總蛋白雙縮脲法單試劑盒與雙試劑盒檢測結果的一致性評估

范嬋 劉艷婷 趙印

摘 要：目的 探討總蛋白雙縮脲法單試劑盒與雙試劑盒檢測結果的一致性。方法 參照美國臨床和實驗室標準協會（CLSI）EP9-A2文件的要求，以雙試劑盒為參比方法、單試劑盒為待評方法，使用患者新鮮血漿標本進行方法比對及偏倚評估。結果 回歸方程Y=1.0064X+0.2168，相關系數r=0.9984，不同醫學決定水平處的偏倚均小于我國衛生行業標準《WS/T 403-2012 臨床生物化學檢驗常規項目分析質量指標》所規定的總允許誤差的1/2。結論 總蛋白雙縮脲法單試劑盒與雙試劑盒的檢測結果具有良好的一致性，差異臨床可接受，其檢測報告可使用相同的參考區間，但仍建議臨床實驗室使用雙試劑盒檢測患者樣本。

關鍵詞：總蛋白；雙縮脲法；偏倚評估；一致性

中圖分類號：R446.1 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.20.047

文章編號：1006-1959（2018）20-0152-03

Abstract：Objective To investigate the consistency of the results of the total protein biuret method single kit and double kit.Methods According to the requirements of the American Society for Clinical and Laboratory Standards（CLSI）EP9-A2 document，the double kit were used as the reference method，the single kit was used as the method to be evaluated，and the patient's fresh plasma samples were used for method comparison and bias evaluation.Results The regression equation Y=1.0064X+0.2168，the correlation coefficient r=0.9984，the bias at different medical decision levels is less than the total specified in China's health industry standard “WS/T 403-2012 Clinical Biochemical Inspection Conventional Project Analysis Quality Index”.Allow 1/2 of the error.Conclusion The results of single kit and double kit of total protein biuret method were in good agreement with each other，the difference was acceptable in clinic.The same reference range could be used for the test report，but it was still recommended that the clinical laboratory should use double kit to detect the patient sample.

Key words：Total protein；Biuret method；Bias assessment；Consistency

總蛋白（total protein，TP）是血清或血漿所含各種蛋白質的總稱，臨床上常通過雙縮脲法（biuret method）檢測血清或血漿TP含量及其組分，用以評價患者的營養狀態、消化功能及肝臟合成功能等。相關文獻表明，該方法對肝臟疾病、腎臟疾病、出血性疾病和免疫性疾病等的診療和愈后判斷具有重要價值[1-3]。隨著技術的不斷發展，試劑盒的性能水平不斷提高，部分廠家在TP測定單試劑盒的方法基礎上開發了雙試劑盒，以減小標本質量對檢測結果的干擾，保障檢測結果的準確性。本文參照美國臨床和實驗室標準協會（CLSI）頒布的EP9-A2文件[4]要求，使用患者新鮮血漿標本對單試劑盒和雙試劑盒進行方法比對和偏倚，探討了兩試劑盒檢測結果的一致性，現報道如下。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 日立7600全自動分析儀；總蛋白雙縮脲法測定單試劑盒與雙試劑盒均由四川邁克提供，批號為1117041，儀器檢測參數均嚴格按照試劑說明書設置；配套生化復合校準品由四川邁克提供，批號為0518061，量值嚴格溯源至YY/T1195-2011血清總蛋白參考測量方法。低、中、高三水平液體生化多項質控品由美國伯樂提供，批號為45771～45773。

1.2標本 隨機選擇2018年8月1日～10日于遂寧市中心醫院就診的80例門診患者，并以成都瑞琦公司生產的肝素鈉抗凝真空采血管采集患者靜脈血3 ml，充分混勻后以4000 rpm的參數離心5 min，及時分離血漿。所有標本均無溶血、黃疸和脂濁，其檢測結果均在線性范圍內，且至少50%標本的檢測結果處于參考區間之外。

1.3方法

1.3.1標本檢測 參照EP9-A2文件[4]的要求，以雙試劑盒為參比方法、單試劑盒為待評方法，使用患者新鮮血漿標本進行方法比對及偏倚評估。標本檢測前對儀器常規保養和校準，且3個濃度水平的室內質控均在控。每天以1～8和8～1的順序檢測8份新鮮標本，連續檢測10 d，共檢測80份樣本。所有標本均于采樣后2 h內完成檢測。

