中草藥對(duì)小鼠試驗(yàn)性腹瀉的控制作用以及對(duì)小腸運(yùn)動(dòng)的影響

韓梅紅，胡倩

(長江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 434025)

動(dòng)物腹瀉是目前國內(nèi)外養(yǎng)殖業(yè)常見疾病之一，其病理基礎(chǔ)為腸道炎癥、水腫、腸道運(yùn)動(dòng)過度活躍等。我國治療動(dòng)物腹瀉的傳統(tǒng)方法是使用抗生素，但抗生素的長期不規(guī)范使用，極易產(chǎn)生耐藥性，且毒副作用大，往往得不到理想的治療效果。與西藥抗生素相比，中草藥具有來源廣泛、治療效果顯著、毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)。因此，選用中草藥來防治動(dòng)物腹瀉已成為當(dāng)前養(yǎng)殖業(yè)亟待研究的問題。

中草藥白頭翁具有抗菌抗病毒作用，其主要功效為祛火除濕、涼血止痢；黃柏性味苦寒，有清熱解毒、治療痢疾的功能，它一般與其他藥物組成復(fù)方以更好地發(fā)揮綜合功效；馬齒莧有清熱利濕、解毒消腫、消炎、利尿的作用，全草主治赤白痢疾、赤白帶下、腸炎等；枸杞具有補(bǔ)腎益精、養(yǎng)肝明目、補(bǔ)血安神、生津止渴等作用。為此，本研究通過番瀉葉致瀉的機(jī)制建立小鼠腹瀉模型，探討了由白頭翁、黃柏、枸杞和馬齒覓組成的復(fù)方中藥對(duì)腹瀉模型的抑制效果及對(duì)小腸運(yùn)動(dòng)影響，以為開發(fā)復(fù)方中藥制劑治療動(dòng)物腹瀉提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1)供試中草藥 番瀉葉、白頭翁、黃柏、枸杞、馬齒莧，購自湖北省荊州市花臺(tái)弘衛(wèi)大藥房。

2)供試動(dòng)物 體重(20±2)g的清潔級(jí)KM實(shí)驗(yàn)小鼠共80只，雌雄各半，購自湖北省預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。購回后按組分籠飼養(yǎng)，籠器具及飲水瓶用前徹底消毒，每日清洗1次。

3)其他試劑 羧甲基纖維素鈉、奶粉、蔗糖、淀粉、活性炭末、印度墨汁等試劑由長江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

4)中藥復(fù)方的制備 稱取白頭翁60g、黃柏20g、枸杞10g、馬齒莧10g，將配好后的藥材按1∶8加入清水，武火加熱至沸騰后改文火煮30min后過濾，濾渣再按1∶6加入清水，煮沸30min后再過濾，將2次所得的濾液混合攪勻后濃縮至100mL，生藥含量為1g/mL。將制備所得的藥液置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

5)番瀉葉水煎液的制備 稱取番瀉葉30g，粉碎，加1000mL水煮沸約10min，將藥液用雙層紗布過濾，80℃水浴濃縮至0.3g/mL，濾液轉(zhuǎn)移至干凈滅菌的玻璃瓶中，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

6)營養(yǎng)性半固體糊的制備 取羧甲基纖維素鈉10g，溶于250mL蒸餾水中，分別加入奶粉16g、蔗糖8g、淀粉8g和活性炭末2g，攪拌均勻，配制成300mL約300g的黑色半固體糊狀物。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及處理

取供試小鼠80只，隨機(jī)分為4組，分別作為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、中藥低劑量組、中藥高劑量組，每組20只。

1.2.2 試驗(yàn)性小鼠腹瀉模型的建立

80只小鼠在建立腹瀉模型前禁食12h，自由飲水。第1、2周空白對(duì)照組用生理鹽水灌胃(0.4mL/只)，其余小鼠均用番瀉葉灌胃(0.4mL/只)，2周后發(fā)現(xiàn)空白對(duì)照組小鼠糞便正常，肛周毛發(fā)干凈尚未出現(xiàn)其他現(xiàn)象，其余小鼠糞便均為水樣糞便，肛周毛發(fā)污染，出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象，表明試驗(yàn)性腹瀉小鼠模型造模成功。

1.2.3 復(fù)方中藥對(duì)腹瀉模型小鼠的治療效果觀察

造模成功后，復(fù)方中藥低、高劑量組每只分別灌服藥液0.4mL，生藥含量分別為0.5g/mL和1.0g/mL，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組灌服等量生理鹽水，每天2次，連續(xù)給藥7d。

將小鼠分別置于代謝籠中，將籠子下置吸收紙墊，觀察小鼠的糞便狀況總共6h，在此期間更換濾紙。小鼠大便分為:糞便正常、肛周毛發(fā)干凈；而外形正常但水分較多、軟便、黏液便及水樣便屬于腹瀉的癥狀。根據(jù)濾紙上的腹瀉便灘數(shù)計(jì)為稀便次數(shù)。并計(jì)算各組小鼠的腹瀉率、稀便率和腹瀉抑制率，計(jì)算公式如下：

