高效液相色譜法測定磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量

楊成 陸華龍（通訊作者）（陜西合成藥業股份有限公司 陜西 西安 715100）

磷酸左奧硝唑酯二鈉為化學藥物1.1類新藥。該新藥為奧硝唑的左旋異構體磷酸酯衍生物的鈉鹽，作為左旋奧硝唑的前體藥物，磷酸左奧硝唑酯二鈉在體內可以迅速分解為有效成分左旋奧硝唑而起到抗厭氧菌的作用。主要用于：用于治療由脆弱擬桿菌、狄氏擬桿菌、多形擬桿菌、普通擬桿菌、梭狀芽胞桿菌、真桿菌、消化球菌和消化鏈球菌、幽門螺桿菌、黑色素擬桿菌、梭桿菌、牙齦類桿菌等敏感厭氧菌所引起的多種感染性疾病。迄今為止，尚未見磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量方法的相關報道，鑒于此，我們研究開發了磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量測定方法采用高效液相色譜法測定，旨在尋找一種更加科學合理的檢測方法。

1.儀器與試藥

儀器：美國 Thermo U3000高效液相色譜儀，包括 U3000四元泵，U3000可變檢測波長, U3000柱溫箱，U3000自動進樣器。

試藥：磷酸左奧硝唑酯二鈉由陜西合成藥業股份有限公司提供。

對照品：磷酸左奧硝唑酯二鈉由陜西合成藥業股份有限公司提供。

甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2.方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Welch，XtimateTM-C18，（4.6×250mm Column 5-Micron）檢測波長：321nm；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min；流動相：以含0.01%庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（用三乙胺調pH至6.5）-甲醇（85：15）。理論板數按磷酸左奧硝唑酯二鈉峰計算應不低于2500。

2.2 對照品溶液的制備

取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成每 1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉0.04mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取磷酸左奧硝唑酯二鈉適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成每 1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉0.04mg的溶液， 即得。

2.4 專屬性試驗

取流動相溶液按上述色譜條件測試。結果在磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品出峰位置未見其它雜質的干擾峰(見圖1～3)，說明按本文的試驗條件測定， 空白溶劑無干擾。

圖1 空白溶劑圖譜

圖2 供試品溶液圖譜

圖3 對照品溶液圖譜

2.5 線性關系考察

精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量，用流動相溶解并稀釋成每1ml含磷酸左奧硝唑酯二鈉91.8、81.6、71.4、61.2、51.0、40.8、30.6、20.4ug的溶液，精密量取各溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積Y為縱坐標，以濃度X為橫坐標，繪制標準曲線，見表1。

表1 含量測定標準曲線

結論：線性回歸方程Y=0.5341X+0.7177 R2=0.9994 n=8磷酸左奧硝唑酯二鈉在91.8～20.4μg/ml的濃度范圍內線性關系較好。

2.6 重復性試驗

精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉供試品適量，共六份，分別用流動相溶解并稀釋制成含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug/ml的溶液，作為供試品溶液，精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug/ml的溶液，作為對照品溶液。取供試品和對照品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算含量，試驗結果見表2。

表2 磷酸左奧硝唑酯二鈉含量測定重復性結果

2.7 溶液穩定性試驗

精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug/ml的溶液，室溫下放置0、2、4、6、8、10、12小時后測定，結果見表3。

表3 含量測定溶液放置穩定性

2.8 回收率試驗

供試品溶液的制備：精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉32mg、40mg、48mg各三份，分別置9個10ml量瓶中，分別用流動相溶解，搖勻，精密量取1ml，置100ml量瓶中，用上述溶劑稀釋制成每1ml中約含磷酸左奧硝唑酯二鈉32ug、40ug、48ug的溶液，即得80%、100%、120%的樣品溶液各三份；另精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量，同法制成每1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug的溶液，作為對照品溶液，照上述色譜條件測定，計算出本品含量測定的回收率，結果見表4。

表4 含量測定回收率試驗結果

2.9 含量測定

取磷酸左奧硝唑酯二鈉適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成每1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉0.5mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量，精密稱定，同上操作，作為對照品溶液，同法測定。按外標法以峰面積計算，結果見表5。

表5 含量測定結果

3.討論

我們選用高效液相色譜法測定磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量，使其和制劑測定方法相統一，減少各方法間的誤差，準確的控制制劑生產各環節的含量，避免因原料含量中磷酸左奧硝唑酯二鈉測定過高，導致投料量小，給中間體和成品帶來含量過低重新加料的麻煩。