1.3.2離群值檢驗 按照EP9-A2文件進行方法內及方法間離群值檢驗[5]。

1.3.3兩試劑盒檢測結果的比較及線性回歸分析 計算兩試劑盒所有標本雙份測定的均值，并對其進行配對資料t檢驗比較分析；然后以雙試劑盒每份標本雙份測定的均值為X軸、單試劑盒每份標本雙份測定的均值為Y軸繪制散點圖，從而得到兩試劑盒間檢測結果的線性回歸方程（Y=bX+a）及其相關系數（r）；并以雙試劑盒每份標本雙份測定的均值為X軸、兩試劑盒每份標本雙份測定的均值差為Y軸繪制偏倚圖。當r≥0.975則表示X取值范圍合適，可用直線回歸分析來評估斜率（b）和截距（a）；若r<0.975則需擴大X取值范圍，增加樣本量后再重新分析全部數據[4，5]。

1.3.4偏倚評估 根據線性回歸方程計算單試劑盒在45 g/L、60 g/L和85 g/L這3個濃度水平處的預期偏倚（SE%）[5，6]，SE%={（b-1）×X+a}×100/X，然后以衛生行業標準WS/T 403-2012[7]中 TP的總允許誤差（TEa）的 1/2 為臨床可接受水平（即 SE%≤1/2TEa），表示兩試劑盒檢測結果具有一致性。TP的 TEa 為靶值±5%。

1.4統計學方法 使用SPSS 19.0統計軟件及Excel2007軟件進行數據分析處理。計量資料以（x±s）表示，組間比較采用配對資料t檢驗，以P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1離群值檢驗 經檢驗，所有標本方法內均未見離群值；而方法間的離群值檢驗時僅發現1份樣本存在離群值，經分析確認為甘油三酯過高所致，刪除此標本檢測數據后增加標本繼續分析。

2.2兩試劑盒檢測結果的比較及線性回歸分析 單試劑盒TP檢測結果為（65.94±14.41）g/L，雙試劑盒TP檢測結果為（65.30±14.29）g/L，兩試劑盒間檢測結果差異具有統計學意義（t=6.920，P<0.05）。經線性回歸分析，其回歸方程為Y=1.0064X+0.2168，r=0.9984，見圖1、圖2。

2.3兩試劑盒檢測結果的一致性 單試劑盒在45 g/L、60 g/L和85 g/L這3個Xc的SE%分別為1.12、1.00和0.90，均小于1/2TEa。這說明單試劑盒的SE%臨床可接受，兩試劑盒檢測結果具有良好的一致性。

3 討論

TP檢測具有國際公認的參考方法及參考物質，從而促進了TP檢測的標準化工作，保障了不同廠家試劑間檢測結果的準確性和一致性。但在臨床工作中發現，使用雙縮脲法單試劑盒檢測血清或血漿TP時，其檢測結果容易受到標本質量的影響，如溶血、脂濁等將使檢測結果假性增高。為解決這一影響因素，部分廠家研發了雙試劑盒，即加標本后立即加入試劑R1，混勻并孵育5 min再以空白管調零后測定吸光度A1，然后加試劑R2，再次孵育5 min后測定吸光度A2，根據A2與A1的吸光度差值和校準曲線計算標本中TP的濃度，從而明顯減小了標本質量對檢測結果的影響。

因雙試劑盒的成本比單試劑盒高，目前大部分實驗室仍使用單試劑盒，故本文參照EP9-A2文件的要求進行方法比對及偏倚評估，以雙試劑盒為參比方法、單試劑盒為待評方法，研究結果顯示，單試劑盒的檢測結果顯著高于雙試劑盒（t=6.920，P<0.05），相關系數r=0.9984，直線回歸方程為Y=1.0064X+0.2168，從圖2可見偏倚點隨雙試劑盒雙份測定均值呈隨機分布，但有傾斜的趨勢，斜率為0.064，截距為0.2168，在45 g/L、60 g/L和85 g/L這3個Xc的SE%均小于《WS/T 403-2012 臨床生物化學檢驗常規項目分析質量指標》行業標準中所規定的總允許誤差的1/2，說明兩種試劑盒的檢測結果具有一致性，差異臨床可接受，其檢測報告可使用相同的參考區間。

綜上所述，總蛋白雙縮脲法單試劑盒與雙試劑盒的檢測結果具有良好的一致性，但仍建議臨床實驗室使用雙試劑盒檢測患者標本。

參考文獻：

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收稿日期：2018-8-21；修回日期：2018-9-1

編輯/錢洪飛