美洲豬瘟根除計劃—措施、診斷技術及參考實驗室

文│聯合國糧農組織

譯校│劉俞君 張淼潔 翟新驗（中國動物疫病預防控制中心）

一、美洲的措施

美洲實施計劃可以概括出以下措施：基于疾病的特征、養豬的宏觀系統、豬瘟的存在對生態、經濟、政治和文化的影響等方面，對美洲進行詳細的區域化措施，并且采取動物健康措施。

近期目標：建立新的無疫區，協助那些有足夠科學證據證明該國或者國內區域無疫，并且提供技術援助以獲得無疫認可。

對區域、次區域和國家計劃進行技術協調和管理，目標是做好補充措施，并將其可用的人力和物質資源最大化。

社區的加入和參與，重點在養殖者通過協會組織、肉類包裝行業、私人獸醫、生物制品生產商、大學和研究機構等發揮積極和決定性的作用。將獸醫學校納入其中，也非常有意義。

根據不同的生豬飼養模式，例如繁育場、育肥場和傳統的規模養殖場，確定、選定區域根除策略。

通過書面和相關的媒介宣傳目標，來推進計劃的實施，以防止豬瘟在半球范圍內蔓延。目的是獲得涉足動物健康、畜牧業以及城市、城郊和農村相關專業人士的支持，并且獲得實施半球計劃的措施和策略所必需的生豬飼養信息，選擇和培訓參與計劃的人員。與此同時，致力于支持計劃的確立：國家和國際檢疫系統；提高公眾對于存在諸如豬瘟之類的跨界疾病所帶來的衛生和經濟風險的認知；流行病學監測；診斷活動和獸醫生物制品必須滿足國際標準，而且所參與的實驗室必須達到最低生物安全標準，即滿足豬瘟參考實驗室開展相關實驗活動所需要的條件，包括國際標準化組織或者對于良好實驗室相關實踐的認可；持續進行有關預防和控制跨界疾病的培訓，包括豬瘟疫情防控演練；確定影響國家或者半球層面上疾病流行的風險因素；開展研究，確定田間或屠宰場取樣菌株的病原性，以便檢測是否存在豬瘟病毒（帶菌豬）；建立國家動物健康應急系統；創建一個動物健康突發事件應急基金；通過糧農組織/世界動物衛生組織/世界衛生組織發布國際疾病報告。

1.美洲豬瘟根除計劃管理。計劃管理的主要目的是促進項目和計劃的發展、實施和執行，這些項目和計劃的短期目標是實現美洲大部分地區豬瘟無疫，這是根除半球范圍內豬瘟進程的一部分。將通過建立指導委員會和國際技術咨詢委員會（ITAB）實現這一目標。

（1）指導委員會。指導委員會是美洲豬瘟根除計劃國際標準化的最高權威。由參與實施并提供資源的國際機構，每個區域和（或）子區域的兩個代表國家組成。各個國家的代表推選出委員會主席。技術干事負責監督項目的國際標準和委員會達成的協議。根據其職責和技術能力，糧農組織將成為技術秘書處的負責機構。委員會的職能如下：

負責制定和監督國際標準化的實現，指導半球范圍內各個國家建立、制定、控制和根除豬瘟的國家計劃。

促進建立國家“戰略聯盟”，由負責動物健康的公共部門和私營部門（豬養殖者、飼料生產商、獸藥生產商）組成，為國家項目提供財政支持，以及推廣半球計劃。

建立和支持參考實驗室，為國家獸醫診斷實驗室提供如下參考服務：國際技術咨詢委員會選擇的診斷技術的定義、標準化，以及相關的培訓；由國際技術咨詢委員會確定和批準的標準診斷試劑的生產和銷售；支持國家實驗室測定病毒分離株的類型；應國家要求，對用于疫苗免疫項目的生物制劑進行質量控制。

應國家的要求，提供技術援助和培訓，用于指導國家項目各個實施階段使用不同方法和技術。

系統匯總和發布有關美洲豬瘟的流行病學信息。

通過區域或者半球論壇定期評估國家項目的進展情況（建議在安排動物健康部長會議或者世界動物衛生組織區域會議的同時安排半球論壇，以便從國際高級動物健康官員處獲得有益的意見）。

應一個或多個國家的要求，為制定國家根除計劃提供技術援助，并為控制/根除項目尋求財政支持提供必需的項目文件。

建立一個機制，促進和評估與生豬養殖相關的私營部門參與管理國家豬瘟項目以及為此籌措資金。

參與指導委員會會議的成本由各個成員負責。指導委員會根據其職能策劃其活動項目，由組成委員會的國際組織按比例提供資金。根據委員會會議期間所做出的決定和可行性，資金可能來源于組織的固定預算或者預算外。會議議程應當考慮各個國家為了實現控制和根除豬瘟目標達成協議的可能性。除了國際標準外，可能會出現與半球計劃實際應用相關的其他情況。

