黑木耳耐高pH值菌株的篩選

張軍

(慈溪市庵東鎮農業農村辦公室，浙江 寧波 315327)

黑木耳(Auriculariaauricula)是一種自然生長或人工栽培在各種朽木上的真菌，有極高的營養價值[1]，是傳統的出口商品[2]。黑木耳不僅可以防治冠心病等心血管疾病，還可以防癌。黑木耳還有豐富的植物膠質和纖維素，具有減肥、治便秘和清胃滌腸等功效；黑木耳還含有發酵素、植物堿和多種礦物質，能促進消化系統及泌尿系統各腺體的分泌，有協助催化結石的作用。還因含高達185 mg·100 g-1的Fe而成為天然的補血食品[1]。黑木耳是一種在偏酸性環境下生長的食用菌，最適的pH在5.0～6.5[3]，從而造成許多酸適應性雜菌對其生產過程產生或輕或重的影響，最終影響其產量和質量。因此，研究耐高pH的黑木耳菌株是減輕或避免雜菌污染的最有效方法之一。本文就從8個菌株在不同pH環境下進行培養，最后篩選出長勢旺、抗雜菌能力強、菌絲健壯的耐高pH菌株。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源

供試菌株有單片2號(單片、段木分離)、RF82(耳木分離)、139(段木分離)、RF145(耳木分離)、RF176(耳片組織分離)、916、8808(袋料)和K3(袋料、段木分離)，依次編號為A1～A8，其中A1、A3、A6、A7及A8由華中農業大學菌種場提供，A2、A4和A5由陜西省寧強縣真菌研究所提供。

1.1.2 麩皮培養基

每1 000 mL培養基由麩皮150 g、瓊脂20 g、葡萄糖20 g、VB11片、Vc2片配制而成，還有濃度2 mol·L-1的NaOH和HCl溶液以調節溶液的pH值。

1.2 方法

1.2.1 菌株的初步篩選

先將8個菌株的菌種活化，按1.1.2中的材料(不用NaOH和HCl)配制自然狀態的麩皮培養基，在121.3 ℃下高溫高壓滅菌25 min，倒入平板，分別將8個菌株接入直徑約0.5 cm的菌塊，每處理設4個重復，置于25 ℃下恒溫箱中培養，每天定時觀察菌株的生長狀況并作記錄。

1.2.2 不同pH值的培養基上耐高pH值菌株的篩選

按1.1.2中的材料配制麩皮培養基，在121.3 ℃下高溫高壓滅菌，在超凈工作臺上用2 mol·L-1的NaOH和HCl溶液調節培養基的pH值梯度為4、5、6(CK)、7、8、9、10、11和12等9個值，然后將培養基倒入平板，接入1.2.1方法中所篩選的幾個菌株，每處理重復4個，于25 ℃恒溫箱中培養，每天定時觀察記錄各菌株的生長情況。

1.2.3 Vc對菌株耐堿性的影響

在進行耐高pH值的菌株篩選的同時，挑選其中1個菌株作Vc對其耐堿性的影響試驗。本試驗選擇的是A2(RF82)號菌株。配制培養基的方法如1.1.2(不加Vc)，設培養基pH值梯度為6(CK)、7、8、9和10，接種，每處理重復4個，25 ℃恒溫箱中培養，每天定時對比觀察并記錄菌株生長情況。

2 結果與分析

2.1 自然pH值環境下菌株初步篩選

各菌株在自然培養基上接種1 d后均可萌發，但生長速度有較大差別。由表1可知，A1、A2、A4和A7菌絲生長得很快，菌落直徑也很大；但A1的菌絲相對較薄，A2、A4和A7則很濃厚，長勢很旺，菌絲健壯、潔白，且A7表現出很強的抗菌能力；A3、A5長勢均一般，但A5的菌落邊緣比A3整齊，速度也稍快；A8雖然長速不是很快，但菌絲很濃密、也很健壯。根據各菌株的綜合生長情況，結合其不同來源，篩選出A1、A2、A5和A7等4個菌株作為耐高pH值篩選試驗菌株。

表1 黑木耳菌株在自然pH值的麩皮培養基上生長狀態

2.2 耐高pH菌株的篩選

不同pH值環境下菌絲的生長速度、萌發時間和長滿培養皿的時間都可以用來衡量該菌株對該生長環境的適應程度。各菌株在不同pH值環境下的生長情況和對高pH值環境的適應情況如圖1所示。

圖1 不同pH值對黑木耳菌絲生長的影響

試驗結果表明，各菌株在pH值為4時還能萌發生長，在pH為11時各菌株幾乎不能萌發，而A7不僅可以萌發，還稍擴散生長。其中A1在pH為6和8時速度最快，也較均勻；但在高pH值環境下，如pH值為9和10時生長雖較快(日平均生長速度分別為48.988和30.798 mm)，但菌絲很薄，不健壯，抗雜菌能力不強。A2在各pH值環境下生長情況均較A1好，其生長最快是在pH值為8的環境中，日平均生長速度達65.366 mm，比在自然pH值(pH值6)和pH值 7下的速度快2 mm左右；在高pH值環境(pH值9和pH值 10)下，A2的菌絲長勢較旺(日平均長速分別為55.851和36.304 mm)，且菌絲濃厚、潔白，表現出較強的抗雜菌能力。A5在自然pH值環境下菌絲生長最快，此后隨pH值的升高而降低，在pH 9和pH 10下生長較快(日均長速分別是48.742和31.850 mm)，但不均勻，有些菌絲成塊狀，且菌落邊緣不整齊。A7的總體長速和均勻度較前三者好，其最適pH也是7，但在高pH值環境下生長速度較前三者均快(pH值 9和pH值10日均生長速度分別為58.042和41.387 mm)，且菌絲均勻一致、健壯、潔白、抗菌力強；在pH值11時菌絲還能萌發和稍微生長，郭硯翠等[4]的試驗結果表明有較明顯的差異，但在該試驗中與其他三者差異顯著，最終選出A7號(8808)菌株為目標菌株。

2.3 Vc對黑木耳菌株耐堿性的影響

Vc在黑木耳菌絲培養過程中為菌絲的生長提供了豐富的營養，有效地促進了菌絲生長，對其生長速度和菌絲形態產生重要且明顯的影響。由表2可知，添加Vc的對照組無論是生長速度、長勢，還是菌絲的濃密程度均比試驗組強。由圖2可知，在偏中性pH值環境下，菌絲在含Vc培養基上的總體生長狀態比試驗組好，在偏堿環境下則表現出生長速度較快，在其他方面則無明顯差別。因此認為，培養基中所含的Vc不僅對黑木耳菌絲的生長提供了一定的營養，對其耐堿性也有一定的增強作用。

表2 不同pH值下Vc對木耳菌絲生長狀況的影響

圖2 不同pH值下Vc對木耳菌絲生長速度的影響

3 討論

A7號菌株的菌絲在pH值高達10時能健壯、旺盛地生長；在pH值為11時也能微弱生長，這是其他幾個菌株所不及的，故篩選出8808號為該試驗的目標菌株。

在黑木耳的栽培生產過程中，有許多雜菌是酸適應性的，如木霉菌、青霉菌等[7-12]。故耐高pH值的菌株的篩選有利于抵抗這些酸性雜菌的作用，將危害降至最低水平。但由于條件限制，未能篩選更多的耐高pH值菌株用于栽培生產，這也是以后在相關研究中要著重提高和投入的地方。