大腸菌群測試菌片在細(xì)菌性食物中毒快速檢測中的作用

蔡 軍

（法庫縣衛(wèi)生健康服務(wù)與行政執(zhí)法中心檢驗(yàn)科，遼寧 沈陽 110400）

大腸埃希菌是一種在日常生活、生產(chǎn)中比較常見的致病菌，需要指出的是，如果機(jī)體出現(xiàn)腸屏障方面的嚴(yán)重功能損傷，或是受多因素影響，其抵抗能力逐漸衰減或受到抑制，那么在此作用與驅(qū)動(dòng)下，容易出現(xiàn)菌群移位狀況，最終引發(fā)嚴(yán)重且多樣性感染。一般來講，最常出現(xiàn)的疾病有腸道感染、切口感染等[1]。針對平皿培養(yǎng)法而言，其乃是用于鑒定細(xì)菌的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但需要指出的是，此方法無能開展快速檢測，而且檢測時(shí)間也比較長，尤其是在外部環(huán)境中，此方法無法應(yīng)用[2]。而針對測試片檢測技術(shù)來講，其檢測速度比較快，操作也比較簡便，無論是在食源性細(xì)菌性食物中毒污染檢測中，還是在評估食品安全中，均有著較高的應(yīng)用價(jià)值。本文針對細(xì)菌性食物中毒樣本，采用大腸菌群測試菌片進(jìn)行快速檢測，探討其作用與價(jià)值，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 試驗(yàn)樣本：選用由3M有限公司生產(chǎn)的大腸菌群測試片；大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)株；大腸埃希菌菌株（來自本院實(shí)驗(yàn)室）。在2017年1月～8月這一階段內(nèi)，選取所收集到的疑似存在細(xì)菌感染的食具、食物樣品，共計(jì)170份，其中，62份食具，其余108份均為食物。

1.2 方法

1.2.1 最低檢出限試驗(yàn)：用大腸埃希測試菌片法，取新鮮大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)株，過夜培養(yǎng)，刮取其純菌苔；將其置入生理鹽水當(dāng)中，制備菌懸液（0.5麥?zhǔn)蠁挝唬⑦M(jìn)行稀釋（10倍梯度），使之達(dá)到10-8稀釋度，取各稀釋度菌懸液（10-6、10-7、10-8），均1 mL，用測試片法、平皿計(jì)數(shù)法開展相關(guān)試驗(yàn)，并進(jìn)行比較，對最低檢出限進(jìn)行判斷。

1.2.2 處理樣本：對那些可能是細(xì)菌性食物中毒的樣本，依據(jù)《食品安全事故流行病學(xué)調(diào)查技術(shù)指南》（2016年）、《食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)》當(dāng)中所推薦的樣本采集方法[3]，對食具、食品涂抹拭子，然后實(shí)施開展無菌處理；標(biāo)本溫度控制在2～8 ℃，在此溫度下，于2 h內(nèi)送到指定的實(shí)驗(yàn)室，開展相關(guān)預(yù)處理；最后利用PBS緩沖液，將標(biāo)本制備成懸液，置入冰箱中（-80 ℃），待用。

1.2.3 應(yīng)用大腸埃希測試菌片法：取樣本25 g，將其置入生理鹽水當(dāng)中（225 mL），制備成稀釋液（1∶10），分別取2種稀釋液（10-2、10-3）接種2個(gè)平皿，并采用VRBA瓊脂進(jìn)行澆注，于36 ℃溫度下，持續(xù)培養(yǎng)18～24 h，然后開始計(jì)數(shù)。取菌落抑制BGLB肉湯（共計(jì)10個(gè)類型），在36 ℃環(huán)境中，持續(xù)培養(yǎng)48 h，將其中的陽性桿菌予以排除，并將樣本中的大腸菌群數(shù)給計(jì)算出來。與此同時(shí)，在測試片上，接種稀釋液10-3、10-2，各稀釋度分別做2個(gè)平行，在36 ℃環(huán)境下持續(xù)培養(yǎng)24 h，從中將平行測試片菌落數(shù)給計(jì)算出來，并計(jì)算出平均值，然后放置到指定的營養(yǎng)瓊脂平板上，常規(guī)革蘭染色，染色完成后，便可鏡檢操作，最后，自動(dòng)分析儀予以鑒定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS23.0，對文中計(jì)量、數(shù)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，分別由（）、百分率表示，t、χ2檢驗(yàn)；若經(jīng)比較，存在顯著差異，則由P＜0.05表示。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測方法的最低檢出限對比：在10-7稀釋度下，平皿計(jì)數(shù)法的最低檢出限為（45.0±3.4）cfu/m，而在10-7稀釋度下，則為（11.0±2.2）cfu/m，在10-8稀釋度下下，即（1.0±0.7）cfu/m；而測試片法分別為（42.4±2.6）cfu/m、（9.5±1.5）cfu/m、（1.0±0.5）cfu/m，當(dāng)稀釋度位于10-6、10-7時(shí)，采用測試片法所能得到的最低檢出限，較之傳統(tǒng)的平皿計(jì)數(shù)法，偏低（P＜0.05）。

2.2 大腸埃希測試菌片法的應(yīng)用效果：在所選取的這170份樣本中，用平板計(jì)數(shù)法共檢出101份大腸菌群陽性標(biāo)本，陰性69份。而大腸埃希測試菌片法的敏感性99.01%（100/101），特異性88.41%（61/69），符合率94.71%（161/170）。

3 討 論

針對測試片法來講，其相比于其他方法，有著比較強(qiáng)且突出的特異性，對于其他細(xì)菌而言，試劑在具體的抑制效果上比較突出，除此之外，還不顯色；特別是比較常見的大腸菌群，其下限值比較低，即1 cfu/mL[4]，即便時(shí)不含細(xì)菌的體液，同樣能夠檢出陽性，究其原因，可能與未感染的樣本、實(shí)驗(yàn)室污染等因素相關(guān)[5]。基于檢出效率來分析，從中得知，采用測試片法，其敏感性為99.01%，特異性為88.41%，而其符合率也達(dá)到了94.71%，均＞85%，有著比較高的水平，針對其中的誤診情況而言，可能與菌液濃度差異以及標(biāo)本不合格等因素相關(guān)。現(xiàn)階段，針對測試片法來講，其除了用于糞便污染指示的檢測，而且還能根據(jù)實(shí)際需要，圍繞菌群失調(diào)狀態(tài)，對其開展全面、深層次分析，此外，還能以腸道生態(tài)環(huán)境為對象，對其進(jìn)行有目的性的識別與判斷[6]。測試片除了由比較快的測試速度外，還能省去許多工作，比如殺菌消毒、培養(yǎng)基等，這對于提高樣品檢驗(yàn)質(zhì)量與效率，縮短診斷時(shí)間，縮減檢驗(yàn)前的停留時(shí)間等，均有著積極意義，能夠?yàn)榕R床治療，提供依據(jù)與數(shù)據(jù)支撐。

還需強(qiáng)調(diào)的是，針對測試片法而言，其能夠規(guī)避因污染所引起的檢驗(yàn)差錯(cuò)情況，有著比較高的價(jià)值。但是，對于所選用的測試片而言，引起制造廠商比較多，其質(zhì)量存在一定的差異，這可能會(huì)對檢驗(yàn)效率、精度造成影響，因此，在選購時(shí)，可選擇那些質(zhì)量過硬的測試片。綜上所述，在細(xì)菌檢測過程中，測試片法有著較低的檢出限度，而且在診斷效率上也近于平板計(jì)數(shù)法，因而適用于食源性疾病病原菌的檢測與分析。