（2）國際技術咨詢委員會。國際技術咨詢委員會是指導委員會的技術顧問，由國際機構的代表組成，這些國際機構表示有興趣在技術上和財政上支持半球計劃，泛美獸醫協會作為美洲的專業機構，代表各個區域的官方獸醫機構，代表各個區域的生豬養殖戶、代表技術秘書處和半球計劃的區域協調者。

國際技術咨詢委員會每兩年召開一次會議（各個區域推選出官方獸醫機構和豬養殖戶的區域代表，按照這些代表制定的規則實施定期輪換制）。

2.國際組織在項目執行中的作用。各個國家和地區根據半球計劃制定具體的計劃。每個國家和地區根據半球計劃的時間框架制定議程表，確定自己的工作和目標。應當明確的是，這樣的計劃是國家的責任，國際機構只是半球計劃的協調者。

建議優先考慮靠近豬瘟無疫地區的感染區域。在有問題的區域，尤其是那些靠近邊界的區域，國際機構可以應有關國家的要求提供援助。

控制和根除豬瘟計劃，例如那些由中美洲農牧保健組織（OIRSA）制定的計劃可能會對半球計劃進行補充，保留相關國家同意接受的計劃和義務。

相關國際機構將決定他們對計劃的具體支持。這些機構包括：聯合國糧農組織、泛美衛生組織（PAHO）、中美洲農牧保健組織、泛美口蹄疫中心（PANAFTOSA）/世界衛生組織、世界動物衛生組織（OIE）、美國農業部（USDA）和泛美獸醫協會（PANVET），除此之外還有例如國際農業合作研究所和國際原子能機構（IAEA）。

一個普遍接受的觀念是根據其授權和技術能力，聯合國糧農組織負責技術秘書處泛美口蹄疫中心——泛美衛生組織通過協調美洲疾病監測系統支持對抗豬瘟。這個系統正在進行維新，以便幫助展開根除活動。任何額外的幫助必須預先與泛美衛生組織總部商討。

泛美獸醫協會，作為專業組織（源于其參與的獸醫協會、學院和獸醫社團組成）能夠在以下方面支持計劃：贊助國家和地區內專家小組的討論、座談會和研討會；將主題融入泛美獸醫代表大會之中；贊助區域和半球交流小組；支持和傳播國家根除計劃；促進專家小組、泛美獸醫協會或者大專院校在交流中開展合作；幫助政府意識到計劃的重要性。推動政府建立保障措施，以應對疫情的再次暴發；在區域綜合性農畜業發展計劃的框架內推廣地方監測和根除豬瘟的經驗；積極參與社區教育，包括參與項目的人員；提高農村協會和牲畜飼養者的敏感性，以便迅速報告疫情；支持認證和專業獸醫的組織、培訓；當相關規范被忽視時，促進專業組織參與獸醫資格認證和暫停認證，從而避免官方獸醫和專業團體之間的沖突；鼓勵和推廣認證的私人獸醫參與實踐；協調半球范圍內對私人獸醫的認證規范；促進和協調高級專業培訓課程認證，規范專業認證的過程和標準。

二、國家層面的措施

1.研究和流行病學監測。

（1）目的：了解影響疾病表現的因素在空間和時間上的演變，評估引入和傳染病原體的風險。

（2）策略：確定、記錄、分析所需要的信息和各省、地區疾病情況的流行病學指標。調查、推薦標準抽樣方法和生豬養殖數據闡釋，從而深入地了解地區和國家的豬瘟流行病學，從控制、根除向無疾病階段過渡的技術可行性。

（3）目標：每月向中央和地區報告每個國家豬瘟疫情暴發和分布概況；提交一份詳細的年度報告，包括影響流行病學情況的活動和風險因素的分析；開展研究，以便確定是否擴大根除區和無疫區，以及各國是否宣布已經達到豬瘟無疫狀態。

