關于寄生蜂觸角的掃描電鏡樣品制備技術分析

王紀媛 高源

摘要：寄生蜂有著比較小的體形，產卵多寄生在其它昆蟲的幼蟲或卵中；針對其觸角感覺器而言，在寄生行為及尋找生境方面，發揮著關鍵性作用。掃描電鏡樣品制備技術是一種時下比較先進的制備技術，現今已在多領域中得到廣泛應用。本文以蝶蛹金小蜂為例，就寄生蜂掃描電鏡樣品制備當中的所運用的一些方法作一探討。

關鍵詞：寄生蜂；觸角；掃描電鏡

寄生蜂是一種體形比較小的蜂類，當前，已經出現許多寄生蜂觸角感覺器超微結構的報道。本文以菜蚜繭蜂、煙蚜繭蜂、野蠶黑卵蜂等寄生蜂為對象，對其觸角開展電鏡掃描，對其觸角感覺器的分布情況、種類及雌雄之間所存在的差異進行研究。因寄生蜂的觸角比較小，較難實施解剖取樣，且各類感覺器在觸角各節表面有著不同的分布，要想進行全面觀察，且對其數量進行準確統計，須在粘臺與取樣時，將暴露觸角的腹面、背面及兩側面的感覺器考慮在內；另外，在進行掃描觀察時，需從多角度尋找，從中將生于凹陷內，或者是沒有充分突出表皮的感覺器找出來。

1.資料與方法

1.1供試寄生蜂

采集菜粉蝶蛹（已被蝶蛹金小蜂寄生過），將其均裝至專門的指形玻管當中，并置于光照培養箱中進行培育；當出蜂之后，按照1：2的比例，把雌雄蜂轉入到事先準備好的大玻管當中，喂蜂蜜水（濃度為20%），并在培養箱當中任由其交配與取食；待2d后，讓其寄生在指定的菜粉蝶蛹，待出蜂之后，用電鏡對雌、雄蜂進行細致觀察。

1.2取樣與粘臺

分別取若干雄成蟲與雌成蟲，于解剖鏡直視下，用鑷子將其頭部連同其觸角一同摘掉，用導電膠以正面與側面的姿態粘在樣品臺上，用作觸角整體著生狀態的觀察，此外，還用作觀察梗節基部及柄節的刺形感覺器；于解剖鏡作用下，利用鑷子將其觸角摘掉，分別以腹面、背面及兩側面作為觀察面，將其站在掃描電鏡的專用樣品臺上，主要用作棒節表面以及索節、小環節的感覺器的觀察；在此操作中，可根據實際需要，用導電膠帶紙進行粘樣操作；針對觸角索節而言，其主要由多個亞節構成，在其表面上，有著豐富的板狀感器，除此之外，還有大量的毛形化學感器，除設置上述觀察面之外，還需根據實際情況，截斷亞節，并將之豎起；將橫斷面作為觀察視角，對亞節上各種感覺器的實際排布規律進行細致觀察；通過觀察觸角的頂端，得知其棒節實為一膨大分節的結構，而且在其端部還有一個“探索區”，分布著許多感覺器，同樣需要分別從4個面上進行觀察。需要指出的是，針對全部觀察面，均需處于無污染狀態，保持其干凈且無損傷，如果是已經存放多年的針插標本，在其表面上，通常會布滿菌，針對此情況，需要先用乙醇對其表面進行清洗，但整體效果不理想。

1.3表面鍍金

當將樣品粘臺之后，利用離子濺射儀，將樣本鍍金，因觸角被劃分成若干節，并且在各個節的連接位置處，會有比較大的縫隙形成，容易出現金屬導電層不通常或不連續的情況，當采用電鏡進行觀察時，存在比較嚴重的充電現象，對于此情況，需根據實際情況，增加鍍層的厚度。在鍍金操作時，如果選用真空噴鍍儀行此操作，會有比較差的均勻性，因而不易將其當做觸角樣品。

1.4使用放電防止液

為了能夠將觸角表面金屬鍍層所存在的不連續問題較好的解決掉，可選用一種專用于掃描電鏡的放電防止液，將觸角粘在觀察臺上后，將一滴放電防止液滴在上面，然后讓其自然變干，然后再進行鍍金。如果經細致觀察，發現觸角存在充電現象時，則取樣品，將放電防止液滴在上面，然后上機并進行細致觀察，這樣能夠避免因導電不良所造成的充電效應。

1.5選擇合適的掃描電鏡觀察條件

在掃描電鏡下，對樣品進行觀察；因大多數感覺器均呈現為毛形，有著比較明顯的尖端效應，當對電鏡進行加速時，電壓不能太高，通常情況下，以5～20kV最為合宜；有些感覺器的數量并不多，而且形狀也比較小，非常容易出現被掩蓋的情況，對此，應從各角度進行細致觀察與尋找；在測量感覺器的直徑與長度時，需使觀察物始終處于與視線平行狀態，如果存在一定角度，那么會導致數據出現偏差。

