藥物檢驗分析中應用超高效液相色譜法的研究

張愛芳

（濱州市濱城區市場監督管理局，山東 濱州 256600）

超高效液相色譜法是一種高速有效的分析分離技術，在藥物檢驗分析領域中的應用十分廣泛。為了進一步分析超高效液相色譜法在藥物檢驗分析中的應用價值及優勢，本研究選取藥物三七傷藥片作為研究對象，分別應用超高效液相色譜法和高效液相色譜法進行檢測，將兩種方法的平均分析時間和徹底分離率進行對比。現具體報道如下。

1 儀器與方法

1.1 儀器：超高效液相色譜儀；液相色譜儀；三七傷藥片（西安阿房宮藥業股份有限公司；國藥準字Z61021267）48片。

1.2 方法：將三七傷藥片48片平均分層均等的2份，其中1份采用超高效液相色譜法檢驗，另外1分采用高效液相色譜法檢驗。超高效液相色譜法：將藥片研磨至粉末狀，對粉末加流動溶解，經稀釋和濾過后吸收20 μL稀釋液注入超高效液相色譜儀，觀察并記錄色譜圖。高效液相色譜法：將藥片研磨至粉末狀，藥粉置入50 mL量瓶中加流動溶解，經稀釋和濾過后，放入200～400 nm紫外線中掃描，末端吸收210 nm，檢測波長，吸取20 μL稀釋液注入液相色譜儀，觀察并記錄色譜圖。

2 指標與數據處理

2.1 觀察指標：分析超高效液相色譜法和高效液相色譜法不同方法下的藥物檢驗分析時間和徹底分離率。

2.2 數據處理：所有研究數據帶入SPSS 20.0進行統計學分析，計量資料的比較進行t檢驗，計數資料的比較進行對比χ2檢驗，以P＜0.05表示有統計學意義。

3 結 果

采用超高效液相色譜法的藥片平均分析時間為（2.41±0.22）min，采用超高效液相色譜法的藥片平均分析時間為（15.25±2.65）min，兩組對比差異顯著，t=8.4471，P＜0.05；采用超高效液相色譜法的徹底分離率為100%（24/24），采用高效液相色譜法的徹底分離率為79.17%（19/24），兩組對比差異顯著，χ2=7.3419，P＜0.05。

4 討 論

4.1 超高效液相色譜法的發展及優勢：液相色譜是現代色譜技術中應用最廣泛、最活躍的分析方法之一，廣泛用于環境、生化、食品、農業、藥物等多個領域的分析。伴隨工業進展與科技進步，各個領域對液相色譜的要求不斷提高，大批量樣品分析要求在短時間內完成，一些生化樣品、天然產物的分析對液相色譜技術的分離能力提出了更高的要求，與其他技術聯用對檢測器提出了更高的要求。在這種情況下，基于小顆粒填料的液相色譜技術——超高液相色譜應運而生。超高效液相色譜法是一種新型的高效液相色譜技術，伴隨這一技術的研發成功與廣泛應用，液相色譜技術的分離能力得到了快速提高，色譜分析技術也隨之進入了一個新領域。因超高效液相色譜法具有樣品組分易吸收、樣品處理簡便、檢測自動化、檢測靈敏度高、藥物分離效率高等優勢，常用于藥物質量檢驗、微量藥物檢驗、藥劑樣品檢驗、藥品成分識別等[1]。超高效液相色譜法的原理在于采用超高壓和亞2 μm小顆粒填料技術，提高了色譜柱的性能、分離檢測速度和靈敏度，縮短了樣品分析的時間[2]。

超高效液相色譜法的理論基礎為范德米特方程，HETP=AdP+B/v+CdP2v，其中HETP代表理論塔板高度，AdP 代表渦流擴散體系×填料粒徑，B/v代表分子鏡像擴散系數÷流動相線速度，CdP2v代表傳質因子×填料粒徑×2×流動相線速度。根據范德米特方程可知顆粒度越小，柱效越高，檢測速度越快。在理論上超高效液相色譜法與高效液相色譜法的原理基本相同，但與高效液相色譜法相比，超高效液相色譜法增加了分析通量、色譜峰容量、靈敏度，彌補了高效液相色譜法的不足，在檢測靈敏度、分析速度、分離度等方面具有更明顯的優勢。在適應環境方面，超高效液相色譜法對環境的適應力更佳，高壓、高速環境下，能夠高效完成樣品分離，且樣品分離質量較好。在靈敏度方面，超高效液相色譜法采用的微粒，能夠減小顆粒度粒徑和微粒色譜峰，縮短樣品化合物離子化、樣品基質雜志分離時間，提高檢測的靈敏度[3]。在分析速度方面，超高效液相色譜法采用的微粒使色譜柱長明顯縮短，在柱效保持不變的情況下，藥物分析速度大大提升分析，縮短了藥物分析的時間，提高了藥物分析的效率[4]。

