COX-2、MMP-2、VEGF在反流性食管炎癌變過程中的表達及意義

陳東來 林順權 宋成虎 鐘新友

（惠東縣第二人民醫院內科 廣東 惠東 516351）

反流性食管炎（reflux esophagitis，RE）屬于常見消化道疾病，是由于混合反流造成食管黏膜損傷引起的炎性病變。臨床統計數據顯示：2014—2018年我國反流性食管炎發生率年增高2.3%[1-2]，而且Barrett食管患者向EAC轉變的風險是正常人群的60～120倍。本文采用免疫組化技術檢測COX-2、MMP-2、VEGF在各類型正常、反流性食管炎、BE、食管癌組織中的表達，并結合臨床實踐，分析三者表達變化的意義，以及與癌變發生的相關性。

1.一般資料和研究方法

1.1 一般資料

收集經病理證實的中山大學孫逸仙紀念醫院外科手術切除的食管癌石蠟標本12例（10%的福爾馬林液固定），內鏡下獲得正常食管上皮15例，輕、中、重度反流性食管炎20例，Barrett食管13例。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫組化 內鏡下采用Lugol液染色，鉗取橘紅色病變組織，甲醛中常溫固定。石蠟包埋，切片，HE染色；樣本漂洗、脫蠟；30mlH2O2阻斷內源性過氧化物酶，微波抗原修復，非免疫血清封閉，觀察各期病理變化[3]。

1.2.2 RT-PCR法 研磨管中加入1mlTrozil進行研磨，完成后倒入EP管中，在4℃環境中進行1200r/min離心，離心時間為5min，半徑為10cm；取上清液，靜置5min；加入200l氯仿，劇烈震動15s，常溫環境中靜置3min；在4℃環境中進行1200r/min離心，離心時間為5min，半徑為10cm；取上層水相移入另一EP管中，加入等體積的異丙醇，常溫環境中靜置10min，并在此進行4℃環境下1200r/min速度的離心，離心時間為10min，可見白色沉淀[4]；除去上清，加入75%濃度的乙醇1ml進行清洗，進行4℃環境下7500轉/min離心，離心時間為1min，防止于常溫環境中進行干燥，放置時間為5min；用25μl DEPC處理過的離子水溶解RNA樣品。用瓊脂糖凝膠電泳鑒定RNA降解情況，分光光度測量RNA含量，并放置于75℃冰箱中備用。

1.3 統計分析

2.結果

2.1 COX-2、MMP-2、VEGF mRNA表達

在反流性食管炎發展過程中，的COX-2、MMP-2、VEGF隨病程發展逐漸增強，在正常、RE、BE、EAC間存在顯著差異（P＜0.05），具有統計學意義；COX-2、MMP-2、VEGF在BE、EAC中明顯高于正常和RE組，BE和EAC相比也存在顯著差異，具有統計學意義（P＜0.05），如表1所示。

表1 COX-2、MMP-2、VEGF mRNA表達情況（±s）

表1 COX-2、MMP-2、VEGF mRNA表達情況（±s）

注：相對于正常組，aP＜0.05；相對于RE組，bP＜0.05；相對于EAC組，cP＜0.05。

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2.2 COX-2、MMP-2、VEGF與食管癌的相關性

通過對COX-2、MMP-2、VEGF的多元Logistics分析，發現其在食管癌組織中的表達呈正相關，如表2所示。

表2 COX-2、MMP-2、VEGF 的Logistics分析

3.討論

COX-2（環氧化酶-2）在刺激因子影響下表達量增加，促進細胞過分增殖，抑制細胞凋亡，而且加速腫瘤新生血管生成，促進腫瘤細胞浸潤和轉移。血管生成因子（VEGF）既能促進血管內皮細胞增殖，又能促進血管滲漏，而且誘導淋巴管形成，為腫瘤持續生長提供充足血液[5]。基質金屬蛋白酶-2（MMP-2）被激活后可以促進腫瘤血管形成，并將細胞基底膜、細胞外基質IV、V型膠原和纖維連接蛋白成分水解，導致基底膜受損，腫瘤細胞浸潤結締組織基質，侵入淋巴管而發生遠端轉移。本研究結果顯示，隨病程發展COX-2、MMP-2、VEGF表達增強，說明COX-2、MMP-2、VEGF與食管癌發生、發展和轉移密切相關。國內研究結果顯示[6]，COX-2基因暴露于前列腺E2細胞株，能夠顯著提高VEGF、MMP-2表達，本研究結果與其研究相符，說明COX-2、MMP-2、VEGF不僅參與食管癌的發生，而且三者共同表達可提高食管癌的發生率，導致食管癌患者預后不良。

綜上所述，COX-2、MMP-2、VEG與反流性食管炎癌變呈正相關性，三者共同表達可以促進食管癌發生、發展，促進其發生遠端轉移。因此， 通過檢測COX-2、MMP-2、VEG三者的表達程度，可能更準確地預測食管癌的發展，成為食管癌變的預測手段。