Cervi-M宮頸癌甲基化基因檢測(cè)其診斷應(yīng)用價(jià)值分析

王靜 龔培堯 梁慧 劉杰

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，嚴(yán)重危害女性心身健康，甚至是生命，是全世界婦女死于癌癥的主要原因之一[1]。但卻是唯一可以早期發(fā)現(xiàn)及預(yù)防的癌癥。隨著近些年疾病檢測(cè)篩查技術(shù)的發(fā)展，據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[2]，基因甲基化與癌癥具有很大關(guān)聯(lián)性。PAX1是一種腫瘤抑制基因，當(dāng)PAX1發(fā)生甲基化可以引發(fā)細(xì)胞癌化[3-4]。有部分研究已取得了效果[5]；大量臨床試驗(yàn)證實(shí)，許多腫瘤相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)域出現(xiàn)的甲基化異常改變，在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中有重要作用，并且與宮頸癌發(fā)生密切相關(guān)[6]。甲基化是一種基因外修飾，DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)序列不發(fā)生改變；但是甲基化的修飾在細(xì)胞發(fā)育，基因表達(dá)模式及基因組穩(wěn)定性中起著至關(guān)重要的作用[7]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集本院婦科高危型HPV感染患者的宮頸脫落細(xì)胞及組織病理標(biāo)本94例，進(jìn)行Cervi-M宮頸癌甲基化基因檢測(cè)，收集患者相關(guān)資料，進(jìn)行回顧性分析；依據(jù)不同的病理分級(jí)結(jié)果情況，分為正常宮頸20例，低級(jí)別病變（宮頸上皮內(nèi)瘤變，CINⅠ）23例，高級(jí)別病變（CINⅡ～Ⅲ）27例，宮頸癌（浸潤(rùn)性宮頸癌）24例。四組患者年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

宮頸標(biāo)本采集與保存：患者取截石位，常規(guī)消毒鋪巾，取少量宮頸病變部位的細(xì)胞進(jìn)行病理TCT檢測(cè)，對(duì)CINIII級(jí)進(jìn)一步病理活檢，并行HPV檢查、PAX1基因，4℃保存待用[8]；HPV檢查：采用專用的毛刷刷取篩查者宮頸內(nèi)的脫落細(xì)胞，將脫落細(xì)胞置于專用的固定液內(nèi)，進(jìn)行基因雜交獲取二代產(chǎn)物進(jìn)行HPV-DNA檢測(cè)；陽性標(biāo)準(zhǔn)：HPV-DNA＞1.0 pg/L[9]；PAX1基因的甲基化檢測(cè)：收集宮頸脫落細(xì)胞、宮頸DNA萃取、重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化、熒光定量PCR，參照生產(chǎn)公司的試劑盒說明書，分別萃取DNA與亞硫酸氫鹽DNA后處理，然后進(jìn)行PAX1基因轉(zhuǎn)錄，采用羅氏LightCycler480系統(tǒng)中的Taq Man探針系統(tǒng)對(duì)PAX1基因5'端和3'端分別用6-FAM和猝滅染料進(jìn)行標(biāo)記，對(duì)甲基化實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)，可測(cè)得甲基化PAX1基因[10]。

1.3 療效判定/觀察指標(biāo)

分別記錄高危型HPV檢出陽性率、PAX1基因的甲基化檢測(cè)陽性率及與病理檢出結(jié)果的差異性，上述各組檢測(cè)結(jié)果最終以病理學(xué)檢查結(jié)果作為參照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（x-±s）表示，采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

所有高危型HPV患者依據(jù)不同的病理分級(jí)結(jié)果情況，分為正常宮頸20例，低級(jí)別病變（宮頸上皮內(nèi)瘤變，CINⅠ）23例，高級(jí)別病變（CINⅡ～Ⅲ）27例，宮頸癌[浸潤(rùn)性宮頸癌（浸潤(rùn)性宮頸癌）]24例；病理檢出結(jié)果為正常宮頸組織HPV陽性檢出率35.0%，PAX1基因甲基化檢出率0.0%；低級(jí)別病變HPV陽性檢出率78.3%，PAX1基因甲基化檢出率13.0%；高級(jí)別病變HPV陽性檢出率81.5%，PAX1基因甲基化檢出率29.6%；宮頸癌HPV陽性檢出率83.3%，PAX1基因甲基化檢出率100.0%。宮頸癌PAX1基因甲基化檢出率高于HPV陽性檢出率，比較存在差異具有統(tǒng)計(jì)意義，P＜0.05，結(jié)果詳見表1。

3 討論

本次研究結(jié)果：病理檢出結(jié)果為正常宮頸組織HPV陽性檢出率35.0%，PAX1基因甲基化檢出率0.0%；低級(jí)別病變HPV陽性檢出率78.3%，PAX1基因甲基化檢出率13.0%；高級(jí)別病變HPV陽性檢出率81.5%，PAX1基因甲基化檢出率29.6%；宮頸癌HPV陽性檢出率83.3%，PAX1基因甲基化檢出率100.0%。宮頸癌PAX1基因甲基化檢出率高于HPV陽性檢出率。發(fā)現(xiàn)PXA1基因在宮頸癌中出現(xiàn)甲基化異常，PXA1基因在宮頸癌組織中甲基化異常頻率為100.0%；揭示了PXA1基因在宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)中具有重要作用[11]。

目前國內(nèi)常見的宮頸癌篩查方法主要有宮頸細(xì)胞學(xué)和人類乳頭狀瘤病毒聯(lián)合檢測(cè)，浸潤(rùn)性宮頸癌的患者發(fā)病率和病死率下降，極大程度上成功降低了宮頸癌的死亡率[12]，但在某些方面仍有局限性。TCT檢測(cè)容易導(dǎo)致漏檢、HPV檢測(cè)存在假陽性較高等問題，細(xì)胞學(xué)檢測(cè)宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ的特異度高達(dá)83%～91%，靈敏度僅為44%～78%。Cervi-M宮頸癌基因甲基化檢測(cè)技術(shù)方法可以較好的彌補(bǔ)前兩者的不足。主要有如下特點(diǎn)：（1）能彌補(bǔ)TCT檢測(cè)漏檢率高、HPV檢測(cè)假陽性高等目前國內(nèi)常規(guī)宮頸癌篩查方法的不足；（2）可比常規(guī)TCT檢測(cè)和陰道鏡檢更早發(fā)現(xiàn)宮頸細(xì)胞是否有癌前病變；（3）可為臨床醫(yī)生提供參考，更準(zhǔn)確和有針對(duì)性的判斷是否需要進(jìn)一步的有創(chuàng)診斷和干預(yù)治療措施，避免過度治療；（4）在宮頸癌手術(shù)與治療后的追蹤監(jiān)測(cè)中也有良好的預(yù)警作用。

綜合上述，Cervi-M宮頸癌甲基化基因檢測(cè)，進(jìn)一步提高了治療的準(zhǔn)確率，可應(yīng)用于宮頸癌早期篩查與檢測(cè)，更準(zhǔn)確的輔助臨床診斷和采取對(duì)應(yīng)的干預(yù)治療措施。

表1 PAX1基因和HPV在不同病理分級(jí)中檢出陽性率比較