4.2 超高效液相色譜法在藥物檢驗分析中的應用：在藥物檢驗分析中，有時樣品含量較少，進行分離難度較大，花費時間較長。迫切需要一種分析速度快、分離效率高的技術。超高效液相色譜法能夠滿足這一要求，并具有高靈敏度、高精確度的特點，故在藥物檢驗分析中獲得十分廣泛的應用。因為超高效液相色譜法分辨率高、重復性好、檢測速度快、自動化程度高等優勢，在檢測藥品含量中，應用超高效液相色譜法檢測抽檢樣品，能夠有效規避假冒偽劣藥品等不法行為，進一步保障用藥安全。在常規藥物分析中，超高效液相色譜法的最終分析結果可以達到美國食品和藥品管理局在精度、準確度方面的要求。大量臨床研究實踐表明，超高效液相色譜法與高效液相色譜法相比具有更高的分離能力，而且解決了藥物檢驗分析領域在速度與分離度之間進行取舍的難點。使用超高效液相色譜法能夠在很快的線速度、流速、反壓下進行高效分離，并且能夠獲得優異的結果。超高效液相色譜法可用于原料藥、中間體、成藥中各組分與各雜質的含量檢測，并且快速、準確、可靠。近年來在《中國藥典》中采用超高效液相色譜法檢測的項目逐漸增多，可以預見未來超高效液相色譜法會獲得更快速的發展，逐步成為藥物含量測定的主流分析方法。

在藥品質量標準的制定中，檢查“有關物質”是重要的項目之一。因藥品在生產過程中的各環節均會產生一些相關物質，存在雜質會影響藥品的安全性，故藥品檢驗中需要對藥品“有關物質”含量進行控制。藥品生產各環節中產生的雜質含量普遍微小，甚至可以忽略不計，采用薄層色譜法等常規方法很難準確且靈敏的檢測到“有關物質”，通過超高效液相色譜法具有快速、準確、便捷、靈敏度高等優勢，能夠同時準確檢測中多種雜質，成為檢測藥品“有關物質”的新型方法。在藥物鑒別中，保留時間與組分結構、性質存在較大關聯，能夠作為定性參數之一。將供品、對照品的保留時間、相對保留時間的一致性進行對比，鑒別藥物可有效排除因輔料干擾而得出的不合理結論，且重復性較好，為完善、開發藥物鑒別的方法提供了一種新思路。

盡管超高效液相色譜法能夠顯著減少復雜樣品分析分離時間，提高分離度和檢測靈敏度，但超高效液相色譜法在藥物檢驗分析中的應用仍存在一定局限性，大范圍的應用普及仍然需要一些時間。超高效液相色譜法是應亞2 μm小顆粒填料技術需求專門設計的耐高壓液相色譜系統，使用小粒徑填料的色譜柱能夠最大限度的發揮超高效液相色譜法高靈敏度、高分離度的優勢，但要求色譜柱能夠耐受小粒徑帶來的高反壓，粒徑減少對色譜柱的充填技術提出了更高的要求，超高效液相色譜儀開發商也只能提供有限型號的色譜柱。目前各大企業已經在努力開發小粒徑填料色譜柱，相信隨著色譜填料技術的不斷發展，會有更多的色譜柱能夠發揮小粒徑填料的優勢，超高效液相色譜法色譜柱型號缺乏問題會得到有效克服。有研究表明，超高效液相色譜法在進行樣品分析時的峰面積重復性較高效液相色譜法差，在低濃度樣品分析時這種情況更為明顯。有研究表明應用超高效液相色譜法檢測低濃度樣品時，其精密度和準確度均較差。這種情況可能與檢測儀器探測頻率較低有關。伴隨超高效液相色譜法的開發和應用，相信超高效液相色譜儀也會得到進一步發展。

但超高效液相色譜法作為一種新型液相色譜技術，延伸了液相色譜的應用范圍，以超強的分離能力、分析速度、高靈敏度、簡單方便的操作為現代色譜分析開創了更廣闊的應用前景。超高效液相色譜法進樣體體積小、分離速度快、溶劑消耗少，為藥物化學成分分析、藥物合成分析、中藥定性定量分析、藥物體內代謝產物分析等提供了更為高效、準確的分析技術。利用超高效液相色譜法的高分離效率、高靈敏度和定性功能，能夠快速完成許多復雜成分的分離、鑒定。本研究采用超高效液相色譜法和高效液相色譜法進行藥物檢驗分析，研究結果提示采用超高效液相色譜法的藥片平均分析時間與徹底分離率明顯高于高效液相色譜法P＜0.05，具有統計學意義。證實了超高效液相色譜法在分離速度和徹底分離率方面的優越性。

綜上所述，超高效液相色譜法是一種較為常用、應用廣泛的藥物檢驗分析方法，與常規藥物檢驗分析方法相比較，超高效液相色譜法在靈敏度、速度等方面具有明顯優勢，而且能夠適應更好復雜的環境，在高壓、高速環境下，也能進行有效的藥物檢驗分析。超高效液相色譜法能夠更好適應藥物檢驗分析測量高效率的要求，適用于現代藥物檢驗分析。