不同制備方法對當歸提取物的質量影響

嚴小萍 吳慧峰

（1江蘇省如皋市人民醫院中藥房 江蘇 如皋 226500）

（2江蘇省南通三越中藥飲片有限公司 江蘇 南通 226300）

中藥藥材中的有效成分含量與藥材的質量、安全性、有效性緊密相關，因此，對其中的成分進行一定的分析可以有效改善制備方法，提高藥材質量。中藥材的成分比較復雜，僅根據單種成分并無法有效地對質量進行評估，對多種成分進行測定、分析已成為保證中藥質量的關鍵[1]。

當歸是中醫上的一種藥材，它屬于傘形科植物。當前有很多對當歸質量進行控制的方法，主要有指紋圖譜、薄層色譜鑒別等，阿魏酸在多種中藥材中存在，僅將其作為測定指標并不能全面的對當歸質量以及當歸提取物的質量進行判斷[2]。當歸中還有啟用它有效的成分為藁本內酯、丁烯基苯酞，但是該成分穩定較差，對其進行質量控制難度較大。因此，尋找有效地制備方式對于保證當歸提取物質量有著積極的意義。在不同制備方法對當歸提取物的質量影響研究過程中，應用乙醇滲濾法進行制備，藁本內酯、阿魏酸提取率較高，現報道如下。

1.資料與方法

1.1 儀器與試藥

儀器為美國Agilent公司提供的1100系列HPLC系統。藁本內酯、阿魏酸對照品來自上海中藥創新研究中心，純度超過98%，所用的水為純凈水，色譜純為乙腈，其他的試劑為分析純；當歸詳細信息見表1，且經過上海中藥研究所吳立宏博士對所有的當歸進行了鑒定，確定為均是傘形科植物A.sinensis的根[3]。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 選用WatersNova一PakC18(150mmX3.4mm)的色譜柱；流動相選用乙腈（B）和酸水(A,磷酸調pH4)；進行梯度洗脫的條件為：5%～78%的乙腈，0～20min,78%～78%乙腈，20～25min；檢測的波長為350nm；流速為1.0mL/min-1；柱溫為25℃。通過以上色譜條件，可以使藁本內酯、阿魏酸與相鄰組分的基線徹底分離，色譜分離程度超過1.5[4]。

1.2.2 制備溶液 對當歸提取物進行精密吸取，量為5mL，后將95∶5（70%乙醇-甲酸）的溶劑加入其中定容到100mL，分析之前將其應用0.45μm微孔濾膜進行過濾，濾液就是所需要的供試品溶液[5]。對適量的藁本內酯對照品進行精密稱取，應用乙腈將其定容到25mL且存放在棕色量瓶內，后將其制成藁本內酯對照品貯備溶液，濃度為6.84mg/mL-1。對適量的阿魏酸對照品進行精密稱取，應用乙腈將其定容到25mL且存放在棕色量瓶內，后將其制成阿魏酸對照品貯備溶液，濃度為0.281mg/mL-1。將5mL藁本內酯貯備溶液、10mL阿魏酸貯備溶液進行精密吸取，應用乙腈將其定容到25mL且存放在棕色量瓶內，后將其制成含有1.368mg/mL-1的藁本內酯、含阿魏酸0.112mg/mL-1的混合溶液[6]。

1.2.3 當歸提取物制備方式 將藁本內酯提取率、阿魏酸提取率作為評價指標，對乙醇滲濾法、乙醇浸漬法、水提法、乙醇熱回流法、堿水提法的優劣進行評估。（1）乙醇滲濾法：將1倍量的70%乙醇與25g當歸粗粉混合后將其悶潤2h,后將其放置到小滲濾桶內應用1mL/min-1的速度進行滲濾，采取20倍量的滲濾液，將乙醇減壓回收，應用70%的乙醇將其定容到100mL,即為乙醇滲濾法所得到的溶液[7]。（2）乙醇浸漬法：將70%的乙醇與12.5g當歸粗粉混合放置室溫下進行浸漬4d，后將混合液進行提取、過濾，且將乙醇減壓回收,應用70%的乙醇將其定容到100mL,即為乙醇浸漬法所得到的溶液。（3）水提法：在12.5g當歸粗粉中加入水進行提取(10BV×2)，首次提取2h、2次提取1h,將混合液進行提取、過濾、濃縮，應用水將其定容到100mL,即為水提法所得到的溶液。（4）乙醇熱回流法：將70%乙醇提取(10BV×2h×2)液與12.5g的當歸進行混合，將溶液進行提取、過濾，且將乙醇進行回收,應用70%的乙醇將其定容到100mL,即為乙醇熱回流法所得到的溶液。（5）堿水提法：將0.1%碳酸鈉提取液(10BV×2)與12.5g當歸粗粉混合,首次提取2h、2次提取1h，將混合液進行提取，后將其的pH值用鹽酸中和到中性，應用水將其定容到100mL,即為堿水提法所得到的溶液。