2.結果

觸角呈現為膝狀，在頭部顏面的中部著生，主要由棒節、小環節、柄節、觸角基、索節及梗節等構成，還需要指出的是，柄節與觸角基處于同一節上。針對雌蜂來講，其觸角的長度為1.52mm，形狀多為球形，著生于臼形觸角窩中，柄節的直徑為44?m，長度為435?m，而對于梗節來講，其直徑為60?m，總長度為115?m；無論是梗節還是柄節，其表米昂均呈現為典型的鱗片狀紋。而對于小環節，主要有2節，每節的長度均相同，即均為20?m，直徑也相同，即50?m。索節由若干亞節構成，針對第1亞節來講，其相比于其它節稍長，其它亞節的長度均為125?m，而直徑均為82?m。對于棒節而言，其長度為245?m，由4個亞節組成。相比于雌蜂，雄蜂的觸角要相對較短，但二者在形狀上基本相同。通過觀察觸角表面，共找出如下感覺器：板狀感器、刺形感器、厚壁化學感器及薄壁化學感器等。

針對薄壁化學感器而言，多呈毛形，特點是彎曲細長，長度為40～55?m，直徑2.3?m，其頂部比較尖，呈現比較明顯的弧形前傾狀，著生的角度一般為30°，且多在棒節與索節表面分布，而對于雌蜂而言，位于其觸角上的此感器的長度為45?m，而每亞節中約有100根索節；而針對雄蜂，位于其觸角上的此感器，其長度一般為40?m，每亞節約有80根的索節，另外，在梗節端以及小環節上，同樣分布著數量相對較少的薄壁化學感器。針對厚壁化學感器來講，其多呈刺形，有挺立前傾之勢，稍微有彎曲，端部比較鈍圓，長度為6～10?m，直徑為1.1?m，著生的角度一般為55°，在雌蜂觸角棒節第2亞節腹面以成片的方式分布，另外，在第3亞節的端部也有分布，數量為25個；而對于雄蜂，在其觸角棒節上，其分布比較固定，即第3亞節的頂端位置，數量為10個，這些厚壁化學感器共同構建成了一個“探測區”。對于板狀感器而言，呈現為光滑且厚的板狀，針對其前緣而言，有明顯向前突出的傾向，而對于其后緣，則呈弧形，長度區間為45～65?m，而寬度約為3.7?m，高度平均為5?m，其主要呈縱向分布，大多分布在棒節與索節的各個亞節表面，各感器之間的距離為11?m；針對雌蜂，在其索節上，各亞節均有20個，呈有規律排列（2～3輪）；而對于雄蜂，在其索節上，各亞節共有12～14個，同樣呈均勻排列（1～2輪）。

3.結論

對于蝶蛹金小蜂兩性之間的觸角感覺器來講，其無論是在數量上，還是在具體分布上，均有明顯不同。相比于雄，雌蜂的觸角索節無論是直徑還是長度，均偏大，因此，針對雌蜂來講，其薄壁化學感器數要明顯多于雄蜂；而針對位于棒節或索節上的板狀感器而言，其數量要明顯多于雄蜂，且多出后者40%；另外，在棒節端部，雌蜂有著較大的“探測區”面積，其大面積分布在第3、4亞節的腹面，分布著呈片狀的短曲觸覺毛，其中還摻著許多厚壁化學感器，其中，在厚壁化學感器相應數量方面，要明顯多于雄蜂，乃是后者的1倍還多。

通過觀察蝶蛹金小蜂觸角，從中得知，在觸角上，薄壁化學感器的數量最多，在排列上也比較整齊、有規則，表面積比較大，其對外界微量化學氣體分子的靈敏度比較高。針對板狀感器而言，其同樣使一種化學感受器，具有良好的嗅覺功能，在其表面上，分布有大量的微孔，此些孔乃是化學氣體分子得以流轉的重要通道。而對于厚壁化學感器來講，其有著相對固定的分布位置，且合短曲觸覺毛交錯分布于觸角端部，在對產卵地點進行選擇時，雌蜂多借助觸角端的蛹表面，通過不斷的敲擊，來對蛹內部情況進行相應感觸，因此，對于雌蜂而言，其觸角“探索區”有著更為敏感且發達的感覺器。而對于錐形乳頭狀感器來講，其在金小蜂科中均被發現，由于其在索節亞端部著生，而且受到薄壁化學感器的保護，因此，其可能是一種比較典型的溫濕度敏感受器。而針對刺形感器而言，其主要分布在觸角基，當觸角均處于活動狀態時，能夠達到機械感觸的作用。

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