某區婦女宮頸感染人乳頭瘤病毒的基因分析

任淑珍 劉啟元 陳華杰

（1 福建平潭綜合實驗區醫院 檢驗科，福建 福州 350400；2 福建平潭綜合實驗區醫院 病理科，福建 福州 350400）

人乳頭瘤病毒是一種嗜黏膜和皮膚上皮性病毒，是導致宮頸上皮增生和宮頸癌的主要因素。至今為止，已經鑒定的HPV病毒約有100多種，約有30多種可以感染人的生殖道黏膜[1]。宮頸癌的發生與人乳頭瘤病毒感染人體有密切的關系[2]。世界衛生組織的調查結果顯示99.9%的宮頸癌患者可以檢測到HPV感染；國際癌癥研究協會（IARC）1995年宣布；HPV感染是宮頸癌的主要原因。在目前發現的約30多種可感染人生殖道黏膜的HPV中，一部分很容易導致宮頸癌的發生，稱為高危型HPV；WHO及IRAC確認的14種高危型包括HPV16、18、31、35、39、45、51、52、56、58、59、66及68[3]。從HPV感染到發展成為宮頸癌發展成為宮頸癌一般需要經歷數年到10年左右時間，提早檢測高危型HPV進而積極治療將有助于清除女性生殖道的持續感染，防止其向宮頸癌演變。早發現、早治療，從而降低宮頸癌的發生率和病死率。本文分析平潭綜合實驗區婦女宮頸感染人乳頭瘤病毒狀況，發現總感染率為8.6%，低于中國婦女以人群基礎的HPV感染狀況的流行病學調查結果顯示HPV的總感染為16.1%[4]。HPV16型導致了全世界一半以上的宮頸癌[5]。而本地區的16型感染率為1.52%，且感染人群在30～39歲和40～49歲婦女，分別占總感染率的43.36%、34.97%。

1 資料與方法

1.1 一般資料：統計我院2015年7月開始開展HPV檢測以來至2017年2月檢測HPV總例數1646例。最小年齡20歲，最大年齡71歲，平均年齡46歲。

1.2 儀器與試劑：CobasZ480熒光PCR儀。上海透景生命科技股份有限公司提供的人乳頭瘤病毒核酸檢測與16/18型試劑盒，采用2+12型，即可具體分型16、18型和其他混合型12種（31、33、35、39、41、51、52、56、58、59、66、68）。北京華運安特科技有限責任公司提供的ZJY-全自動雜交儀、雜交液。嚴格按照試劑說明要求操作以及按《基因擴增實驗室管理辦法》執行操作。

1.3 方法：以統一標準取女性非經期宮頸脫落細胞，在采樣前不對陰道進行沖洗，采用杭州醫國仁生物科技有限公司提供的專用宮頸刷采集標本，將宮頸刷置入宮頸，約2 cm位置，于宮頸外口鱗狀上皮、柱狀上皮交界處，沿宮頸外口旋轉3～4圈，然后取出，置入上海透景生命科技股份有限公司提供的配套細胞保存液中，嚴格按照保存液要求將標本保存于4 ℃冰箱中。檢測時，取出宮頸刷，充分漂洗，使用洗脫液做離心處理，保留管底細胞，加入裂解液，以說明書指示為依據，提取DNA，以CobasZ480熒光PCR儀擴增檢測。每周集中檢測1次標本。

1.4 結果分析與判定：取出雜交儀、雜交液，并做預熱處理，以標記探針處理低密度基因芯片，并將其放置于雜交平臺上；對擴增產物加熱、冰浴，然后置于檢測孔，實施導流雜交；以封阻液行封閉處理，倒出封阻液，置入酶標液，行孵育處理，處理時間為3 min。以沖洗緩沖液對沖洗膜進行沖洗，以NBT/BCIP底物做顯色處理，時間為5 min。根據顯色情況分析結果。以肉眼觀察情況做出判定，呈現藍紫色圓點則判定為陽性，視為感染，若有多個陽性點，則判定為混合感染。

1.5 統計學方法：運用SPSS16.0統計學軟件對各年齡組婦女感染HPV感染率進行數據統計分析，P≤0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 感染情況分析：統計2015年7月13日HPV開展以來至2017年2月27日我院門診及住院女性宮頸脫落細胞HPV檢測，共檢測1646例。HPV總感染例數143例，總感染率為8.69%。低于全國感染水平，混合型感染例數103例，感染率為6.26%。16型感染例數25例，感染率為1.52%，18型感染率為15例，感染率為0.91%。其中16型、18型、混合型同時陽性2例，18型、混合型同時陽性1例，即多重混合感染共5例。