（4）活動：確定這些國家內每個國家和各個省份所需要的信息的種類和頻率；確定和選擇每個國家的省份和國際邊境地區的流行病學指標；分析每個國家收到和處理的信息；編輯和分析重要的流行病學信息；建立每個國家（包括其省份在內）的月度情況報告；建立年度半球流行病學報告，包括每個國家的情況；進行流行病學研究，描繪田間分離株的致病性；繼續目前全球范圍的豬瘟形勢報告；對建立疾病無疫區進行可行性研究；開展對根除區的研究；進行擴大根除區可行性方面的研究；對豬瘟無疫國家的申報進行可行性研究；維持永久的不同國家屠宰場的抽樣系統，根據項目進度決定抽樣頻率；確定用來喂豬的食物廢物的來源；確定用食物廢物來喂豬的經營場所。

2.衛生控制。

（1）目的：控制檢測到豬瘟病毒的所有情況，根據各個國家為其疾病流行區域制定的策略，采取必要的措施阻止其擴散。

（2）策略：

A 控制區。通過檢疫措施控制上報的疑似豬瘟疫情，確診需要用到流行病學以及臨床、解剖病理學和實驗室信息。豬瘟疫情暴發的認定標準是某個確定的地方有一例或者多例病毒學確診病例。

根據每個國家的法律規定條款，運用其操作程序對經營場所進行官方檢疫。當情況表明不再存在疾病傳播的風險時，解除隔離檢疫。

調查感染來源，包括牲畜市場、屠宰場和垃圾處理場。使用規定的并且有質量保證的疫苗進行一場密集的免疫活動。

目標：100%解決疫情，調查疫情來源，定期檢查病毒傳播風險較高的地方（市場、屠宰場、垃圾場等等）。

B 根除區。一旦暴發疑似豬瘟疫情，就采取檢疫措施，當確認生豬患病或接觸病原時，將在被授權的屠宰場進行仔細檢查并且撲殺處理。經過處理的牲畜，包括其骨骼、血液和內臟，會被進行高溫處理，溫度高到足以確保根除豬瘟病毒。與此同時，調查經營場所、市場、屠宰場和垃圾堆以確定感染來源和可能的感染傳播范圍。在根除的最終階段，撲殺和處理所有染病的豬。

在這個區域，禁止銷售和使用豬瘟疫苗。無論基于何種目的，禁止進口來自控制區域的豬。

C 豬瘟無疫區。即使發現一例疑似豬瘟的病例，也要采取檢疫手段，在確認疾病后，撲殺所有患病和接觸過病原的豬。將被撲殺的豬就地掩埋。只有當疾病風險已經過去時，才能重新在該地進行養殖。如果因為環境原因無法銷毀所有豬，那么在根除區使用的程序將會被執行，該區會暫時喪失其無疫狀態。還要進行流行病學研究。禁止在無疫區銷售和使用豬瘟疫苗。

在無疫區，只能從另一個有正式認證的無疫區進口用于繁殖的豬。禁止從任何其他無疫區進口生豬肉和豬肉產品。

在無疫區，需要建立確保生豬養殖者參與的防治系統，包括要求即時報告任何疑似疫情。建議建立應急團隊，以便可以隨時召集采取應對措施。

（3）活動：接收、登記和調查疾病報告；控制疾病暴發；定期檢查屠宰場、市場和垃圾場；跟蹤調查屠宰場、市場和垃圾場的疫病情況，以便確定病毒來源；選擇并授權根除區域內的屠宰場處理患病和接觸了病原的豬；對要被運送到根除區和無疫區的種豬進行認證；批準將被撲殺的豬運送到根除區的屠宰場。

3.實驗室診斷。關于本文描述的一些診斷技術，很可能對于一些國家來說，發展使用所有這些技術的能力可能并不經濟。這需要確定可以為各個國家提供一定的診斷服務的區域參考實驗室的標準。

（1）目的。全面、準確且快速地診斷所有疑似豬瘟的病例。

（2）策略。堅持使用最有效的技術診斷疾病，并且保證疫苗的質量。

（3）目標。100%分析收到的樣本，并且100%評估所使用的疫苗的質量。

（4）活動。至少可以使用以下診斷技術：用于載玻片、組織和細胞培養物的直接免疫熒光技術；間接免疫熒光技術；血清中和；酶聯免疫吸附法（ELISA）；基于診斷和質量控制目的，生產足夠量的組織培養系PK15；診斷收到的疑似疾病樣本；分析常規屠宰場調查樣本；分析所采集的血清樣本以確定區域和國家是否能夠宣布無疫；分析所采集的樣本，對要被送往根除區和無疫區的種豬進行認證；運用國際豬瘟參考實驗室推薦的技術對國內或者進口疫苗進行質量控制，以確定保護能力，免疫持續時間，在扁桃體中的病毒持續性；生產足夠的兔子，用于進行疫苗接種；檢測豬對疾病的易感性，以便進行疫苗效力測試；測試疫苗的殘留致病性和疫苗的病毒傳播性；調查病毒株，用于疫苗生產；調查疫苗病毒在扁桃體中的持續感染和接種疫苗的抗體持續時間。

