MUC1基因表達和CXCL16在乳腺癌診斷中的應用

鄧 君，洪 華，劉 蔚，孫昌瑞

(四川省醫學科學院·四川省人民醫院檢驗科，四川 成都 610072)

乳腺癌是嚴重威脅女性生命的惡性腫瘤，發病率和死亡率呈上升趨勢，臨床上對乳腺癌的診斷，有X射線、超聲、免疫組化等，但或靈敏度較低，或特異性較差，容易出現漏診、誤診，而血清腫瘤標志物的檢測簡便快捷、創傷小等優勢，廣泛應用于臨床，但是單一腫瘤標志物對臨床診斷有較大局限，本研究探討MUC1和CXCL16聯合檢測對乳腺癌診斷的臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料2016年1月至2017年12月我院明確病理診斷的157例乳腺癌患者，年齡24～76歲；102例良性乳腺瘤患者，其中纖維瘤59例和脂肪瘤43例，年齡21～73歲；126例其他腫瘤患者，其中肺癌31例，卵巢癌34例，肝癌28例和結腸癌33例，年齡21～73歲，對照組為體檢中心健康女性50例，年齡20～77歲。受試者和患者手術前均空腹采血3 ml，MUC1檢測需1 mg/ml EDTA抗凝，CXCL16不抗凝，均3000 r/min 離心 5 min。

1.2總RNA提取及RT-PCR淋巴細胞分離液分離單個核細胞，TRIZOL液提取總RNA，AMV反轉錄酶體系作RT-PCR，42 ℃反應55 min。

1.3SYBRGREENFQ-PCR

1.3.1引物和探針 采用PE公司Primer Express5.0軟件在高保守區設計MUC1的引物和探針，由上海華舜生物公司合成。β-actin內對照試劑盒：由美國ABI生物公司生產。MUC1正義引物正向，5’-3’CGTCGTGGACATTGATGGTACC；MUC1反義引物，5’-3’GGTACCTCCTCTCACCTCCTCCAA；β-actin正義引物：5’-3’CTCTTCCAGCCTTCCTTCCT；β-actin反義引物：5’-3’AGCACTGTGTTGGCGTACAG。

1.3.2SYBR GREEN FQ-PCR SYBR Premix Ex TaqTM(2x) 10 μl，PCR Forward Primer(10 μmol/L) 2 μl，PCR Reverse Primer(10 μmol/L) 2 μl，模板(cDNA 溶液)2 μl，去RNA酶水4 μl，反應條件：95 ℃ 10 ml cycle，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s 40 cycles，95 ℃ 15 s，60 ℃1 m，95 ℃30 s，60 ℃15 s 1 cycle。

1.3.3陽性率的計算[1]應用2-ΔΔCt方法計算目的基因相對表達量。將健康人組基因表達相對量設定為1，2-ΔΔCt值為乳腺癌組相對健康人組基因表達的倍數，以 2-ΔΔCt>2 判斷為陽性。

1.4CXCL16的檢測采用酶鏈免疫吸附法進行測定，試劑盒由美國R&D生物公司提供。

1.5統計學方法應用 SPSS 17.0 軟件進行數據分析。計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用方差分析及SNK-q檢驗；計數資料比較采用χ2檢驗。P< 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1對照組與疾病組MUC1和CXCL16測定結果

對照組MUC1和CXCL16與良性乳腺病組差異無統計學意義(P> 0.05)，乳腺癌組MUC1和CXCL16均高于對照組和良性乳腺病組，MUC1高于其他腫瘤組(P< 0.05)，見表1。

表1 對照組與疾病組MUC1和CXCL16測定結果

#與對照組、良性乳腺疾病組和其他腫瘤組比較，P< 0.05；×與對照組、良性乳腺疾病組比較，P< 0.05

2.2MUC1和CXCL16在乳腺癌臨床分期的檢測結果乳腺癌組Ⅲ+Ⅳ期MUC1和CXCL16定量高于I+II期(P< 0.05)，見表2。

表2 MUC1和CXCL16在乳腺癌臨床分期的檢測結果

2.3MUC1和CXCL16在乳腺癌手術前后的檢測結果MUC1和CXCL16在手術后顯著下降(P< 0.05)，見表3。

表3 MUC1和CXCL16在乳腺癌手術前后的檢測結果

2.4MUC1和CXCL16用于乳腺癌診斷的評價MUC1和CXCL16對乳腺癌診斷靈敏度、特異性、陽性預測值和陰性預測值見表4，MUC1檢測特異性高，CXCL16檢測靈敏度高，MUC1和CXCL16聯合檢測可提高對乳腺癌靈敏度、陽性預測值和陰性預測值。

表4 MUC1和CXCL16對乳腺癌的診斷性能評價(%)

※與CXCL16比較，P< 0.05；#與MUC1比較，P< 0.05；*與CXCL16和MUC1比較，P< 0.05

3 討論

MUC1 是一類高分子量糖蛋白，基因定位于染色體1q21，具有基因多態性，廣泛表達于消化系統、呼吸系統和生殖系統等[2]，臨床研究表明 MUC1 在 95%的乳腺癌中高表達，其異常表達與腫瘤細胞的生長、分化、浸潤轉移、粘附以及機體的免疫監控有關[3]，同時與腫瘤的惡性程度及預后不良密切相關。人們越來越多的將其用于乳腺癌相關基因的研究[4，5]，本研究也發現，MUC1在乳腺癌組的表達顯著高于正常組，良性乳腺疾病組和其他腫瘤組，診斷特異性較高，與臨床分期有關，手術后明顯下降，說明MUC1作為一種潛在的乳腺癌血清學的一種重要標志物，是診斷乳腺癌和監測術后復發、觀察療效的較好指標之一。

CXCL16基因定位于染色體17p13上，是新近發現的趨化因子，與動脈粥樣硬化、肝炎、風濕免疫、獲得性免疫缺陷綜合征等免疫及炎癥相關[6，7]，近年來，有報道CXCL16 及受體 CXCR6 在惡性腫瘤中的高表達，可刺激腫瘤細胞體外增殖、侵襲、轉移或復發[8，9]，但與乳腺癌關系的報道較少，還未見與其它乳腺癌的腫瘤標志物比較分析的相關報道，本研究對 CXCL16 與乳腺疾病的關系進行了分析，結果顯示，CXCL16均高于正常對照組和良性乳腺疾病組，乳腺癌組和其他腫瘤組的CXCL16無顯著性差異，CXCL16在手術后有顯著下降，在乳腺癌組中，隨著臨床分期的升高，CXCL16遞增，Ⅲ+Ⅳ期顯著高于I+II期，提示 CXCL16 表達可能參與乳腺癌發生、發展過程，但CXCL16雖然靈敏度高，而特異性卻較低。

本研究發現，在對乳腺癌診斷中，MUC1的特異性較高，CXCL16靈敏度較高，MUC1和CXCL16聯合檢測可提高對乳腺癌靈敏度、陽性預測值和陰性預測值，MUC1和CXCL16對乳腺癌術后隨訪有一定的意義，考慮到基層醫院可能缺乏做基因檢測的昂貴儀器，可以先檢測CXCL16，再采用基因診斷和病理學方法進一步確診，有助于提高對乳腺癌早期診斷。