非洲豬瘟的診斷及防控措施

王宏棟 王玉賽 李冬剛 韓 冰 謝 婕 陳芳芳

（1 德州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院， 山東德州 253015； 2 德州市農(nóng)業(yè)農(nóng)村事業(yè)發(fā)展中心， 山東德州 253015）

非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）引起的一種烈性傳染病，具有高發(fā)病率和高致死率，且該病毒在環(huán)境中存活時(shí)間長(zhǎng)，難以撲滅。ASFV 不感染人，不會(huì)對(duì)公共衛(wèi)生造成直接危害，但是會(huì)對(duì)豬及豬產(chǎn)品的交易，尤其以豬肉作為主要蛋白來源的國(guó)家造成嚴(yán)重的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)影響。2018 年8 月至2019 年7 月31 日我國(guó)有31 個(gè)省份發(fā)生非洲豬瘟疫情累計(jì)150 余起，撲殺生豬超百萬頭，造成國(guó)民經(jīng)濟(jì)巨大損失。目前全球還沒有針對(duì)非洲豬瘟的有效疫苗，因此提高養(yǎng)豬場(chǎng)對(duì)非洲豬瘟病毒的快速診斷以及綜合防控能力顯得尤為重要。

1 非洲豬瘟病毒簡(jiǎn)介

非洲豬瘟病毒是一種特殊的病毒，是非洲豬瘟相關(guān)病毒科非洲豬瘟病毒屬的唯一成員，同時(shí)也是迄今發(fā)現(xiàn)的唯一蟲媒病毒。ASFV 為有囊膜的雙鏈DNA 病毒，基因組大小為170～194 kb，我國(guó)流行毒株的大小為189 kb左右，屬于強(qiáng)毒株，基因組含可變區(qū)和穩(wěn)定區(qū)，中間是穩(wěn)定區(qū)，兩端是可變區(qū)，并有發(fā)夾環(huán)，易于變異。ASFV在環(huán)境中具有很強(qiáng)的生存能力。在不同的介質(zhì)中，特別是在富含有機(jī)物的環(huán)境中存活能力很強(qiáng)，在pH 值3.9～11.5 的條件下活性不受影響，在4℃保存的帶骨肉中至少存活5 個(gè)月，冷凍豬肉中能存活15 周，半熟肉及泔水中也可長(zhǎng)時(shí)間存活；- 70℃冷藏條件下，血液中的病毒能存活18 個(gè)月，脾臟組織中ASFV 感染力2 年不受影響[1]。

ASFV 易感宿主是家豬、野豬和鈍緣蜱，其傳播途徑復(fù)雜。可通過直接接觸感染動(dòng)物或經(jīng)感染病毒的鈍緣蜱叮咬傳播，也可直接或間接接觸感染豬的排泄物或分泌物以及飼料、設(shè)備、衣物、運(yùn)輸工具等病毒污染物傳播。目前有研究表明ASFV 能通過2 m 范圍內(nèi)的短距離氣溶膠傳播[2]，豬舍內(nèi)的螯蠅作為機(jī)械的傳播媒介也能將ASFV 傳播給豬，但病毒在其體外存活不超過2 天[3]。

2 非洲豬瘟的診斷

2.1 臨床診斷

ASFV 自然感染的潛伏期為4～19 d，ASF 臨床表現(xiàn)取決于感染毒株的毒力、接觸時(shí)間以及感染途徑。高毒力毒株導(dǎo)致超急性和急性發(fā)病，中等毒力毒株感染表現(xiàn)多種臨床癥狀，分別有急性、亞急性和慢性或不明顯癥狀，低毒力毒株造成亞急性、慢性或不明顯的發(fā)病[4]。在我國(guó)目前主要表現(xiàn)為急性型，死亡率高達(dá)90%～100%，臨床癥狀與豬瘟、豬丹毒以及高致病性藍(lán)耳病類似，豬群發(fā)病時(shí)多是出現(xiàn)厭食、高熱，耳朵發(fā)紺、全身性的廣泛出血，懷孕母豬出現(xiàn)流產(chǎn)，在發(fā)病高峰期剖檢可見腸道彌漫性出血，脾臟異常腫大、發(fā)脆，呈現(xiàn)黑紅色，在發(fā)病最后階段可見豬的急促呼吸，以及肺水腫引起的鼻腔分泌大量黏液[5]。

