青藤堿注射液關節內注射治療痛風性關節炎的實驗研究※

李元耿 孫 剛 丁 羽 時華南 金盛年

痛風性關節炎主要由于尿酸過多、嘌呤代謝紊亂、排泄障礙等因素引起尿酸濃度升高所致，尿酸濃度升高引起尿酸鹽在關節處沉積，造成關節疼痛、腫脹、畸形等。目前，臨床上治療痛風性關節炎主要采用別嘌呤、秋水仙堿、非甾體類消炎藥等。盡管上述藥物可有效降低患者血液中的尿酸濃度，減輕痛風性關節炎的相關臨床癥狀，但藥物副作用較大，限制了其臨床應用和推廣[1-2]。本實驗應用尿酸鹽結晶建立家兔痛風性關節炎模型，關節內注射青藤堿注射液等，觀察用藥后48 h的關節液、炎癥細胞計數、關節及周圍軟組織中白細胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的影響、滑膜組織炎癥程度，并行軟骨病理學檢查。篩選療效最佳的藥物，為臨床關節鏡手術后輔助用藥提供指導，現報道如下。

1 材料與方法

1.1實驗動物選取健康3個月齡2.2～2.5 kg雄性大耳白兔50只，留空白對照A組10只，剩余兔隨機平均分為B、C、D、E實驗組，每組10只。實驗組建立痛風性關節炎模型，A、B組給予0.2 ml無菌0.9%氯化鈉注射液關節腔注射，C組給予0.2 ml玻璃酸鈉關節腔內注射，D組給予0.2 ml青藤堿關節腔內注射，E組給予0.2 ml威靈仙關節腔內注射。

1.2痛風性關節炎模型建立大白兔于實驗室適應性飼養1周，1周后行以下實驗。20%烏拉坦（按5 ml/kg）麻醉大白兔，每只兔雙側膝關節脫毛消毒，各組每只兔右膝關節腔內注射尿酸鈉（Sigma公司提供，型號：T0211）、0.9%氯化鈉注射液混懸液0.6 ml致炎，觀察5 h，5 h后建立急性痛風性關節炎兔模型。

1.3治療方法A、B組兔給予0.2 ml無菌0.9%氯化鈉注射液（四川科倫藥業股份有限公司生產，批準文號：國藥準字H51021157）關節腔注射；C組兔給予0.2 ml玻璃酸鈉（昆明貝克諾頓藥品銷售有限公司生產，批號：5HD26Z）關節腔內注射；D組兔給予0.2 ml青藤堿（湖南正清制藥股份有限公司生產，批準文號：國藥準字Z43020279，批號：1706406）關節腔內注射；E組兔給予0.2 ml威靈仙注射液（瓦房店市中心醫院中醫科配置，含生藥為2 g/ml）關節腔內注射。

1.4檢測方法藥物注射48 h后處死所有大白兔，進行兔膝關節形態學、生化、免疫學及病理學檢查。

1.4.1 IL-1β及TNF-α水平檢測取兔關節滑膜及周圍軟組織樣本，采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）試劑盒及相關試劑檢測大白兔膝關節滑膜及周圍軟組織IL-1β及TNF-α水平，取關節滑膜、關節周圍軟組織作為標本，冰浴中將所取標本制作成勻漿，以1∶9與0.9%氯化鈉注射液混合，離心機旋轉離心（轉速每分鐘3000 r，離心半徑6 cm，離心10 min），取上清液，采用ELISA 法檢測IL-1β、TNF-α 水平。

1.4.2病理學檢查用手術刀切開兔膝關節，取滑膜和周圍軟組織為標本，福爾馬林固定標本，進行病理學檢查。關節軟骨病理學檢查：完整取出軟骨，行HE、Sanfranin-O染色，以光鏡觀察并行Mankin,s評分，每組各取2份軟骨標本，行透射電鏡觀察。

1.5觀察指標觀察每組兔關節腫脹程度、關節液白細胞計數（WBC）、膝關節及周圍軟組織中IL-1β、TNF-α水平。采用Mankin，s評分評估每組兔的病理學組織檢查情況[3]，包括軟骨結構、軟骨細胞、HE染色以及潮線完整性。軟骨結構0～3分，軟骨細胞0～3分，HE染色0～4分，潮線完整性0～2分，評分越高，病理學情況越差。

1.6統計學分析采用 SPSS 18.0統計軟件進行數據處理，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析，計數資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1各組兔關節腫脹程度、關節液白細胞計數比較B組兔關節腫脹程度及關節液白細胞計數大于C、E組，C、E組大于A、D組，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。見表1。

表1 各組兔關節腫脹程度及關節液白細胞計數情況比較(±s)

表1 各組兔關節腫脹程度及關節液白細胞計數情況比較(±s)

組別 關節腫脹程度(cm) 白細胞計數(×106/L)A組(n=10) 0.2±0.1 1.0±0.1 B組(n=10) 3.0±0.3 5.6±0.1 C組(n=10) 1.7±0.2 2.8±0.2 D組(n=10) 1.3±0.2 2.4±0.1 E組(n=10) 2.0±0.2 3.0±0.1 F值 237.05 1742.50 P值 ＜0.05 ＜0.05

2.2 各組兔膝關節及周圍軟組織IL-1β、TNF-α水平比較B組兔關節和周圍軟組織中IL-1β、TNF-α水平高于C、E組，C、E組高于A、D兩組，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。見表2。

表2 各組兔膝關節及周圍軟組織IL-1β、TNF-α水平比較(pg/mgprot,±s)

表2 各組兔膝關節及周圍軟組織IL-1β、TNF-α水平比較(pg/mgprot,±s)

