子宮內膜癌中ER、PR、VEGF、Survivin蛋白的表達情況及與臨床病理特征的相關性

徐 珂 張明哲 張振東 楊 炳

(遵義醫學院附屬醫院婦科，貴州 遵義 563003)

研究表明，部分特定的生物分子標志物與子宮內膜癌(EC)的發生發展及預后關系密切〔1〕。近年來的生物學報道顯示，細胞凋亡抑制基因是EC內在調控因子〔2〕。凋亡抑制基因(Survivin)蛋白作為抑制蛋白家族的新成員，具有較強的腫瘤特異性〔3〕。另外，雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、血管內皮生長因子(VEGF)與腫瘤的發生和轉移關系密切〔4〕。VEGF是一種特異性高，功能性強的促血管生長因子，具有促進實體瘤血管形成的作用〔5，6〕。本文擬探討Survivin、ER、PR、VEGF蛋白表達與EC臨床病理特征的相關性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇2017年2～12月遵義醫學院附屬醫院婦科接診的33例EC患者為觀察組Ⅰ，均經手術病理確診，排除首次治療為非手術治療和在其他醫院進行過第一次手術治療的患者。上述患者均未接受放療、化療與激素治療，患者之前所接受的手術方式為全子宮切除術。年齡46～72〔平均(59.0±5.3)〕歲；病理分期采用2009年國際婦產科聯盟(FIGO)標準：Ⅰ期25例，Ⅱ期6例，Ⅲ期2例。細胞分化程度：G1級20例，G2級8例，G3級5例。浸潤程度：未浸潤6例，淺肌層浸潤16例，深肌層浸潤11例。淋巴轉移轉移5例，未轉移28例。取觀察組Ⅰ患者癌旁組織25例為觀察組Ⅱ。取同期行子宮全切術的26例子宮肌瘤患者為對照組，年齡44～78〔平均(61.0±5.1)〕歲。上述患者均自愿簽署知情同意書。三組一般資料比較無顯著差異(P>0.05)。

1.2ER、PR、VEGF與Survivin檢測 入選患者行全子宮切除術的過程中，獲取子宮組織標本，10%甲醛溶液固定標本，石蠟包埋，制作3張切片，每張切片厚度大約為4 μm，而后進行常規二甲苯脫蠟，采用梯度酒精脫水，3%過氧化氫進行內源性過氧化物酶封閉，標本常規脫蠟后進行微波修復抗原，非特異性抗原操作于10%正常山羊血清封閉組織中進行，加入兔抗人ER、PR 抗體(Novocastra公司) ，于4℃冰箱孵育24 h，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替第一抗體作為陰性對照，次日滴加生物素標記的羊抗兔二抗(ER、PR二抗為北京中杉金橋生物技術有限公司，Survivin和VEGF二抗試劑盒購自福建邁新生物技術公司)，免疫組化(SP)法染色，二氨基聯苯胺(DAB)顯色，蘇木素復染，中性樹脂封片，鏡檢。以已知EC陽性切片作陽性對照。

1.3結果判定標準 ER、PR、VEGF與Survivin以細胞核或細胞質中出現棕黃色顆粒為陽性。結果判定采用半定量積分法：①依據每張切片中細胞的染色強度評分：0分無顯色，1分淺黃色，2分棕黃色，3分棕褐色；② 依據組織切片中的陽性染色細胞數量占全部腫瘤細胞數量百分比評分：≤5%為0分，>5%且≤25%為1分，>25%且≤50%為2分，>50%且≤75%為3分，>75%為4分；③ 前兩項指標評分相乘：兩者乘積為0分為陰性(-)；兩者乘積1～4分為弱陽性(+)；兩者乘積5～8分為中度陽性()；兩者乘積9～12分為強陽性()。

1.4統計學分析 采用SPSS19.0軟件進行χ2及t檢驗。

2 結 果

2.1各組Survivin、VEGF、ER、PR蛋白表達 觀察組Ⅰ與觀察組Ⅱ Survivin、VEGF、ER、PR蛋白陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)；對照組Survivin、VEGF、ER、PR蛋白陽性率明顯低于觀察組Ⅰ、觀察組Ⅱ，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

2.2ER、PR、VEGF、Survivin蛋白與EC臨床病理特征的相關性 ER、PR、VEGF、Survivin蛋白陽性表達與EC臨床分期、組織分化程度、浸潤程度、淋巴結轉移存在明顯相關性，見表2。

表1 各組Survivin蛋白水平表達情況(n)

與對照組比較：1)P<0.05

表2 VEGF、Survivin、ER、PR蛋白陽性率與EC臨床病理特征的相關性(%)

3 討 論

圍絕經期和絕經后女性的EC發病比例較高〔7〕。在我國，每年將近20萬的新發EC病例，致死率僅次于宮頸癌和卵巢癌。目前，EC的病因尚不明確，可能與患者的生活方式有關〔8〕。Surivivin表達于腫瘤和胚胎組織中，且與腫瘤的分化增殖、浸潤程度、轉移存在密切關聯〔9～11〕。本研究表明Survivin蛋白在EC組織中呈過表達，且能夠推測出Survivin的異常表達可能發生于EC的早期階段。EC早期階段通過抑制細胞凋亡，而一些存在缺陷的基因細胞會繼續不停的生長，從而促進基因突變的聚集，進而使細胞發生惡性轉化，誘導EC的發生。Survivin的高表達為腫瘤細胞的生長、浸潤、轉移提供了優勢。VEGF可直接作用于血管內皮細胞，并與血管內皮細胞上的受體結合，經信號轉導達到促進內皮細胞分化和血管生成的作用。研究指出，VEGF對內皮細胞有較強的促增殖、促分裂、促轉移作用，同時還能增強小血管的通透性；另外，VEGF還能抑制內皮細胞基因的活化，從而誘導其產生蛋白水解酶，誘導內皮細胞移動、促進腫瘤血管生成、淋巴管生成，誘導腫瘤形成〔1,12,13〕。本文提示VEGF與EC的侵襲和轉移存在關聯，也是導致EC預后不良的重要因素，因此，針對VEGF的特異性治療也是抑制EC轉移和復發的重要方法。EC屬ER依賴型，ER與EC的發生、發展及其預后關系密切〔14〕。本研究顯示隨EC進展，子宮內膜正常細胞的功能受到影響，導致ER的表達呈低水平，多數情況下為弱陽性表達。組織學病理分級主要反映腫瘤生物學的行為特征，ER的表達與臨床病理相關性分析結果提示，臨床分期越晚、細胞分化程度越低、浸潤程度越深，癌組織中的ER陽性表達率就越低〔15〕。因此，EC中ER表達降低預示腫瘤惡性程度增加。另外，EC是激素依賴性腫瘤，其發生與ER長期刺激而無PR拮抗有關〔16〕。孕激素能通過PR發揮重要的生理作用，且與EC的發生、發展、預后有關。PR低表達通常早于EC的發生或發生在EC的早期階段，原因是孕激素無法發揮拮抗ER的作用，從而導致EC的發生，同時也提示PR在臨床治療中具有一定作用〔17〕。本文提示，PR的陽性表達與EC的惡性程度和預后存在密切關聯，PR表達越高，惡性程度越低，預后良好。