2.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

非洲豬瘟的臨床癥狀及病變只能作為疾病診斷的參考，真正確診必須依靠實(shí)驗(yàn)室診斷。現(xiàn)行ASFV 檢測(cè)方法有紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)、熒光抗體試驗(yàn)、聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction,PCR）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）、等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（CPE/RPA/LAMP）、夾心ELISA 以及膠體金試紙條等。其中熒光定量PCR 為世界衛(wèi)生組織（OIE）推薦的ASFV 檢測(cè)方法，其靈敏度高、污染率低[6]，對(duì)于特急性、急性或亞急性ASF 感染病例，qPCR 為首選的檢測(cè)技術(shù)，而夾心ELISA 和膠體金試紙條只有在出現(xiàn)癥狀時(shí)才能夠檢測(cè)出。Tignon 等[7]針對(duì)P72 基因建立的TapMan 熒光定量PCR 靈敏度達(dá)5.7～57 拷貝；哈登楚日亞等[8]基于B646L（P72）基因設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)熒光RPA 引物和探針最低可檢測(cè)10 個(gè)拷貝的DNA分子；崔貝貝等[9]基于E184L 基因建立的TapMan 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 的檢測(cè)下限為1.51 拷貝/μL 的重組質(zhì)粒，具有較強(qiáng)的特異性和較高的靈敏度。

微滴數(shù)字PCR（Droplet digital PCR, ddPCR）是近年來興起的一種新的絕對(duì)定量技術(shù)，通過極度稀釋實(shí)現(xiàn)理論上的單分子擴(kuò)增，然后用終點(diǎn)法PCR 和泊松分布計(jì)算出樣品的原始濃度[10-11]。與qPCR 相比，數(shù)字PCR 具有更高的靈敏度，且無需標(biāo)準(zhǔn)品，采用終點(diǎn)信號(hào)掃描計(jì)數(shù)，不依賴Ct 值，能有效克服PCR 抑制劑的影響，能靈敏地驗(yàn)出ASFV 病毒。鄔旭龍等[12]針對(duì)K205R 基因設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan 探針，建立的ASFV qPCR 和ddPCR 檢測(cè)方法線性關(guān)系較好（R2≥0.998），ddPCR的最低檢測(cè)限度可達(dá)到0.36 拷貝，檢測(cè)靈敏度是qPCR的10 倍，且具有很高的特異性和重復(fù)性。

在ASF 防控中要根據(jù)實(shí)際情況采用不同的監(jiān)測(cè)方案：如預(yù)防階段，實(shí)施監(jiān)測(cè)系統(tǒng)感染病毒測(cè)試，以血液和口腔組織為樣品，對(duì)豬群進(jìn)行隨機(jī)抽樣；發(fā)病階段，需要先分離，在采樣過程中要避免血液和組織樣品導(dǎo)致病毒蔓延；復(fù)養(yǎng)階段，用PCR 和ELISA 對(duì)哨兵豬及補(bǔ)欄豬進(jìn)行全面監(jiān)測(cè)。

3 非洲豬瘟防控的難點(diǎn)及重點(diǎn)

我國(guó)的非洲豬瘟防控取得了階段性勝利，但在這個(gè)過程中也發(fā)現(xiàn)了防控的難點(diǎn)：如中小養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）的豬群養(yǎng)殖密度過大、空氣污濁、營(yíng)養(yǎng)不合理等，其生物安全性較差；地方缺乏必要的檢測(cè)條件，出現(xiàn)疑似病例不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)、做出早期診斷；地方豬產(chǎn)品需求與生豬及生豬產(chǎn)品加工、運(yùn)輸調(diào)運(yùn)之間的矛盾；餐廚廢棄物等高風(fēng)險(xiǎn)飼料喂養(yǎng)監(jiān)管難等[13]。

在防控非洲豬瘟過程中要牢固守住核心種豬場(chǎng)、地方豬保種場(chǎng)、規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)以及生豬主產(chǎn)區(qū)，因?yàn)檫@些關(guān)系著我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)未來的發(fā)展和豬肉穩(wěn)定供應(yīng)的保障[13]。

4 防控措施

4.1 養(yǎng)殖場(chǎng)（戶） 做好自救

目前世界范圍內(nèi)尚沒有針對(duì)ASFV 的有效疫苗和特效藥，而且由于ASFV 自身的特殊性，開發(fā)特異性疫苗有一定難度，因此，當(dāng)前養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）除了提高自身生物安全水平保護(hù)易感豬群別無他法。養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）建場(chǎng)可遵循“堡壘化”建設(shè)，外部設(shè)置有形或無形的隔離帶，遵循單向流動(dòng)，內(nèi)部實(shí)行適度規(guī)模養(yǎng)殖，嚴(yán)格實(shí)施封閉管理，減少外來車輛及人員進(jìn)入，進(jìn)出車輛嚴(yán)格執(zhí)行清洗消毒[14]，常用的消毒劑有1%苛性鈉、過硫酸氫鉀類、3%鄰苯基苯酚和碘化合物等[15]；規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)堅(jiān)持“自繁自養(yǎng)”原則，如必須引種，需嚴(yán)格檢測(cè)，確認(rèn)為ASF陰性方可引入；嚴(yán)禁使用泔水喂豬，新進(jìn)飼料盡量放置4 周以上再行使用，必要時(shí)可以參照國(guó)家規(guī)定在飼料中添加清熱解毒、益氣涼血類中藥（如肉桂酸等）進(jìn)行預(yù)防。