腹瀉率=(腹瀉小鼠只數(shù)/小鼠總只數(shù))×100%

稀便率=(稀便次數(shù)/總排便次數(shù))×100%

腹瀉抑制率=[(模型對(duì)照組腹瀉次數(shù)-中藥組腹瀉次數(shù))/模型對(duì)照組腹瀉次數(shù)]×100%

每日觀察記錄小鼠消耗的食物量、消耗的水量、排便次數(shù)、稀便次數(shù)、糞便的量和特征、皮膚光澤和死亡情況等。

1.2.4 復(fù)方中藥對(duì)腹瀉小鼠胃內(nèi)殘留率的影響

每組各取10只小鼠用于胃內(nèi)殘留率的測(cè)定。末次給藥后30min，給選取的小鼠灌胃營養(yǎng)性半固體糊0.04mL/g體重，灌胃后20min后將小鼠脫頸椎處死，打開其腹部，將胃賁門和幽門結(jié)扎。用濾紙將其擦拭干凈后稱取全胃的重量，然后沿胃大彎將胃剪開，將胃內(nèi)的內(nèi)容物洗去后再用濾紙將其擦拭干凈，這時(shí)稱取胃的凈重，將上述稱取的胃全重和胃凈重進(jìn)行比較，其差值為胃內(nèi)殘留物的重量，而胃內(nèi)殘留物的重量與所給半固體糊的重量之比為胃內(nèi)殘留率[1]。

1.2.5 復(fù)方中藥對(duì)腹瀉小鼠小腸運(yùn)動(dòng)的影響

每組剩下的10只小鼠用于碳墨推進(jìn)率的測(cè)定。末次給藥后30min各組小鼠給于印度墨汁灌胃，0.4mL/只。25min后，將小鼠脫頸椎處死，然后打開小鼠腹腔將其腹腔內(nèi)腸系膜分離出來。從幽門的上端至回盲部的下端剪取，將此段剪取的腸管置于平臺(tái)上，將其拉成直線，測(cè)量此時(shí)腸管的總長度，從幽門至墨汁前沿的距離作為“墨汁推進(jìn)長度”。按下式計(jì)算碳墨推進(jìn)率[2,3]：

碳墨推進(jìn)率=(墨汁推進(jìn)長度(cm)/小腸總長度(cm))×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 一般情況觀察

空白小鼠整個(gè)試驗(yàn)期間活潑好動(dòng)，飲食、飲水等情況均正常，生長良好，糞便正常，肛周毛發(fā)干凈，未出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象。試驗(yàn)組小鼠在灌服番瀉葉之后，出現(xiàn)了明顯的腹瀉現(xiàn)象，肛周毛發(fā)被稀便污染，精神萎靡，采食基本停止，飲水量也降低，活動(dòng)量減少，大便由稀糊狀到水樣不等，肛周被毛被糞便污染。

灌服復(fù)方中藥后，模型對(duì)照組小鼠腹瀉癥狀繼續(xù)加重，水樣糞便，肛周被毛被稀便污染，但無死亡現(xiàn)象。中藥低、高劑量組小鼠腹瀉癥狀逐漸減輕，隨著給藥次數(shù)的增加，小鼠排糞次數(shù)逐漸減少，糞便逐漸變稠直至成形，肛周毛發(fā)干凈，中藥高劑量組治療效果更好。表明該復(fù)方中草藥對(duì)試驗(yàn)性小鼠腹瀉有明顯的抑制作用，對(duì)于減少小鼠排糞次數(shù)和糞便含水量有積極的控制作用。

2.2 復(fù)方中藥對(duì)小鼠腹瀉的影響

復(fù)方中藥對(duì)小鼠腹瀉的影響觀測(cè)結(jié)果見表1。

表1 復(fù)方中草藥對(duì)小鼠腹瀉的影響

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。表2、表3同。

由表1可見，中草藥高劑量組、中草藥低劑量組、空白對(duì)照組的排便次數(shù)均顯著低于模型對(duì)照組的25.60±2.70(P<0.05)；稀便率亦顯著低于模型對(duì)照組的87.26±3.26(P<0.05)，表明小鼠腹瀉模型建立成功。空白對(duì)照組、中草藥低劑量組、中草藥高劑量組的排便次數(shù)比模型對(duì)照組分別降低了28%、31%、34%。由此可以看出，復(fù)方中草藥高劑量組對(duì)小鼠腹瀉有明顯的治療作用。

