母豬初乳中豬圓環病毒3型的檢測與分析

黃二素，梁海英，曾智勇*(編譯)

（貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025）

豬圓環病毒3型(PCV3)是一種近年來被廣泛報道的新型豬圓環病毒。盡管PCV3的發病機制尚不清楚，但已有文獻報道表明，在臨床上表現為母豬繁殖障礙，如流產、木乃伊胎、死胎，心肌炎，在豬皮炎腎病綜合征(PDNS)，呼吸道疾病及神經系統疾病等病癥的豬體內均可檢測到PCV3。同樣，PCV3在健康豬群中也能被檢測到。此外，在不同年齡段的豬體內也能檢測到PCV3。然而，PCV3在感染豬群中的傳播方式尚未明了。通常而言，病毒的垂直傳播是病毒在豬群中持續存在和傳播的關鍵因素。有研究表明，PCV2經初乳傳播在哺乳仔豬的垂直感染中起著重要作用，隨后通過水平傳播使得PCV2在斷奶仔豬中傳播。PCV3是否亦可通過初乳垂直傳播尚未見報道。Kedkovid R等首次對泰國已感染PCV3的母豬群的初乳進行PCV3的檢測鑒定，并就血清及初乳中PCV3滴度的關系進行了探討。

Kedkovid R等于2017年經批準（批準協議號：1731064），在泰國拉查布里省某農場采集38頭1～6胎次母豬的血清和初乳(分娩后6h內)樣本，初乳樣本使用前經900 g離心10 min去除脂肪層后，分別取150 μL初乳和血清樣品使用NucleoSpin病毒RNA核酸提取試劑盒提取病毒核酸，并運用Wang等建立的基于TaqMan的 qPCR檢測方法對血清和初乳樣品進行PCV3檢測；使用Palinski等先前公布的PCR測定法將PCV3陽性DNA片段（601～1 626 nt）進行108～101的系列稀釋制作標準曲線，該DNA片段也用作qPCR測定的靈敏對照。隨即使用儀器的內部軟件完成目標DNA的拷貝數計算，測定的檢測限為4 log基因組拷貝/mL；為了確認初乳樣品中PCV3的存在，隨機選擇高PCV3滴度的初乳樣品，再進行靶向PCV3部分ORF2區域(1～363 nt)的PCR檢測，將PCR產物送至First BASE Laboratories Sdn Bhd(馬來西亞)測序，并對獲得的基因組序列應用BioEdit 7.0.9.0進行序列分析；使用GraphPad Prism 5對獲得的PCV3數據進行統計學分析。

本次實驗結果表明，血清和初乳樣本中PCV3檢出率分別為47.37%和44.74%，初產母豬初乳中PCV3檢出率最高約為71%，經產母豬初乳中PCV3檢出率為33%～43%。陽性動物血清和初乳中PCV3病毒滴度分別為5.06±0.44(n=18)和5.02±1.08(n=17)的對數基因組拷貝數/mL，其差別不明顯。根據血清中的病毒滴度將母豬分為3組，高病毒血癥母豬(9頭)、低病毒血癥母豬(9頭)和非病毒血癥母豬(20頭)，其中高病毒性母豬初乳樣品中PCV3的滴度(100%)顯著高于其他兩組，所以推測部分初乳中PCV3會受到病毒血癥的影響。盡管血清和初乳中PCV3的檢出率不同，但血清與初乳中PCV3的滴度呈正相關(相關系數0.49%)。根據母豬的繁殖參數(TB、BA、SB、MF)發現，母豬PCV3病毒血癥的強弱和初乳中病毒含量的高低均未導致母豬生產性能發生明顯的不同。將PCV3的部分ORF2序列與此前報道的泰國PCV3、PCV2(GenBank登錄號：AF027217) 和PCV1（GU799575)進行比對，同源性分別為97.80%、54.41%和52.92%。 遺傳系統進化樹分析表明，其與先前報道的PCV3a處于同一進化分支，所以確定該PCV3屬于PCV3a，并將其命名為PCV3/Thailand/RB01/17株（MH158731）。

Kedkovid R等研究發現該豬場母豬初乳中PCV3滴度與Dvorak 等研究的初乳中PCV2滴度差別不明顯；但與高病毒血癥母豬群相比，往往在低病毒血癥母豬群的血清和初乳中PCV3的陽性率更高。此外，有研究表明與經產母豬相比，初產母豬的仔豬PCV2和PRRSV雙重感染的風險更高。此次實驗雖從初乳樣本和19日齡仔豬中檢測到了PCV3，但是目前還未觀察到初乳中PCV3對母豬產生的臨床影響，推測可能與研究中使用的母豬數量不足以檢測到小的或不常見的影響有關。同時，該研究利用宏觀基因方法也檢測到了豬星狀病毒4型和肝炎病毒，因此尚不能確定PCV3是患病豬的主要病原體。

據相關研究報道，PCV2母源抗體的存在雖不能避免仔豬感染PCV2，但可使仔豬避免發生豬圓環病毒相關疾病（PCVAD），即推測初乳中也可能存在PCV3抗體。Kedkovid R等研究證明了PCV3與豬的呼吸道疾病復合體(PRDC)有關。有報道PCV3的感染最早發生在5周齡，并且本實驗中患病豬有亞臨床的感染，所以仔豬哺乳期感染PCV3對今后的生長發育可能會有影響。相關研究報道證明PCV3與其他病毒(尤其是PCV2)存在共同感染，但該實驗中并未檢測到PCV2，推測可能與該農場接種PCV2疫苗有關。目前尚不清楚患病動物與其他病原體共同感染是否會對初乳中PCV3產生影響。為了進一步了解母乳中PCV3對母豬和仔豬產生的影響，后續將開展更多關于初乳中PCV3病原檢測的深入性研究，為后期對母豬的有效管理和PCV3控制奠定基礎。