自動染色機在病理冷凍切片染色中的應用研究

葉美華 方慶全 張翠霞

[摘要]目的 探討自動染色機在病理冷凍切片HE染色中的應用價值。方法 收集我院病理科2017年2月～2018年1月接收的術中冷凍切片病例100例，每例連續切片2片，固定后隨機分為兩組。甲組采用傳統手工染色方法染色，乙組采用自動染色機染色，統計分析兩組染色的優良率、時效性及資金投入方面的差異。結果 ①乙組的染色優良率（98%）高于甲組（94%），差異有統計學意義（P<0.05）。②單臺冷凍切片染色時，甲組染色時間為（301.1±2.083）s，乙組為（297.2±0.186）s，兩組差異無統計學意義（t=1.865，P>0.05）。當2臺冷凍切片同時染色時，甲組染色時間為（556.9±1.714）s，乙組為（495.1±0.148）s，兩組差異有統計學意義（t=35.92，P<0.001）。③甲組每年成本約12.4萬元；乙組每年成本約3.74萬元，乙組每年比甲組節省成本8.66萬元。結論 自動染色機用于病理術中快速冷凍切片的HE染色效果好、效率高、成本低，值得推薦。

[關鍵詞]自動染色機；冷凍切片；染色；成本

[中圖分類號] R361.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）11（c）-0071-03

[Abstract] Objective To investigate the application value of automatic staining machine in HE staining of pathological frozen sections. Methods 100 cases of intraoperative frozen sections who were admitted from February 2017 to January 2018 in the Department of Pathology in the First Affiliated Hospital of Xiamen University were collected， 2 continuous sections in each case. After fixation， they were randomly divided into two groups. Group A was given traditional manual staining methods. Group B was given staining by automatic staining machine. Statistical analysis was performed on the differences of the excellent rate， timeliness and capital investment of the two groups of staining. Results ①The excellent rate of staining in group B （98%） was higher than that in group A （94%）， and the difference was statistically significant （χ2=4.17， P<0.05）. ②When staining a single frozen section， the staining time in group A was （301.1±2.083） s， and that in group B was （297.2±0.186） s. There was no statistically significant difference between the two groups （t=1.865， P>0.05）. When two frozen sections were simultaneously stained， the staining time in group A was （556.9±1.714） s， and that in group B was （495.1±0.148） s. The difference between the two groups was statistically significant （t=35.92， P<0.001）. ③The annual cost in group A was about 124 000 yuan； the annual cost in group B was about 37 400 yuan. group B saved 86 600 yuan per year compared to group A. Conclusion The automatic staining machine applied to pathological intraoperative rapid frozen section has a favorable HE staining effect， high efficiency and low cost， which is worthy of recommendation.

[Key words] Automatic staining machine； Frozen sections； Staining； Cost

快速將組織冷凍成一定硬度，切出薄片的過程，稱冷凍切片[1]。隨著醫學技術的不斷發展，冷凍切片在組織病理學技術中有著較廣的應用范圍[2-3]，對臨床手術的快速病理診斷具有重大意義。病理工作人員可對外科手術醫師送檢的可疑病變組織進行快速冷凍切片染色，進而做出初步診斷。這對外科手術醫師明確病變性質、制定下一步的手術方案有重要的指導作用[4]。 近幾年隨著外科手術量的不斷增加，病理冷凍切片病例數也不斷增加。為緩解病理工作人員的工作壓力，提高工作效率與染色質量，我科引進了達科為（DP260）自動染色機，承擔了冷凍切片的染色任務。現將自動染色機染色與傳統手工染色方法在染色優良率、染色時效性、資金投入方面的比較進行探討，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

收集廈門大學附屬第一醫院病理科2017年2月～2018年1月接收的術中冷凍切片病例100例，每例連續切片2片，切片厚5～6 μm，固定后隨機分為兩組。甲組采用傳統手工染色方法染色，乙組采用自動染色機染色。每組各取50例進行單臺（單例）染色，50例進行2臺同時染色。

1.2方法

1.2.1儀器設備 達科為自動染色機（配有17個試劑缸，4個水洗缸，1個烤片箱，1個加載站點，3個卸載站點，疏水性玻片架等）、LEICA CM1950 恒溫箱冷凍切片機（德國萊卡）、普通膠水、立式染缸數個。

1.2.2試劑 AAF液（乙酸A∶95%乙醇A∶甲醛F=5∶85∶10）[5]，Harris蘇木精，鹽酸乙醇，碳酸鋰飽和溶液，氨水，伊紅，80%乙醇，95%乙醇，100%乙醇。

1.2.3傳統手工染色方法流程 ①切片固定后稍水洗5 s；②蘇木精染色液染色120 s；③流水沖洗10 s；③1%鹽酸乙醇1 s；⑤水洗5 s；⑥返藍（用溫水或者1%氨水等）5 s；⑦流水沖洗30 s；⑦0.5%伊紅染色30 s；⑨流水稍洗10 s；⑩80%乙醇10 s；？輥？輯？訛95%乙醇10 s；？輥？輰？訛100%乙醇10 s；？輥？輱？訛100%乙醇10 s[6]。

1.2.4自動染色機染色方法流程 由于自動染色機機械臂的行進路線存在特定的迂回性，不是單一的直線型，為了減短染色的時間，避免試劑間的交叉污染[7]，結合本科室的實際工作情況而設置了快速冷凍HE染色程序（表1）。