1.3 觀察指標

比較5種方法的藁本內酯提取率、阿魏酸提取率以及綜合評分。

1.4 統計學方法

數據應用SPSS18.0進行分析，其中計數進行χ2（%）檢驗，計量進行t檢測（±s）檢驗，P＜0.05提示有顯著差異。

2.結果

2.1 當歸詳細信息見表1。

表1 當歸詳細情況

2.2 5種方法的藁本內酯提取率、阿魏酸提取率以及綜合評分對比

乙醇滲濾法、乙醇浸漬法、乙醇熱回流法的藁本內酯提取率、阿魏酸提取率以及綜合評分均高于水提法、堿水提法（P＜0.05）。而藁本內酯的提取率中乙醇滲濾法＞乙醇浸漬法＞乙醇熱回流法（P＜0.05），而阿魏酸提取率中各方法無明顯差別（P＞0.05），這就說明，乙醇滲濾法是制備當歸提取物的最佳方法，且質量最佳。

表2 5種方法的藁本內酯提取率、阿魏酸提取率以及綜合評分對比

3.討論

當歸是傘形科植物A.sinensis的根，它的作用是潤腸通便、止痛、活血、調經、補血，在治療風濕痹痛、虛寒腹痛、經閉痛經、眩暈心悸、腸燥便秘、月經不調、血虛萎黃方面也發揮著非常重要的作用。

當歸提取物是我國植物提取物大量出口的商品，但是在出口前需要對提取物內的藁本內酯、阿魏酸含量進行測定，該方法比本次研究過程中所用的方法更為復雜。藁本內酯屬于苯酞類，該物質不易溶于水，但會非常容易溶于有機溶劑，且純度較高的藁本內酯穩定性較差，在熱、光等的作用下容易結構發生變化，生成苯酞類其他成分。阿魏酸屬于有機酸類，它非常容易溶于堿水、熱水中，性質非常不穩定，加熱時間較久會使其發生降解[8]。制備供試品溶液的過程中，常應用弱酸性溶劑，這樣的目的是為了阻止阿魏酸降解，以保證最終結果的穩定。通過以上研究可以發現，浸漬時間對提取的藥物成分并沒有太大的影響，但是在《中國藥典》曾有明文規定，當歸的滲濾時間不宜超過48h,因此，在制備當歸提取物的過程中，要適當的減少滲濾時間，確保藥物成分的安全性、質量。

研究顯示，乙醇滲濾法、乙醇浸漬法、乙醇熱回流法的藁本內酯提取率、阿魏酸提取率以及綜合評分均高于水提法、堿水提法（P＜0.05）。而藁本內酯的提取率中乙醇滲濾法＞乙醇浸漬法＞乙醇熱回流法（P＜0.05），而阿魏酸提取率中各方法無明顯差別（P＞0.05），這就說明，乙醇滲濾法是制備當歸提取物的最佳方法，且質量最佳。因此，在進行當歸提取物制備過程中，要選擇合適的制備方式，這樣才能有效保證最終的制備質量。

當歸中的有效成分揮發性較強，主要是丁烯基苯酞、藁本內酯等苯酞類化合物，而在進行指標測定時，以上成分具有揮發性強、穩定性差的特點，這就會導致：（1）提取物的藥物濃度無法維持恒定。（2）阿魏酸在溶液中的穩定性極差，且在中性溶劑下見光時分解速度會更快。（3）由于阿魏酸在水中的溶解度較小，穩定性較差，在高溫環境下會對其造成嚴重的破壞。因此在選擇指標成分時要注意以下幾點：①制備當歸提取物的過程中，要將這些成分棄去。②維持當歸提取物溶液的適當濃度，確保阿魏酸不被破壞。

中藥藥材成分制備、提取的過程中，有很多制備工藝出現，但是當前大部分中藥藥材制備方式沿用常規的提取方式。雖然涌現出了很多新的現代化的制備方式，且超臨界二氧化碳制備提取技術展現出了很大的優越性，但還需要進一步對其安全性與實用性進行研究。

綜上所述，不同制備方法對當歸提取物的質量影響研究過程中，發現乙醇滲濾法的提取率較高，綜合評分較高，進而可以保證當歸提取物的質量，且可以將其作為制備當歸提取物的最佳手段。