4.衛生教育。

（1）目的。提高社區對疾病的認識，以增加報告的數量；將項目的活動和目標告知給社區，以便實現合作。

（2）策略。確定社區對豬瘟的認知水平；編制有關項目的信息材料并將其分發到各個流行病學區域。

（3）目標。100%的畜主都要知道在疾病疫情暴發時該采取的衛生措施；在宣布其進入控制區、根除區和無疫區后，將控制區、根除區和無疫區的特征告知養殖戶，包括小規模的畜主以及所有與此相關的機構。

（4）活動。進行養殖戶訪問調查，以確定其對豬瘟以及應當采取的相關防控措施的了解；對參與調查過程的獸醫進行合作培訓；確定要分發的疾病相關信息材料的內容；促進并參加與疾病和農村社區團體有關的農業機構的討論組和會議；與在港口、機場和邊境口岸任職的警察和海關人員一起參與相關疾病的討論組和會議。

5.生物統計學分析。

（1）目的。建立和維護一個信息系統，該信息系統能夠實現持續了解疾病的演變和項目的發展，并在實現其目標和目的方面取得進展。

（2）策略。利用現有的結構及其通信系統，定期獲得相關事項的信息（實現項目目標，完成項目活動；人力和物力資源的使用）；以宣布國家和區域豬瘟無疫為目的，設計和分析訪問調查；設計和分析調查問卷，以確定豬畜主對于豬瘟以及相關應對措施的認知水平。

（3）目標。在半球計劃開展一年的前六個月期間，建立一個信息系統。

（4）活動。按照所選擇的評估指標，確定應當編制的信息；確定匯編和文件編制機制；改編現有的程序手冊，以便按照半球計劃的要求編輯、處理、分析和發布信息；記錄、分析和定期傳播半球計劃產生的全部信息；編制年度報告，評估半球計劃的活動和進展；設計一項調查，用來確定豬畜主的行為；設計一項調查，用來描述根除區的特征；設計一項調查，用來擴大根除區；以國家宣布豬瘟無疫為目的，制定血清學調查設計方案。

6.法律法規。

（1）目標。設計一個適用于半球計劃的立法框架，便于解釋和綜合應用。

（2）目的。在半球計劃的第一年，有一個合適的法律框架。

（3）活動。編制現有的規范；考慮到現有的疾病情況，以有適用于半球計劃要求的連貫、規范的文本內容為目的，改編和補充上述規范；制定和發布該文本，供項目人員、豬畜主和參與養豬業相關的組織使用；為區域和國家宣布無疫制定解決方案。

7.培訓。

（1）目的。為參與半球計劃的組織人員履行其職責進行必要的培訓。

（2）策略。為獸醫進行豬瘟病原學、病理學、診斷和流行病學方面的培訓，以及進行半球計劃的各個方面、立法現狀和應對疾病疫情所要采取的措施方面的培訓。為在牲畜交易市場和屠宰場工作的獸醫進行培訓，培訓課程為其與半球計劃相關的職責以及半球計劃的相關方面。為計劃實施參與人員進行以下主題的國際培訓課程：診斷、動物健康項目的管理、動物健康項目的經濟評估和流行病學分析。

（3）目標。在計劃的第1、4、8、12、16和19年分別對所有參與半球計劃的獸醫進行為期三天的培訓；在項目的第一年，對在牲畜交易市場和屠宰場工作的獸醫進行兩項課程的培訓；第一年，每個國家會有兩名專業人士接受該疾病診斷、疫苗質量控制和流行病學方面的培訓；第二年，每個國家會有一名專業人士接受動物健康項目管理方面的培訓。

（4）活動。為官方獸醫機構的獸醫和在牲畜交易市場、屠宰場工作的獸醫進行的課程準備培訓材料；在項目的第1、4、8、12和16年舉辦培訓課程；為在牲畜交易市場和屠宰場工作的獸醫舉辦培訓課程；利用外國的培訓獎學金。

8.行政管理。

（1）目的。建立和維持各個國家正在使用的行政管理程序，使程序化活動容易進行，統籌利用所需的人力、物力和財力。

（2）策略。將項目的操作程序納入各個國家的官方獸醫服務中；根據區域或者項目活動，對每年管理基金進行分配，同時發現出現的管理問題。

（3）目標。為各個項目階段和支持半球計劃提供所需的人力、物力和財力。

（4）活動。評估參與計劃的各級人員的職責；每年記錄各個項目活動的年度資源需求；獲得成本；通過官方程序獲得設備和資源；編制設備目錄，確定需求；更換需要的設備；按照需求，制定時間進度計劃，并將其與系統規劃相結合。

