腦卒中患者MTHFR基因多態性與同型半胱氨酸水平的關系研究

龐國勛，靳會欣，劉洪濤

腦血管意外又稱為腦卒中或中風，臨床表現為一過性或永久性腦功能障礙，是因腦部供血受阻而發展迅速的腦功能損傷疾病，可由多種誘發因素引起，如血栓或栓塞等，導致腦內動脈狹窄、閉塞或破裂。該病發病率、病殘率均較高，其中缺血性腦卒中占60%～70%[1]。有報道顯示，我國每年腦卒中病死率為58/10萬～142/10萬，位于城鄉居民死亡原因之首，嚴重影響了人民健康和生活質量[2]。因此，有關腦卒中的治療和評估一直是醫學研究的重點。近年相關研究認為，高同型半胱氨酸(Hcy)血癥是腦卒中的獨立危險因素，且當蛋氨酸代謝過程中所涉及的酶或因子異常時，可引發高Hcy血癥[3-4]。5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)即其中的關鍵酶，當其基因突變時，可引起MTHFR缺乏或活性降低[5]。為研究腦卒中患者Hcy水平與MTHFR基因突變的關系，本文選擇相關病例進行研究，并將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年1月—2017年12月我院神經內科收治的缺血性腦卒中患者120例作為觀察組。①納入標準：均經頭顱CT或MRI確診，符合中國急性缺血性腦卒中診治指南標準。②排除標準：其他原因引起的神經功能障礙；糖尿病、肝腎及甲狀腺功能異常、腫瘤及血液病患者；近1個月內的創傷、感染患者或應用影響Hcy水平藥物者。選擇同期健康體檢者120例作為對照組。兩組均為漢族，無血緣關系。觀察組男89例，女31例；年齡(65.70±11.29)歲。對照組男90例，女30例；年齡(64.91±10.53)歲。兩組性別和年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2儀器與試劑 全自動雜交儀、生物芯片識讀儀、全血基因組DNA提取試劑盒和MTHFR基因檢測DNA微陣列芯片法試劑盒均購自上海百傲科技有限公司，日立7600全自動生化分析儀和T100PCR儀均購自Bio-rad公司，Hcy試劑盒購自西門子公司。

1.3Hcy水平檢測 兩組均采集空腹外周靜脈血5 ml，3500 r/min離心20 min，-80℃冰箱保存。完全恢復室溫后，采用循環酶法全自動生化儀檢測Hcy水平。

1.4基因分型檢測 肘靜脈采集外周血2 ml，EDTA抗凝后，參照全血DNA提取試劑盒說明提取和純化DNA。對純化的DNA標本采用生物素標記的MTHFR基因特異性熒光引物進行PCR擴增，步驟依照MTHFR基因檢測DNA微陣列芯法試劑盒說明書。對PCR產物應用雜交儀進行雜交及顯色，采用Baio Array Doctor V2.0基因芯片圖像分析儀軟件及生物芯片識讀儀對MTHFR基因677位點的等位基因進行判讀，根據基因型不同分別定義為野生型(C/C)、雜合突變型(C/T)和純合突變型(T/T)。

2 結果

2.1相關臨床指標比較 兩組的舒張壓、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。觀察組的收縮壓和Hcy水平高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組研究對象的相關臨床指標比較

2.2基因型及等位基因頻率分布 兩組MTHFR基因C/C、C/T、T/T分布差異有統計學意義(P<0.01)。觀察組CT+TT頻率高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組研究對象的MTHFR基因型及等位基因頻率分布情況[例(%)]

2.3不同MTHFR基因型研究對象的Hcy水平比較 觀察組C/C、C/T和T/T型的Hcy水平分別為(14.65±4.39)μmol/L、(16.12±4.30)μmol/L和(26.31±10.82)μmol/L，對照組分別為(10.67±4.68)μmol/L、(10.43±3.30)μmol/L和(17.12±5.82)μmol/L。兩組T/T型的Hcy水平均高于本組C/C和C/T型(P<0.05)。觀察組T/T和C/T型的Hcy水平高于對照組(P<0.05)。

3 討論

近年多數研究指出，缺血性腦卒中發生、發展及預后均與血漿Hcy水平密切相關，Hcy水平升高也是腦血管疾病發生的危險因素，成為相關研究的重點[6-7]。血漿Hcy水平升高會損傷內皮細胞，加重平滑肌細胞增殖，引起血液系統抗凝障礙及血小板功能異常，并促進低密度脂蛋白膽固醇氧化，從而參與腦卒中疾病的發生及發展過程[8-9]。本研究結果顯示，觀察組血漿Hcy水平高于對照組，提示血漿Hcy水平是影響缺血性腦卒中的重要因素。

MTHFR作為Hcy代謝的關鍵酶，能將5,10-亞甲基四氫葉酸轉化為5-甲基四氫葉酸，通過Hcy的重新甲基化完成一碳單位轉移，使血液中保持較低水平的Hcy[10-11]。因此，MTHFR基因缺陷能使機體基礎生化過程發生紊亂，并引發心腦血管疾病[12]。現有研究發現，MTHFR基因至少有65個多態性位點，C677T是其中常見一種。C677T是指MTHFR第4個外顯子677位甲基發生C至T突變，纈氨酸將丙氨酸代替，從而使酶的熱穩定下降，并將酶活性降低[13-15]。本研究結果顯示，兩組MTHFR基因C/C、C/T和T/T型分布差異有統計學意義。提示Hcy水平在缺血性卒中發生過程中有關鍵作用，其關鍵酶MTHFR的C677T基因突變與腦卒中易感性關系密切。有文獻報道，C/T和T/T型酶活性分別下降為C/C型的32%和64%[16]。本文進一步研究數據顯示，缺血性腦卒中患者與健康人群T/T型血漿Hcy水平均顯著高于本組C/C及C/T型，說明T/T型人群的MTHFR酶活性較低，與以上報道一致。但仍有部分學者的研究發現，腦血管疾病患者Hcy水平雖然顯著升高，而與MTHFR基因多態性并無顯著關聯[17]。推測其與本文結果不一致的原因可能為影響腦血管疾病發病原因是多因素的，且入選對象的遺傳背景、飲食習慣及選擇標準不同均可能影響研究結果，另外地區性差異及樣本量選擇也可能導致分析差異。因此，如進一步探討MTHFR基因多態性與缺血性腦卒中之間的關系還需綜合考慮多種影響因素。

綜上所述，MTHFR的C677T位點基因突變可能是缺血性腦卒中的危險因素，在臨床上可對其進行檢測，以結合遺傳特征給予早期預防及治療措施，實行個體化治療。