免疫組化在惡性漿膜腔積液患者中的診斷效果及與預后的相關性研究

楊春蘭

（新疆生產建設兵團第六師醫院病理科 新疆 五家渠 831300)

1.前言

漿膜腔積液在臨床上較為常見，尤其是對于漿膜腔積液作為唯一體征的就診患者而言，醫護人員通過細胞學的檢查其良惡性，這對患者疾病的診斷、治療以及預后都有著重要的意義。由于傳統的細胞學圖片診斷較難分辨出患者腫瘤的來源以及分型，因此晚期患者獲得組織學標本的幾率很小，因此在日常工作中利用漿膜腔積液樣本制備細胞蠟塊，并進行相應的免疫組化檢驗，可提升總體的腫瘤診斷效率，為腫瘤的個體治療提供了參考依據[1]。所以為了能夠進一步完善對惡性漿膜腔積液患者的治療方案，我院主張將細胞蠟塊切片免疫組化標記應用于惡性漿膜腔積液病理診斷中，為探尋這一方案是否值得在臨床上推廣，本文對此展開了研究，現具體內容如下。

2.資料與方法

2.1 一般資料

將2016年4月—2018年3月在我院治療并留院觀察的60例惡性漿膜腔積液患者作為研究對象，并按照治療藥物的不同進行隨機分組。將使用傳統細胞學涂片檢測的30例患者視為對照組，將其余30例患者使用細胞蠟塊切片免疫組化標記檢測納入觀察組。對照組中男患者10例，女患者20例；年齡范圍在35～60歲之間，平均年齡為（46.13±2.12）歲；送檢標本：胸水10例，腹水15例，心包積液5例。觀察組中男患者11例，女患者19例；年齡范圍在36～61之間，平均年齡為（46.25±2.56）歲；送檢標本：胸水15例，腹水10例，心包積液5例。將兩組患者的一般資料進行比對，發現組間數據差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

2.2 檢測方法

給予對照組患者常規細胞學涂片檢測，操作方法如下：送檢的30例惡性漿膜腔積液標本中，每例標本內100毫升容量均置入離心管中，每分鐘2000轉并且低速離心旋轉10分鐘。與此同時，丟棄上清液所保留的沉淀物，取沉淀物涂片，將濕片放入90%乙醇溶液中固定，并使用常規HE進行染色[2]。最后使用BD公司生產的液基細胞沉降式制片染色機，按照上述的操作步驟進行制片。在細胞快切片及HE染色方面。使用標本100ml置入一次性的離心管中，經過低速離心機每分鐘2000賺的碎度，離心15分鐘，棄上清液，如果離心后沉淀物較少則需要多次加入膜腔積液重復離心，并在沉淀物足夠的情況下形成固塊，手機底部沉淀物，放入包埋盒內，待經過10%中性福爾馬林固定后，進行全自動脫水機脫水、包埋、切片以及HE染色。給予觀察組患者細胞蠟塊切片免疫組化標記檢測，操作方法如下：首先進行細胞蠟塊的制備，細胞蠟塊制作是將患者的檢體液標本送入標本室并放置20分鐘，再吸取瓶底液體60毫升，分別放置在4只離心管內，每分鐘2500轉，離心5分鐘，棄上清液，再將4只離心管內的沉淀物合并入1只離心管后再次進行離心，隨后將離心沉淀物用濾紙包裹后放置4%中性甲醛內并固定3小時以上，待固定完畢后進行常規處理，石蠟包埋切片以及HE染色。其次進行免疫組化，采用BD公司生產的全自動免疫組化染色機進行免疫組化染色。針對來源不明的腺癌，男性患者常規選擇CK7、CK12、Villin等標記，女性患者常規選擇WT-1、CA125、GCDFP-15等標記，針對間皮細胞難以區別的患者，需增加MC、calretinin、CK5/6標記。所有的抗體均在福州生物技術有限公司選購，常規設置為陽性、陰性對照。

2.3 觀察指標

觀察傳統細胞學涂片檢測和細胞蠟塊切片免疫組化標記檢測胸腹水的檢出率，同時對所有患者的惡性漿膜腔積液的細胞學特點、細胞涂片、細胞切片、免疫組化的病理結果和臨床預后的差異性進行分析。

2.4 統計學處理

將相關數據用SPSS20.0統計學軟件進行分析處理，使用（±s）表示計量資料，使用t進行組間數據對比，若P值小于0.05，說明兩組數據的差異具有統計學意義。

3.分析

3.1 分析惡性漿膜腔積液的細胞學特點

典型的腺癌細胞主要特點有：粘附性強、經常凝聚成團、呈現出腺樣排列、核漿增大，但分化較好的腺癌細胞異型性、核仁不明顯、與增生的間皮細胞難以鑒別。鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤以及淋巴癌細胞缺乏粘附性，常常彌漫或者散在分布。

