多重PCR檢測技術在食品微生物檢測中運用

□ 王 璐 張 文 高澤岳 陳 晨 王明微 吉林省安信食品技術服務有限責任公司

在人們生活水平不斷提升的背景下，人們對于食品的需求量也變得越來越大，如果食品中含有微生物，將會引發食物中毒等問題，對人類的身體健康產生嚴重威脅。面對此種情況，我國應當加強對于食品微生物的檢測，而文章主要對多重PCR檢測技術進行探討，了解該技術的具體應用以及其本身所存在的不足，并在未來加以改進。下面筆者就針對多重PCR檢測技術的相關內容進行詳細闡述。

1 多重PCR檢測技術的概述

PCR中文名稱為聚合酶鏈式反應，其主要是指在體外條件下，模板DNA在聚合酶的作用下進行復制的技術，其過程主要為變性、退火與延伸。雙鏈DNA通過熱變性會形成單鏈DNA，然后其和引物進行結合，受到聚合酶的作用，核苷酸順著DNA單鏈逐漸延伸最終形成雙鏈，再將其當作模板產生新的DNA雙鏈，如此不斷循環。總體來說，多重PCR在某一反應體系之中加入超過兩對引物（包括兩對），從而產生更多的DNA序列。

2 多重PCR檢測技術在食品微生物檢測中運用

在食品微生物檢測中應用多重PCR技術能夠起到更好的檢測效果，該技術主要是應用在以下3個方面。

2.1 在檢測病原微生物時應用

病原微生物主要分為3種類型。①沙門氏菌。該病菌極容易受到外界因素的影響，從而對檢測準確性產生非常大的影響。利用多重PCR技術進行檢測則能夠獲得良好效果，對突發情況進行準確鑒定，有效提升檢測率。②金黃色葡萄球菌。該病菌在繁殖過程中會產生腸毒素SE，從而引發食物中毒，該病菌存在蔬菜、發酵肉或是生肉之中。③腸出血性大腸桿菌，該病菌也會產生引發食物中毒，在對其進行檢測時主要是將鞭毛基因等視為目的基因[1]。

2.2 在檢測非致病菌時應用

病菌和乳酸菌混合在一起，將會大大抑制病菌的生長，而這也說明食物將要腐敗。對于真空包裝的食品來說，其中常常含有一定量的乳酸菌，能夠有效抑制細菌的成長，通過利用多重PCR技術能夠對真空包裝的食品是否發生了質變與腐敗進行檢測。

2.3 在檢測環境微生物時應用

在外界環境中存在各種各樣的細菌，其中多重耐藥鮑氏桿菌將會對食品安全產生直接影響，而且黃曲霉所產生的毒素也會造成癌變。根據多重PCR技術的具體使用情況來看，該技術在黃曲霉、不動桿菌等到方面的檢測上具有非常高的準確性。

3 多重PCR檢測技術的不足與改進

雖然多重PCR技術在應用于檢測食品微生物上能夠產生明顯作用，但是其本身也存在著明顯的不足，主要表現在引物之間會出現相互抑制的情況，與非靶序列進行結合會產生非特異性擴增[2]。食品成分相對較為復雜或微生物含量較低，會對樣品產生直接影響，從而導致靈敏度不斷下降，甚至是形成假陰性結果，對于該檢測技術的普及應用是非常不利的。

在對多重PCR檢測技術進行改善時，相關研究人員為了對反應條件和多重PCR體系進行優化，借助免疫磁珠吸附技術以便獲得更為理想的前處理效果，并降低各種抑制因子的作用。利用實時熒光定量PCR可以有效免除后處理，其本身擁有高效、特異以及準確等優勢，然而因為設備成本過高，并且最終檢測結果還有可能受到其他方面因素的影響，如外源DNA，所以需要簡化樣品處理過程，最大程度降低檢測成本[3]。利用變性梯度凝膠電泳可將堿基數不同的DNA分離開，然后根據DNA分布情況等了解微生物，如此操作不僅變得更加簡單，而且還具有非常高的準確性。另外，由于分析的樣品容量相對較小，所以只能夠應用于相對較小的DNA片段的分析中，并且在制備樣品時圖譜條帶會發生改變。

4 總結

總之，多重PCR檢測技術在應用時具有非常高的準確率，檢測速度也更快，而且具有良好的特異性，將其應用于非致病、環境以及食品病原微生物3種類型中能夠起到良好的作用，因此該檢測技術在食品微生物檢測中擁有良好的發展前景。但是，多重PCR技術也存在很多不足之處，為了讓該技術在未來能夠得到更好的應用，需要相關研究人員對其進行改進，提高該技術在食品微生物檢測中的效果。