗體效價。本研究結果，紫黃銀金甘能夠提高NDV抗體水平，40 g/L紫黃銀金甘組效果最好。與上述結果是一致的，說明紫黃銀金甘可以調節動物體液免疫功能，增強動物免疫應答能力。

本研究結果顯示，NDV抗體效價，21日齡和28日齡紫黃銀金甘組與陽性對照組無明顯的優勢，35、42和49日齡隨日齡的增加，紫黃銀金甘組越來越好于陽性對照組。表明28日齡停止給藥后，紫黃銀金甘比化學藥物在體內停留時間長，能延長體液中高效價抗體水平的持續時間，從而提高疫苗對動物的保護率，對動物疫病的防控制具有重要作用。

3.2 紫黃銀金甘對雞生產性能的影響牛小飛[9]研究利用黃芪和紫錐菊組方研究對肉雞生長發育的影響，黃芪和紫錐菊組方促進肉雞生長發育，降低料肉比，從而提高生產性能。其作用是中藥組方本身含有的多糖成份，有顯著的營養作用，能滿足肉雞增重的生產需要；中藥組方能增強機體的免疫功能，發病率越低生長發育就越快。趙天章等[15]利用黃芪多糖研究對仔雞免疫功能和生產性能的影響，用1日齡艾維茵肉仔雞，按常規免疫程序進行免疫。設黃芪多糖不同濃度組（基礎日糧加黃芪多糖2%、1%、0.5%和0.1%）和空白對照組，14、28和42日齡測平均料肉比、日采食量和日增重；28日齡和42日齡測外周血T淋巴細胞表面標志和NDV抗體效價，結果顯示，黃芪多糖能夠提高外周血T淋巴細胞CD4+/CD8+的比值和NDV抗體效價；降低平均料肉比，提高平均日采食量和日增重。本研究結果，紫黃銀金甘能夠促進雞的生長發育，降低料肉比。其作用是紫黃銀金甘能夠增強機體的免疫調節功能，發病率越低生長發育就越快；紫黃銀金甘組方中的黃芪多糖對雞生長起到了營養作用；紫黃銀金甘對于提升營養吸收方面可能起到了重要的生物學效應。

4 結論

紫黃銀金甘可通過提高NDV抗體效價，來提高機體的免疫功能。可通過促進雞的生長發育，降低料肉比，來提高雞的生產性能。