快速測試片在微生物中的應用

□ 李 靜 許壽丹 通標標準技術服務有限公司南京分公司

微生物快速測試片具有良好的測試效果，測試技術在測量過程中有更多的優勢，產品的使用檢品相對較小，且易于儲存，便于攜帶和使用，測試技術也不需要消耗大量資金，不需要浪費大量的資源，也不會在檢測過程中產生大量的污染物，可以減少對環境的污染。微生物快速測試片還可接種多種細菌，進而縮短檢測時間，抑制細菌繁殖。下面進行詳細闡述。

1 以濾紙為載體的測試片

1.1 菌落總數測試片

一般來說，該類測試片是以濾紙為主要測試載體的測試片，在測試過程中，需要首先篩選出密度相對均勻、吸附能力較好且白色的濾紙，將其裁剪到統一規格標準（4.0×5.0 cm）。之后，檢測人員需要將氯化三苯四氮唑加入無菌培養標本中，將裁剪好的濾紙浸泡在其中，保證測試環境的干燥性，并對浸泡的濾紙進行密封保存。氯化三苯四氮唑作為一種氧化還原劑，當其與氫接觸后，就會產生紅色點狀物，即三苯甲酯。因此，只需要觀察濾紙上出現的紅色點狀物，就可以確定細菌的數量。但是需要格外注意的是，要防止氯化三苯四氮唑在使用過程中用量過大，進而抑制細菌的生長，最終不利于微生物的準確檢測。在檢測過程中，要將其放到37 ℃的培養箱中，培養16～18 h，之后觀察濾紙上出現紅色點狀物的數量，操作完成后對其進行焚燒處理[1]。

1.2 大腸菌群測試片

大腸桿菌測試片在中國疾病控制和預防中心得到了廣泛應用,在食品微生物檢測中應用，可以提高檢測的準確性：通過糞大腸桿菌的研究試驗，相關人員確定了科學的生產工藝，與傳統的測試結果比較后證明了腸道菌群測試檢測合格率為95%。用乳糖、蛋白胨、膽鹽、氯化三苯四氮唑和瓊脂在pH 6.8～7.0、115 ℃高溫滅菌15 min，60 ℃條件下浸泡，55 ℃下干燥。待測液體加入之中，37 ℃下培養16～18 h即可觀察檢測結果。結果發現，紙上的紅斑周圍有一圈黃色的光暈，即為陽性。如果紅斑周圍有一個紫藍色的暈，則認為是陰性。若紅色斑點接觸酸性樣品后會變黃，培養后不會出現紅色斑點，為陰性。在片劑法的試驗中，應做好培養液的制備。為了保證試驗的準確性，應考慮生物酶的作用，用滅菌過的濾紙吸收培養基中的溶液。在纖維的膨脹作用下，細菌大量生長繁殖。氯化三苯四氮唑還原為紅色后，形成紅色細菌。產生黃色光暈后，細粒會分解乳糖，產生酸性物質，使指示劑變黃。除此之外，使用氯化三苯四氮唑或瓊脂粉時，應控制用量，太多或太少都會影響測試結果的準確性。

1.3 大腸菌群、大腸桿菌紙片熒光法

根據細菌會產生某些代謝健康物質或代謝物的特點，建立了一種大腸菌群、大腸桿菌紙片熒光法。將待測細菌所需的營養物質、酶底物和抑菌化合物放在紙上，檢測大腸菌和大腸桿菌產生的相關酶的活性，以達到計數目的。現有的兩種測試片分別可以檢測人腸桿菌和大腸桿菌，在37 ℃下培養24 h后在365 nm熒光燈下觀察結果，最小檢出量可達0～4 CFU/mL[2]。

2 菌落總數測試片

2.1 霉菌、酵母菌測試片

試驗片含霉菌和酵母生長所需營養素，并添加了抗生素抑制細菌生長，在接種后將其置于21～25 ℃的環境下培養3～5天，之后對其細菌總量進行計數。一般來說，酵母菌落特征為菌落小，邊緣清晰，顏色均勻，灰綠色至藍綠色，菌落向下。而霉菌菌落的特征為菌落大，邊緣模糊，中間暗，顏色不均勻，苦艾平坦。

2.2 大腸菌群、大腸桿菌檢測紙片

該試驗片含有改進的VRB培養基和糖苷指示劑。大多數大腸桿菌可產生B糖苷酶，它與培養基中的指示劑發生反應，在大腸桿菌菌落周圍產生藍色沉淀。覆蓋在表面的薄膜可以保留發酵乳糖產生的氣體，形成藍色和深藍色菌落，并與氣泡連接。大腸菌群在測試片上產生酸，指示燈變為中暗紅色。大腸菌群是指紅色菌落周圍有氣泡的菌落。因此，該測試片可以確定大腸桿菌和大腸菌群的數量：藍色和紅色有氣泡的菌落是大腸菌群，藍色有氣泡的菌落是大腸桿菌。

3 結語

總而言之，快速測試片已廣泛應用于微生物檢測中。通過實踐證明，使用快速測試片可以提高檢測的質量和效率，且不會產生二次污染，操作簡單，但該檢測方法也有一些缺點，很容易受到外部因素的影響，測試人員必須有專業技術，確保測試條件符合要求，而且需要控制試劑的用量，為了保證濾紙的質量，如果濾紙上有孔，則很容易隱藏補救措施。