非洲豬瘟實驗檢測樣品采集、包裝與運輸技術(shù)要求

王海豐

（撫順市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)及扶貧開發(fā)促進中心 113006）

非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒引起的豬的一種急性、熱性、高度接觸性動物傳染病，以高熱、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)出血和高死亡率為特征。世界動物衛(wèi)生組織（OIE） 將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。自8 月份沈陽市發(fā)生我國首次非洲豬瘟疫情以來，截至目前全國共有17 個省、市、自治區(qū)發(fā)生60 余起疫情，造成巨大經(jīng)濟損失和社會影響。非洲豬瘟病毒感染的豬只發(fā)病臨床和剖檢癥狀非常典型，兼顧古典豬瘟和高致病性豬藍耳病的特征，需經(jīng)實驗室檢測來確診。為保證實驗室檢測的準(zhǔn)確，樣品采集、包裝和運輸技術(shù)要求尤為重要。本文從采樣方法、樣品的記錄、保存、包裝和運送等技術(shù)進行科學(xué)系統(tǒng)的介紹，具體如下。

1 采樣方法

1.1 全血樣品

采血過程中應(yīng)保持無菌操作。采血前，先用酒精棉對采血部位進行局部消毒。采血完畢，進行局部消毒并用干棉球按壓止血。使用含有抗凝血劑（EDTA） 的真空采血管從頸靜脈、前腔靜脈或耳緣靜脈抽取全血。如果豬只已經(jīng)死亡，可立即從心臟中采血。避免使用含肝素的真空采血管。

1.2 血清樣品

使用未加抗凝劑（紅色蓋子） 的真空采血管從頸靜脈、前腔靜脈、耳緣靜脈采血，或剖檢過程收集血液樣品。靜置分離后，收集血清。如果血清是紅色表明樣品發(fā)生溶血。通常已經(jīng)死亡動物的血液樣品易發(fā)生溶血。血清樣品在分離后可以立即開展檢測，如果需要儲存，對于抗體檢測，儲存在-20℃，但對病毒檢測最好儲存于-80℃。

1.3 器官和組織樣品

可采集脾臟、淋巴結(jié)、肝臟、扁桃體、心臟、肺和腎臟樣品。脾臟和淋巴結(jié)的病毒含量最高。對于死亡時間較長的動物，可采集骨髓樣品，也可采集關(guān)節(jié)內(nèi)組織液。建議將樣品保持在4℃，盡快提交給實驗室。如無法及時送樣，可將樣品儲存在冷庫或液氮中。樣品用10%緩沖福爾馬林浸泡30min 以上，病毒可被滅活，可用于PCR 檢測。樣品的最小需求量：血清1ml；全血1ml；組織樣品10g。

1.4 環(huán)境樣品

可多點采集養(yǎng)殖場環(huán)境拭子，如糞便、泔水、飼料等。建議樣品4℃以下保存。

2 樣品的記錄、保存、包裝和運送

為保證準(zhǔn)確診斷，必須在適當(dāng)溫度下，以最快速度，將樣品仔細包裝、做好標(biāo)記和相關(guān)記錄，以最快路線送到指定的實驗室。

采樣之前必須致電相關(guān)實驗室，確保遵循正確的樣品提交程序，保證所送樣品能在第一時間完成檢測及儲存。做好樣品運輸過程中的安全保障工作，避免在運輸途中感染其他動物，避免樣品被污染。運送的樣品必須附有足夠數(shù)量的冷卻材料（如冰袋），以防變質(zhì)。

3 采樣信息記錄

采樣的同時應(yīng)填寫采樣單。采樣單應(yīng)用鋼筆或簽字筆逐項填寫（一式三份）。樣品標(biāo)簽和封條應(yīng)用簽字筆填寫。保溫容器外封條應(yīng)用鋼筆或簽字筆填寫。小塑料離心管上可用記號筆做標(biāo)記。應(yīng)將采樣單和病史資料裝在塑料包裝袋中，并隨樣品送實驗室，每個樣品應(yīng)能對應(yīng)到來源動物。樣品信息至少應(yīng)包括畜主姓名和養(yǎng)殖場地址；養(yǎng)殖場飼養(yǎng)動物品種及數(shù)量；疑似或被感染動物或易感動物種類及數(shù)量；首發(fā)病例和繼發(fā)病例的日期；感染動物在畜群中的分布情況；死亡和出現(xiàn)臨床癥狀的動物數(shù)量及年齡；臨床癥狀及其持續(xù)時間，死亡情況和時間等；飼養(yǎng)類型和標(biāo)準(zhǔn)，包括飼料來源等；送檢樣品清單和說明，包括病料種類、保存方法等；動物免疫和治療史；送檢者的姓名、地址、郵編、電話和郵箱；送檢日期；采樣人和被采樣單位簽章。

4 樣品包裝要求

推薦樣品使用“三重包裝系統(tǒng)”，并正確標(biāo)記，以防止泄漏，內(nèi)附采樣單。

4.1 直接盛裝容器

樣品應(yīng)儲存在密封、無菌的主容器中，根據(jù)檢驗樣品性狀及檢驗?zāi)康倪x擇不同的容器。每個樣品外應(yīng)做好標(biāo)記，注明樣品名、樣品編號、采樣日期等，要能明確識別來自于哪只動物。

4.2 二次包裝

吸收材料也應(yīng)放置在二次容器內(nèi)。如果將多個易碎的主容器放置在單個二次容器中必須單獨包裝或分離，以防止相互接觸。二次包裝容器應(yīng)貼封條，封條上應(yīng)有采樣人簽章，并注明貼封日期，標(biāo)注放置方向。

4.3 堅硬的外部包裝

外包裝在盛裝液體的情況下不得超過4L，在固體物質(zhì)的情況下不得超過4kg （不包括冰的重量）。樣品必須保持4℃溫度或更低溫度，并就近送動物疫病預(yù)防控機構(gòu)進行保存。注意：切勿凍結(jié)全血或混合有血凝塊的血清。

4.4 外包裝標(biāo)簽和標(biāo)記

需粘貼“B 類感染物質(zhì)”標(biāo)簽，其正確的運輸名稱旁邊標(biāo)注“B 類感染物質(zhì)”，采樣負責(zé)的全名、地址和電話號碼，實驗室聯(lián)系人的全名、地址和電話號碼，標(biāo)簽上注明“在4℃”“在-20℃”或“在-80℃”保存。