子宮平滑肌小窩蛋白表達與產后出血發病關系

廖秋萍 顏建英 劉兆董 羅金英

目前，全世界范圍內導致孕產婦死亡的主要原因之一是產后出血（Postpartum hemorrhage，PPH）。而宮縮乏力是導致產后出血的首要原因。目前認為[1]，小窩是細胞信號分子富集和信號轉導的樞紐。其主要的結構蛋白是小窩蛋白（caveolin），調控許多關鍵信號分子的活性狀態。調控信號轉導通路活性的分子通過聚集到細胞膜表面小窩，與小窩蛋白結合并相互作用，改變信號通路活性。其中子宮平滑肌細胞的興奮性是其調控終點之一。本研究通過檢測產婦子宮平滑肌小窩蛋白表達水平，探討其與宮縮乏力性產后出血發病的關系。

1 材料與方法

1.1 資料來源與分組

選擇我院2012年10月—2015年10月行子宮下段剖宮產的產婦60例，分為研究組（宮縮乏力性產后出血組，n=30）和對照組（宮縮正常無產后出血組，n=30）。兩組產婦年齡、分娩次數、孕周、入院時BMI及入院時凝血功能指標水平差異均無統計學意義（P＞0.05）。宮縮乏力性產后出血診斷標準參照第8版《婦產科學》[2]，采用稱重法測量產后出血量。剖宮產指征為臍帶因素、社會因素。所有研究對象均獲知情同意后簽署知情同意書，并經我院倫理委員會批準。

1.2 方法

（1）標本收集：在胎兒娩出后、處理宮縮乏力之前，切取少許子宮下段切口上緣子宮平滑肌組織。取組織約1.0 g用于蛋白提取；取組織約1 mm3大小，用于石蠟切片。

（2）采用免疫熒光法觀察子宮平滑肌細胞小窩蛋白定位情況。采用TRITC標記的二抗進行試驗，采集紅色熒光圖片。用激光共聚焦顯微鏡觀察。

（3）采用蛋白印跡法測定子宮平滑肌組織中小窩蛋白蛋白表達水平。結果計算：蛋白表達相對量=目的蛋白IOD值/內參IOD值。

1.3 統計學方法

數據采用SPSS 22.0統計軟件包處理，計量資料比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般情況比較

兩組產婦年齡、孕周、分娩次數、入院時BMI及入院時凝血功能指標水平，差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表1，2。

2.2 子宮平滑肌細胞小窩蛋白定位情況

用激光共聚焦顯微鏡觀察到兩組產婦子宮平滑肌細胞的細胞膜表面和細胞質均可見紅色熒光，即表明子宮平滑肌細胞的細胞膜表面和細胞質均有小窩蛋白-1、小窩蛋白-2表達。

表1 兩組產婦一般情況比較（±s）

表1 兩組產婦一般情況比較（±s）

組別 年齡（歲） 孕周（周） 分娩次數 BMI（kg/m2）研究組 28.30±3.26 39.53±1.17 0.80±0.55 26.97±3.52對照組 27.13±3.17 39.73±0.98 0.68±0.61 25.78±2.80 t值 1.405 -0.719 -1.138 1.446 P值 0.165 0.475 0.260 0.154

表2 兩組產婦入院時凝血功能指標水平比較（±s）

表2 兩組產婦入院時凝血功能指標水平比較（±s）

組別 凝血酶原時間PT（s） 國際標準化比值INR 活化部分凝血酶時間APTT（s） 凝血酶時間TT（s） 纖維蛋白原Fg（g/L）研究組 12.31±0.59 0.93±0.06 33.80±3.20 16.17±0.76 4.26±0.69對照組 12.00±0.59 0.90±0.04 33.19±2.39 16.19±0.75 4.54±0.59 t值 2.001 1.963 0.842 -0.129 -1.682 P值 0.051 0.054 0.403 0.898 0.098

表3 小窩蛋白-1和小窩蛋白-2表達水平比較（±s）

表3 小窩蛋白-1和小窩蛋白-2表達水平比較（±s）

組別 小窩蛋白-1 小窩蛋白-2研究組 2 984.12±307.56 3 522.16±592.18對照組 2 554.66±406.49 2 780.75±592.18 t值 -4.625 -4.849 P值 0.000 0.000

2.3 兩組產婦子宮平滑肌組織小窩蛋白表達水平比較

研究組子宮平滑肌組織小窩蛋白-1和小窩蛋白-2蛋白水平均高于對照組（均P＜0.05）。見表3及圖1。

圖1 兩組產婦子宮平滑肌組織小窩蛋白-1和小窩蛋白-2蛋白檢測

3 討論

小窩是細胞質膜向內凹陷所形成的囊狀結構，其主要結構蛋白是小窩蛋白。小窩作為信號轉導的樞紐，許多細胞信號分子富集于小窩，并與小窩蛋白相互作用，導致其活性狀態改變[3]。有研究顯示，小窩是重要的信號平臺，調控許多信號通路上關鍵分子的活性，從而調節信號通路活性狀態，改變細胞和組織功能[4]。小窩蛋白可分為1、2、3型，子宮平滑肌中主要為1、2型[5-6]。研究發現在鼠子宮平滑肌細胞中小窩結構具有調控子宮平滑肌收縮活性的作用[7]。

本研究采用免疫熒光技術證實子宮平滑肌細胞中含有小窩蛋白；進一步采用蛋白印跡法進行定量測定，發現宮縮乏力性產后出血產婦子宮平滑肌小窩蛋白-1和小窩蛋白-2表達均顯著高于對照組。提示小窩蛋白-1和小窩蛋白-2表達增加可能與宮縮乏力性產后出血的發生有關。研究發現[8]：在不同妊娠階段小鼠子宮平滑肌組織小窩蛋白表達量有所不同，在分娩期間小窩蛋白表達量下降，其原因可能是小窩蛋白在調節子宮平滑肌收縮活性方面起重要作用。Lorca RA等[9]認為，小窩作為含有豐富膽固醇和鞘脂類細胞膜上微小結構，是信號蛋白分子聚集的“驛站”，具有調控細胞興奮性及細胞內信號轉導作用，從而調節子宮平滑肌細胞收縮活性；其重要機制之一是：作為調節子宮平滑肌細胞收縮的大電導鈣激活鉀通道能定位于小窩，并與小窩上的小窩蛋白-1和小窩蛋白-2結合并相互作用，調節子宮平滑肌細胞鉀離子電流，導致細胞膜電位改變，起到調節子宮平滑肌收縮的作用。近期有研究者總結出[10]，小窩作為子宮平滑肌收縮活動性信號通路轉導樞紐，參與了肥胖孕婦因脂肪因子介導發生的早產與過期妊娠；并指出小窩可能是預防和治療肥胖孕婦早產、延期與難產的靶點之一。此外，最近研究表明，小窩蛋白可能是通過與雌激素受體相結合起到信號轉導的樞紐作用[11-12]。

本研究從定性到定量研究揭示小窩蛋白可能參與宮縮乏力性產后出血的發病，但具體作用機制尚不明確。未來尚需進一步深入研究其具體發病機制，從而為臨床防治該病拓展新思路。