1.2.5染色效果判讀 由兩名經驗豐富的病理主管技師進行雙盲閱片，評估冷凍切片染色效果，將切片分為優良片和差片。優良片評估標準：切片組織結構完整，染色紅、藍分明，胞質、胞核結構對比清晰，透明潔凈。差片評估標準：切片組織結構不完整，染色紅藍對比差，核漿模糊不清，影響術中病理診斷。

1.2.6染色時效性 染色時間均從切完片固定后開始計時，移出100%乙醇后計時結束，用均數±標準差表示。

1.2.7資金投入 包括耗材支出、設備成本、人力成本。

1.3觀察指標

比較甲組和乙組的染色優良率、染色時效性、資金投入方面的差異。

1.4統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件對所得數據進行分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料用百分率（%）表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1兩組染色優良率的比較

乙組的染色優良率為98%（196/200）高于甲組的94%（188/200），差異有統計學意義（χ2=4.17，P<0.05）。

2.2兩組染色時效性的比較

單臺冷凍切片染色時，兩組的染色時間比較，差異無統計學意義（t=1.865，P>0.05）。當2臺冷凍切片同時染色時，乙組的染色時間短于甲組，差異有統計學意義（t=35.92，P<0.001）（表2）。

2.3兩組資金投入方面的比較

本科室所有冷凍切片的染液均自主配制，甲、乙兩組每年耗材支出均約為4000元。甲組無儀器設備投入，但同一時段多臺冷凍切片染色時要多一個人力成本，每年成本約12萬元，加上耗材支出，共計12.4萬元；乙組自動染色機成本20萬元，按6年折舊，每年成本約3.34萬元，加上耗材支出，共計3.74萬元。乙組每年比甲組節省成本8.66萬元。

3討論

1818年Pieter de Riemer 發明了冷凍切片技術，直至1905年Wilson Mecarty 將其列為病理學診斷方法之一[8]。如今，冷凍切片技術在病理診斷工作中具有舉足輕重的作用[9-11]，冷凍切片技術是術中快速病理診斷的基石，術中快速病理診斷是病理科醫師最具風險的急診工作[12]， 如何在限定的時間內既快又好地完成制片，不僅是病理醫師做出正確診斷的需要，更是術中臨床醫師的迫切要求[13]。而快速冷凍染色技術是冷凍切片技術中至關重要的環節，染色質量好壞直接關系到病理醫師診斷的準確率。傳統手工染色會因溫度高低、試劑濃度、染色時間長短、環境、不同操作者等因素而使得胞質、胞核染色深淺不一，對比不均；自動染色機可預先設好染色時間和程序，使每一批次的染色步驟和時間能保持一致，染色后組織結構完整，著色鮮艷，紅、藍分明，核質對比清晰，染色均勻，而且省時省力[14]。此外，全自動染色機在密閉空間內完成染色過程，減少了試劑的揮發，減輕對病理科工作人員的化學危害[15]。

隨著醫院手術室規模的擴大，手術臺數不斷增加，冷凍切片數也不斷增多。實際工作中，經常會遇到在同一時間段接收多份冷凍標本的狀況。大多數醫院的病理科，一般只有一個技術員承擔冷凍切片制片的任務，當同時接收多份標本時，該技術員將無法在規定時間（15 min）內完成所有的冷凍切片，這就需要另一技術員的協助，即一個技術員制片，一個技術員染色。然而即便如此，冷凍制片時間延長的情況也時有發生。使用自動染色機后，技術員使用統籌方法，在染色機進行染色期間，可進行下一個患者冷凍組織的速凍和切片，再將切完固定好的冰凍切片上機，而后再將上一個染好的冷凍切片取出，完成電吹風吹干、中性樹膠封片及核對、貼標簽等后續工作。這樣，技術員可及時處理同一時間段送來的批量標本，病理醫師就能及時、準確地發出冷凍快速病理報告。這對縮短手術等候時間，快速確定手術方案，減輕患者痛苦有著重要意義。

隨著病理實驗室質量控制管理的深入，對冷凍切片染色的質量要求也越來越高。達科為自動染色機自帶質控功能，為冷凍切片染色的質量控制提供便利和幫助[16]。但在實際運行中，由于冷凍切片制片的時限性，我科質控人員必須得先做質控，即先試染一張切片，然后顯微鏡下觀察染色質量，以確保試劑處于有效的染色狀態，不能完全依賴機器自帶的質控功能。一旦試染片染色質量不佳，質控人員就得查出具體原因，及時更換染色試劑，并做好相關記錄，確保高質量染色的正常運行，為后續工作做好充分的準備。質量控制做好了，就可以避免由染色不佳導致反復制片所造成的時間延誤。要制作一張優良的冷凍切片，有賴于病理科技術員在工作中不斷積累經驗，提升自身的業務水平。

自動染色機在實際工作中也存在不足，即當同一染色機上多批次進行染色時，由于染色缸的使用及機械臂的起落時間會發生沖突，會導致出片時間拖延。為了加快染色速度，當染色批次>4次時，應考慮再增加一臺自動染色機進行染色。機器每次使用完畢，須及時蓋上缸蓋，以有效避免試劑揮發，并定期進行保養和清潔。

綜上所述，自動染色機的染色效果相對穩定，操作方便，可承擔批量冷凍切片染色任務，有效減輕病理技術工作人員的負擔，極大節省工作中的人力成本，節約時間資源，提高工作效率。

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