附錄2 豬瘟診斷、生物技術以及建立參考實驗室（附件1、3略）

從遺傳學角度和抗原角度來說，豬瘟與牛病毒性腹瀉和邊界病關系密切，和牛病毒性腹瀉及邊界病的病原體一樣，豬瘟的病原體是黃病毒科瘟病毒屬的一種小核糖核酸病毒。正因為這三種病毒之間關系密切，所以需要這三種病毒的鑒別診斷方法。豬瘟的癥狀和病變各種各樣，而且與豬的其他出血性疾病（非洲豬瘟、巴氏桿菌病、沙門氏菌病、丹毒等等）的相似性使得臨床診斷不足以確診疾病，要確診該種疾病，就必須進行實驗室診斷。

實驗室診斷的價值和類型，由于上述原因，所有計劃活動都需要豬瘟實驗室診斷。值得再次強調的是瘟病毒屬之間具有非常高的基因和抗原相似性，一些毒株的相似性可以達到80%。瘟病毒屬一般不是致細胞病變的，導致一些被污染組織培養系有可能被用于病毒分離。

該疾病各種相關的實驗室診斷技術包括：血清學診斷；病毒學診斷；分子診斷；組織病理學診斷。

1.血清學診斷。血清學診斷技術的主要應用和優勢是：證明無疫；能夠分析大量樣本；評估哨兵動物；檢查動物，進行疫苗測試。

主要的局限性是：感染后抗體的出現可能要花21到30天時間，這限制了其診斷疫情的價值；與其他瘟病毒可能有交叉反應。

建議進行與計劃相關研究的技術有：免疫過氧化物酶中和試驗；免疫熒光中和試驗；間接和競爭酶聯免疫吸附試驗。

2.病毒學和分子診斷。主要的應用是：確診新區域的該種疾病；診斷病毒攜帶豬；快速診斷。

推薦的技術是：組織培養細胞系PK15和/或SK6中的病毒分離；運用多克隆抗體的直接免疫螢光標定；反轉錄聚合酶鏈式反應。

根據計劃，疫情的確診需要運用兩種互補的診斷技術進行陽性診斷。

3.解剖病理學診斷。應用和局限性：急性豬瘟病變沒有特殊病征，類似于造成出血性病變的其他敗血癥疾病，例如非洲豬瘟、丹毒、沙門氏菌病等等。急性豬瘟的病變通常是扁桃體壞死、脾梗塞以及淋巴結、腎、膀胱、喉頭和胃腸道及呼吸道系統黏膜出血。

只有一個解剖系統可能會因為受到繼發性細菌感染的強烈影響發生慢性病變。可能會發現壞死性腸炎，伴隨回盲瓣輕度潰瘍和肋骨軟骨關節腫大。

從組織結構上來說，大部分牲畜會表現出非膿性腦膜腦炎。在固定組織（尤其是扁桃體、淋巴結和脾臟）上，可以運用單克隆抗體和商用免疫過氧化物酶試劑盒證明病毒性抗原。

鑒別診斷。必須首先鑒別診斷非洲豬瘟，尤其是在受到過威脅的國家，然后鑒別診斷其他豬出血性疾病，例如：沙門氏菌病；丹毒；巴氏桿菌病等等。也因為瘟病毒屬的關系非常密切，需要針對下列疾病進行鑒別診斷：牛病毒性腹瀉（BVD）；邊界病。

樣本的選擇和提交給實驗室。對于執行計劃而言，一件非常重要的事情是，不僅送交實驗室的樣本要正確無誤，樣本也要處于良好的狀態。樣本狀態不好的話，就無法得出準確的診斷。

對于豬瘟來說，要提交的樣本有：血液（加肝素）；COAGULATED BLOOD [SERUM]凝固的血（血清）；扁桃體；腸系膜神經節；脾臟；回腸。

必須運用盡可能最可靠和最快速的方法將樣本送達實驗室，絕對不能將其置于室溫環境下。

在從牲畜身上采集到樣本之后，必須準確地對樣本進行標記，標記要牢固可靠（在器皿上纏一圈膠布或者貼標簽），而且必須將其置于4℃的溫度環境下保存。必須用單獨的容器盛放各個牲畜的樣本，密封保存。

如果在采集樣本后不到72小時就要進行實驗室檢測，那么最好將樣本置于4℃的溫度環境下保存，而不是將其冷凍。