2.3 復(fù)方中藥對(duì)腹瀉小鼠胃殘留率的影響

采用營養(yǎng)性半固體糊法研究復(fù)方中藥對(duì)腹瀉小鼠胃殘留率的影響，結(jié)果見表2。

表2 復(fù)方中藥對(duì)腹瀉小鼠胃殘留率的影響

由表2可知，與模型對(duì)照組相比，中草藥高、低劑量組胃殘留率差異均極顯著(P<0.01)，表明該中草藥復(fù)方有抑制胃排空作用；而中草藥低劑量組雖然較模型對(duì)照組胃殘留率增高，但并沒有達(dá)到正常水平，仍然比空白對(duì)照組胃殘留率低4.93%，中藥高劑量組胃殘留率50.33±11.56達(dá)到并超過了空白對(duì)照組(50.13±2.50)，中藥高劑量組明顯比低劑量組的胃殘留率高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說明1.0g/mL劑量的中藥復(fù)方才能更好地抑制腹瀉小鼠的胃排空，增高其胃殘留率。

2.4 復(fù)方中藥對(duì)腹瀉小鼠小腸運(yùn)動(dòng)的影響

采用碳墨法研究復(fù)方中藥對(duì)腹瀉小鼠小腸運(yùn)動(dòng)的影響，結(jié)果見表3。

表3 復(fù)方中藥對(duì)腹瀉小鼠小腸運(yùn)動(dòng)的影響

由表3可知，模型對(duì)照組與空白對(duì)照組相比有極顯著性差異(P<0.01)，表明對(duì)番瀉葉致小鼠小腸運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)模型小鼠建立成功；與模型對(duì)照組比較，中藥高、低劑量組對(duì)小鼠的小腸蠕動(dòng)均有顯著性差異，高劑量組差異極顯著(P<0.01)，低劑量組差異也極顯著(P<0.01)。表明復(fù)方中草藥對(duì)腹瀉小鼠的小腸蠕動(dòng)抑制作用明顯，但高劑量組效果更好，已接近正常小鼠。

3 討論與小結(jié)

1)本研究采用番瀉葉灌胃復(fù)制模型，中草藥高劑量組的排便次數(shù)和稀便率分別為9.23±1.44、26.37±2.11，均顯著低于模型對(duì)照組的25.60±2.70(P<0.05)和87.25±3.26(P<0.05)，與低劑量組相比，中草藥高劑量組的腹瀉抑制率明顯增加，差異極顯著(P<0.01)，結(jié)果表明，中草藥高劑量組對(duì)小鼠的腹瀉有極顯著的控制作用。

2)本研究采用營養(yǎng)性半固體法和碳墨推進(jìn)法探索該中藥復(fù)方對(duì)腹瀉小鼠胃腸道運(yùn)動(dòng)的作用。結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組相比，中草藥高劑量組提高胃殘留率差異極顯著(P<0.01)，表明中草藥高劑量組有抑制胃排空作用，而中草藥低劑量組雖然較空白組胃排空率增高，但并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中草藥低劑量組的碳墨推進(jìn)率極顯著低于模型對(duì)照組(P<0.01)，而中草藥高劑量組差異極顯著(P<0.01)。表明復(fù)方中草藥對(duì)腹瀉小鼠的小腸蠕動(dòng)抑制作用明顯，對(duì)小鼠的腸道有明顯的保護(hù)作用。

3)本試驗(yàn)中所用藥物白頭翁具有抗菌抗病毒作用，其主要功效為祛火除濕、涼血止痢。黃柏性味苦寒，有清熱解毒，治療痢疾的功能，它一般與其他藥物組成復(fù)方以更好地發(fā)揮綜合功效。本研究采用的復(fù)方中草藥由白頭翁、黃柏、枸杞和馬齒覓4味單味藥物組成，通過建立小鼠腹瀉模型、營養(yǎng)性半固體法和碳墨推進(jìn)法試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方中草藥高劑量組對(duì)小鼠腹瀉起到了顯著的抑制作用，能夠有效調(diào)節(jié)動(dòng)物胃腸道微生物菌群抑制病原微生物的生長、繁殖，改善消化系統(tǒng)機(jī)能、降低腹瀉的發(fā)生及改善胃腸功能。該結(jié)果可為中草藥抗腹瀉機(jī)理和小腸運(yùn)動(dòng)的研究提供有效依據(jù)。

4)本研究首先給健康小鼠灌服番瀉葉湯復(fù)制腹瀉小鼠模型，然后用白頭翁、黃柏、枸杞、馬齒莧等制成中藥復(fù)方制劑對(duì)小鼠進(jìn)行灌藥治療，通過腹瀉小鼠的濕便次數(shù)、胃內(nèi)殘留率以及對(duì)小腸推進(jìn)率來探討試驗(yàn)用中藥復(fù)方對(duì)腹瀉小鼠的控制作用及對(duì)小腸運(yùn)動(dòng)的影響。研究結(jié)果表明該中藥復(fù)方對(duì)番瀉葉所致小鼠腹瀉有明顯的抑制作用，可有效保護(hù)小鼠腸道粘膜，縮短首次排便時(shí)間，并能顯著減少胃排空，增加胃殘留率。該中藥復(fù)方對(duì)腹瀉小鼠小腸運(yùn)動(dòng)的亢奮有明顯的抑制作用，且抑制的效果與用藥劑量有關(guān)。