膝關節 周圍軟組織組別IL-1β TNF-α IL-1β TNF-α A 組(n=10) 22.6±1.4 38.6±2.5 21.9±1.2 38.2±2.0 B 組(n=10) 94.8±3.2 152.8±6.3 94.2±3.0 151.9±6.0 C 組(n=10) 43.8±2.5 78.9±4.5 43.1±2.1 78.2±4.1 D 組(n=10) 37.5±1.6 69.5±3.8 36.8±1.4 68.5±3.4 E 組(n=10) 54.8±2.3 90.4±4.2 54.0±2.1 89.7±4.0 F值 1413.06 896.89 1756.07 1037.98 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3各組兔病理學組織檢查比較A、D組兔軟骨結構、軟骨細胞、HE染色以及潮線完整性評分比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）；C、E組上述評分比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）；B組兔上述評分明顯高于C、E組，C、E組高于A、D組，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。見表3。

表3 各組兔病理學組織檢查比較(±s,分)

表3 各組兔病理學組織檢查比較(±s,分)

組別 軟骨結構 軟骨細胞 HE染色 潮線完整性A 組(n=10) 0.4±0.1 0.3±0.1 0.6±0.2 0.3±0.1 B 組(n=10) 2.2±0.5 2.4±0.4 2.6±0.6 1.4±0.3 C 組(n=10) 1.7±0.5 1.5±0.3 1.8±0.5 0.9±0.2 D 組(n=10) 0.6±0.1 0.4±0.1 0.8±0.2 0.4±0.1 E 組(n=10) 1.6±0.4 1.4±0.2 1.8±0.4 0.8±0.2 F值 43.38 121.77 39.53 50.79 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

3 討論

隨著醫學的不斷發展，顯微技術在醫學中廣泛應用，其中以關節鏡為代表的微創技術在臨床外科介入治療中有較好的治療效果，在治療痛風性關節炎中起到重要作用。痛風性關節炎患者病變嚴重時常伴軟骨、軟組織破潰，單純藥物治療無法逆轉病理過程，適當的外科介入治療是逆轉關節病變的重要措施[4]。然而，關節鏡手術有時不能完全清除痛風結石，術后需輔助關節內注射藥物以減輕水腫，清除結石，緩解疼痛。目前，臨床上治療急性痛風性關節炎的效果并不理想，缺乏迅速有效的治療方式[5]。常用藥物為玻璃酸鈉，部分重癥患者可同時采用關節內注射皮質類固醇藥物以增強療效。對痛風性關節炎的理想治療策略是局部給藥，西藥目前尚無更好的治療方法[6]。玻璃酸鈉與蛋白質構成軟骨表面的不定結構，可減少組織摩擦，起到緩沖作用，防止軟骨損傷。此外，關節內補充玻璃酸鈉可以改善關節腔內液體環境，形成屏障保護作用，減少疼痛，打破惡性循環。威靈仙具有通利關節宣痹止痛的效果，能促進尿酸排泄，減少膝關節中尿酸鹽的沉積，改善關節內環境。盡管玻璃酸鈉或威靈仙能改善關節腔內環境，但對于已經發生病變的軟骨組織治療效果并不明顯。

中醫中痛風的概念不同于西醫，中醫認為痛風以趾、指關節紅腫疼痛，或伴有發熱等為主要表現。由于中醫中藥治療痛風歷史悠久，方法多樣，辨證靈活，臨床療效肯定，一般無明顯毒副作用。加之我國中藥資源豐富，價格低廉。多數學者將疼痛的治療轉向中藥上以尋找突破[7-9]。但中藥種類繁多、成分復雜，中藥治療痛風性關節炎的研究仍然相對缺乏，治療作用機制尚未完全明確。

青藤堿是一種中藥制劑，臨床上主要以鹽酸鹽的形式入藥，具有明顯抗炎、降血壓、免疫抑制以及抗心律失常等作用[8]?，F代藥理學研究表明，青藤堿中含有活性生物堿，可起到祛風鎮痛、抗炎降壓的作用，主要通過丘腦-垂體-腎上腺系統增強腎上腺皮激素的分泌，發揮非特異性抗炎效果。研究顯示，青藤堿可抑制IL-1和TNF-2水平，減輕滑膜炎癥；還能抑制A型細胞分泌，發揮抗炎、消腫的作用，從而減少關節液的分泌[9]。因此，本實驗采用大耳白兔建立痛風性關節炎模型，使用青藤堿治療，觀察青藤堿對痛風性關節炎的治療效果。結果發現，使用青藤堿治療的D組兔在膝關節腫脹程度、關節液白細胞計數、膝關節及周圍組織IL-1β、TNF-α水平上明顯優于C、E組，C、E組優于未采用治療的B組，提示采用青藤堿治療痛風性膝關節炎兔效果顯著。分析各組兔病理組織檢查結果發現，A、D組大白兔的Mankin，s評分無顯著差異，優于C、E組，C、E組優于B組，提示盡管玻璃酸鈉和威靈仙也具有一定的治療效果，但青藤堿的治療效果更佳，膝關節組織改善更佳。姚茹冰等[10]研究發現，青藤堿不僅可以通過局部靜脈注射給藥，還能進行關節腔注射給藥，均安全可靠，緩解疼痛效果滿意，疼痛緩解總有效率達94.7%，可能與青藤堿能迅速改善局部血管、神經及軟組織的血液供應，消除炎癥、水腫等作用有關。

綜上所述，青藤堿能有效降低痛風性關節炎關節滑膜中TNF-α、IL-1β水平，抑制炎癥細胞因子的惡性循環，能改善病變關節腫痛癥狀，從而對痛風性關節炎起到治療作用，為臨床治療痛風性關節炎、緩解關節腫痛提供較好療效。