3.2 分析所有患者細胞涂片、細胞切片、免疫組化病理結果

60例惡性漿膜腔積液標本中，20例有惡性細胞，30例有疑似異型細胞。惡性標本中腺癌10例，其與10例經過參考相關的臨床資料后初步考慮為神經內分泌癌5例，惡性間皮瘤3例、淋巴癌2例。細胞學涂片中的腺癌細胞呈現出球星團狀，與之相比，細胞蠟塊切片中的腺癌細胞的形態結構與其有較高的相似之處，根據分化程度的不同，癌細胞可凝聚成腺管狀、潤透裝以及菊形狀的腺樣結構。縣癌細胞具有較為明顯的異型性，背景中的間皮細胞多分散排列，少數形成腺腔。其他的腫瘤病例中涂片和細胞蠟塊切片細胞形態基本相似，但石蠟切片中腫瘤細胞較為集中，且固定性較好，有利于免疫組化檢測。30例有疑似異型細胞病例中，有12例細胞涂片細胞出現松散狀態，并且核質增大，細胞的大小較為一致，初步考慮為增生間皮細胞，細胞蠟塊切片中的細胞排列比較集中，偶爾有腺腔樣的結構，個別呈現出印戒樣，有些細胞核大稍濃染，呈一定的異型性，所以需要與腺癌進行鑒別。60例患者中有30例患者進行了免疫組化染色，并根據免疫組化結果來確定細胞性質以及可能的來源。結果中顯示：抗體呈色清晰，背景干凈，未見非特異性著色。30例腺癌中除了3例無臨床相關資料證實外，其余均經過臨床檢查證實。

4.結果

4.1 兩組患者胸腹水腫瘤細胞陽性檢出率比較

如表1所示，觀察組檢出的陽性率高于對照組，組間差異具有統計意義（P＜0.05）。

表1 兩組患者胸腹水腫瘤細胞陽性檢出率對比（n/%）

4.2 免疫組化結果與患者預后的關系

60例患者經過隨訪22個月的調查，從中發現陽性患者（30例）的1年生存率低于陰性患者（30例），且P＜0.05，組間差異具有統計意義。

表2 惡性膜腔積液陽性組和陰性組1年生存率對比（%）

5.討論

細胞蠟塊技術在國外成為細胞學診斷上作為常規的一項技術，目前國內的部分醫院已逐步開展。細胞蠟塊技術的要點在于將標本置于離心沉淀的基礎上，經過甲醛固定液的處理形成細胞塊，然后再進行常規脫水及其切片染色。與常規的細胞學涂片相比，細胞蠟塊切片更能在組織學形態上最為接近組織學切片，并且結構清晰，從而減少了細胞學制片中的誤診率。采用細胞蠟塊切片不僅可以提升切片的制作，保存較為完整的細胞，提高臨床檢出率，同時還可以對患者進行免疫組化染色，進一步地確定患者轉移性腫瘤的組織來源。

免疫組化是外科病理診斷中常見的技術之一，其診斷結果有助于確定患者腫瘤的額良性以及組織的來源。本次研究中發現胸腹水以轉移性腺癌較為多見，并且能篩選出多種抗體，對觀察組患者進行惡性漿膜腔積液的標記，結果表明，利用免疫組化加之細胞蠟塊切片的配合有助于確定轉移性腫瘤組織的來源[3]。例如TTF-1、CDX-2等組合可使用起源組織不明腺癌的鑒別診斷。TTF-1主要用于原發性肺癌的標記物，其在原發性肺腺癌的敏感性為73%；CDX-2是基因系尾型同源盒基因，對正常的腸上皮具有相對的特異性，相對于其他的標志物，CDX-2對結直腸癌的特異性最高，并且敏感度高達90%[4]。因此通過運用抗體組合基本特征可幫助確定患者惡性漿膜腔積液的來源，為臨床的診斷提供了重要的指導作用。

一直以來，有關惡性漿膜腔積液陽性患者的預后問題尚存在一些爭議，相關報道指出不吸煙的惡性漿膜腔積液患者術后與陰性患者比較有著較差的無疾病生存期，在惡性漿膜腔積液患者確診后的1年內，疾病的進展以及復發率均是陰性患者的2倍[5]。如表2所示，陽性患者的生存率低于陰性患者，從而可推測出惡性漿膜腔積液陽性可能影響患者預后不良。

綜上所述，在對惡性漿膜腔積液患者的治療診斷過程中，對患者采取細胞蠟塊切片免疫組化標記檢測可提高陽性檢出率，值得在臨床上推廣應用。