4.2 屠宰廠嚴(yán)把生豬進(jìn)出

屠宰廠需明確屠宰經(jīng)營(yíng)者作為防控非洲豬瘟的主體負(fù)責(zé)人，不斷提高自身的依法經(jīng)營(yíng)意識(shí)和對(duì)疫病判斷的能力[16]。屠宰廠遵循就近就地收購生豬原則，嚴(yán)禁從疫區(qū)或隔離區(qū)調(diào)入生豬，加強(qiáng)進(jìn)場(chǎng)生豬的查證與檢測(cè)，做好屠宰與檢疫工作同步，落實(shí)自檢制度，生豬產(chǎn)品憑“兩章兩證”出廠。做好嚴(yán)格消毒，嚴(yán)格管理好豬血，做好生豬來源和產(chǎn)品、豬血等副產(chǎn)品去向相關(guān)記錄。必要時(shí)可設(shè)置臨時(shí)快速檢測(cè)點(diǎn)，對(duì)疑似病豬進(jìn)行快速檢驗(yàn)，避免發(fā)生疾病蔓延。

4.3 飼料廠做好風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

非洲豬瘟靠接觸傳播，若飼料被活病毒污染，入口或鼻后，可以感染豬群。飼料廠要做好原料控制，采購原料必須經(jīng)過檢驗(yàn)排除原料污染，必要時(shí)采取高溫制粒（實(shí)驗(yàn)表明85℃3 min 就可），或者選購的原料在儲(chǔ)藏室放置月余降低污染概率，必要時(shí)可添加一些中藥添加劑以提高豬群的免疫力。

4.4 政府部門嚴(yán)格防控非洲豬瘟

各省市的政府應(yīng)該嚴(yán)守生豬及生豬產(chǎn)品調(diào)運(yùn)關(guān)卡，加強(qiáng)區(qū)域化和進(jìn)出境管理，加強(qiáng)產(chǎn)地檢疫和運(yùn)輸檢疫，支持開展無疫區(qū)建設(shè)。調(diào)用官方獸醫(yī)，通過臨床觀察并借助實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)技術(shù)對(duì)調(diào)運(yùn)前、調(diào)運(yùn)中和調(diào)運(yùn)后的生豬及豬產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)出關(guān)卡必須證件齊全，防止疫情擴(kuò)散；鼓勵(lì)企業(yè)從調(diào)運(yùn)生豬向調(diào)運(yùn)豬肉制品等轉(zhuǎn)變，降低運(yùn)輸過程豬只感染非洲豬瘟病毒的風(fēng)險(xiǎn)，激勵(lì)企業(yè)借鑒歐美等先進(jìn)的技術(shù)研發(fā)新型運(yùn)豬設(shè)備，研發(fā)全封閉實(shí)時(shí)定位設(shè)備，做到豬只運(yùn)輸過程中的全程監(jiān)督[13]。

4.5 謹(jǐn)慎恢復(fù)養(yǎng)殖

發(fā)生非洲豬瘟疫情的養(yǎng)豬場(chǎng)，在完成撲殺、清潔、徹底消毒后，至少空圈40 d 以上；同時(shí)，在復(fù)養(yǎng)前要仔細(xì)規(guī)劃養(yǎng)殖方式，在正式復(fù)養(yǎng)前需在整個(gè)豬舍中先引進(jìn)檢驗(yàn)呈陰性的哨兵豬，對(duì)哨兵豬飼養(yǎng)45 d 后全部進(jìn)行采樣檢測(cè)，在沒有出現(xiàn)陽性的條件下才能正式恢復(fù)養(yǎng)殖。

5 小結(jié)

非洲豬瘟給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)帶來重大損失，且我國(guó)已出現(xiàn)野豬感染非洲豬瘟的案例，這就意味著我國(guó)可能成為非洲豬瘟的自然疫源地，野豬感染呈現(xiàn)分布相對(duì)分散、活動(dòng)范圍難以控制的特點(diǎn)，導(dǎo)致疫情擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)高、防控難度大，根據(jù)我國(guó)國(guó)情和國(guó)外的經(jīng)驗(yàn)，非洲豬瘟的根除將是一場(chǎng)持久戰(zhàn)。養(yǎng)豬企業(yè)要在防控過程中不斷總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，吸收國(guó)外先進(jìn)防控技術(shù)，提升豬場(chǎng)生物安全水平，合理選擇豬場(chǎng)消毒方案，加大生豬及生豬產(chǎn)品監(jiān)管力度，設(shè)計(jì)安全的生豬調(diào)運(yùn)車輛，妥善處理豬的尸體與污染物等，全面遏制疫情進(jìn)一步擴(kuò)散。在防控過程中也要發(fā)揮我國(guó)特有優(yōu)勢(shì)，即可以借助我國(guó)特有的中獸醫(yī)平臺(tái)進(jìn)行進(jìn)一步研究，開發(fā)抑制ASFV 的中獸藥添加劑。