2.2 年齡分布情況：見表1。

表1 不同年齡組HPV感染分布情況

2.3 各年齡組占總感染率比較：運用SPSS16.0統計學軟件對各年齡段進行分組比較，顯示30～39歲、40～49歲感染率高，分別占37.77%、40.56%，P＞0.05無統計意義。20～29歲、30～39歲占總感染率的11.19%、37.77%，P＜0.05有統計意義。得出結論，平潭綜合實驗區HPV感染主要在30～39歲、40～49歲年齡段性活躍期，和性接觸傳染直接相關。

3 討 論

HPV持續感染是引起宮頸癌的必要不充分條件，其中HPV16和HPV18型感染是導致宮頸癌最主要的因素[5]。引發HPV的原因極為復雜，每個地區HPV感染率、各不相同，基因型分布也存在一定差異。我國大規模多中心的流行病學研究顯示，宮頸鱗癌中最常見的HPV型分別為HPV16和18型，分別占76.7%和7.8%，隨后依次HPV52（占2.2%），HPV58（占2.2%）和HPV（占2.1%），將HPV風險分層管理有助于提高宮頸癌的篩選效率。由于HPV16和HPV18的高致癌風險，對HPV16、18型陽性人群的篩選和臨床轉診十分必要。而致癌風險次之的其他幾種高危型別，對其檢測結果為陽性的患者通常的處理辦法為定期復查，筆者認為沒有必要對12種型別進行分型檢測，因而對本地區采用透景2+12高危HPV檢測，經濟，實用。

目前，針對HPV感染者，多予以宮頸癌預防疫苗控制，以降低其轉化為宮頸癌的風險。因此盡早診斷、預防，并指導臨床采取針對性預防措施十分必要。熒光PCR檢測特異性較好。在研究中筆者對我院門診、住院女性應用熒光PCR檢測予以HPV檢測，分析平潭綜合實驗區婦女的HPV感染情況，考慮到HPV16、18型是最有致癌風險的基因型，本次研究以HPV16、18型研究為主，在此基礎上將感染嚴重的混合型納入研究，分析感染率以及年齡分布情況，以期為臨床防治提供科學指導。至于HPV感染以及分型和宮頸病變和宮頸癌的關系，還有待后續研究。

經本次數據分析顯示，本地區HPV總感染率為8.69%，而我國感染率為16.1%，提示平潭綜合實驗區婦女HPV感染率低于平均水平，發生風險低。另外研究發現該地區30～49歲年齡段的感染率最高，明顯高于其他年齡段，提示這一年齡段女性為該地區HPV感染的高危人群。關于HPV感染人群，國內外研究指出各地區的年齡流行特征各不相同，綜合來看各種基因型HPV感染年齡分布特征呈現出“單峰曲線”、“雙峰曲線”兩種形式，眾多研究者指出25歲以下、55歲以上為HPV感染的高危年齡。但本次研究結果顯示平潭綜合實驗區婦女HPV感染年齡分布特征有其自身特點，發現其感染者集中于30～49歲，對于其原因，仍需要進一步分析，知道該地區應針對性控制HPV感染。整體來看，平潭綜合實驗區HPV感染情況并不十分嚴重，可能與近年來的防控措施有關，但是仍不可掉以輕心，需加強防控，最大限度降低HPV感染率及其向宮頸癌轉化的風險。研究顯示30～49歲為該地區HPV感染的多發年齡，因此在防治過程中要重點關注這一年齡段女性。

HPV診斷能有效、準確鑒別宮頸癌前病變，因此控制HPV感染的關鍵在于加大篩查力度、定期檢測，一般認為篩查年齡應該從21歲開始，21歲以下HPV感染發生率很低，而55歲女性進入絕經期，也增加了宮頸癌變的發生風險，因此篩查范圍必須囊括老年女性。本次研究顯示30～49歲婦女為該地區HPV感染的多發年齡，因此應重點對這一年齡段女性進行篩查，推廣、普及這一年齡段女性的HPV篩查。對于發生HPV感染的患者，盡早予以宮頸癌疫苗控制，以降低宮頸癌的發生率。這樣能夠提升HPV感染的防治效果，保證女性的身心健康。

綜上所述，平潭綜合實驗區婦女HPV感染率相對低于我國平均水平，感染年齡集中在30～49歲，應作為控制重點人群。