IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α在子宮內膜異位癥診斷中的臨床價值

朱定軍 葉梅

子宮內膜異位癥是一種常見的慢性婦科疾病，是指子宮內膜活性細胞和組織出現在子宮內膜以外的部位，引發痛經、慢性盆腔痛、月經異常、異位結節以及不孕等臨床癥狀[1]。子宮內膜異位癥病因尚未完全闡述清楚，近期研究表明腹腔內炎性環境和免疫異常與子宮異位內膜過度生長密切相關[2-3]。本研究通過檢測兩組患者血清以及腹腔液中炎性因子的表達水平，分析免疫因子表達水平差異以及與子宮內膜異位癥分期之間的關系，探討其在子宮內膜異位癥診斷以及分期判斷中的臨床價值。

對象與方法

1.研究對象 2015年1月—2016年1月期間本院收治子宮內膜異位癥患者110例，年齡(31.4±4.5)歲，根據美國生育學會的修正子宮內膜異位癥分期法(r-AFS)分為I期24例、II期27例、III期31例、IV期28例。同期本院收治的110例非子宮內膜異位癥患者作為對照組，年齡(32.5±3.7)歲，排除內分泌、肝腎、自身免疫以及代謝疾病。所有納入研究標本經醫院倫理委員會批準并取得患者知情同意。

2.方法 (1) 標本采集與處理：抽取兩組患者空腹外周靜脈血5 ml，經抗凝處理后3000 r/min離心10 min取上清液存儲于-80 ℃冰箱待測。腹腔鏡檢查時吸取子宮直腸陷凹內的腹腔液5ml，3000 r/min離心10 min，取上清液存儲于-80℃冰箱待測。(2) 標本檢測：按照人IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α酶聯免疫吸附測定試劑盒(ELISA,美國R&D公司) 說明書進行操作，在預先包被人IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α捕獲抗體的微孔中，依次加入待測標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育洗滌后顯色。然后用酶標儀在450 nm 波長下測定各微孔吸光度(OD 值)，根據標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制標準曲線，計算待測標本濃度。(3) 檢測結果陽性判定：判斷特異性和敏感性高低的標準是根據相應對照組中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α單側95%參考值范圍上限作為界點進行判斷，凡大于界點值判斷為陽性。計算各診斷指標敏感性特異性，計算公式為：特異性=真陰性例數/(真陰性例數+假陽性例數)×100%，敏感性=真陽性例數/(真陽性例數+假陰性例數)×100%。

結果

1.兩組患者血清和腹腔液IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α的表達情況

IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α在觀察組血清以及腹腔液中表達水平明顯高于對照組(P< 0.05),見表1和表2。

表1 兩組患者血清中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α的表達情況

*兩組比較，P<0.05

表2 兩組患者腹腔液中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α的表達情況

*兩組比較，P<0.05

2.血清和腹腔液中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α診斷子宮內膜異位癥的敏感性和特異性

對照組血清中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α單側95%參考值范圍上限分別為19.66 pg/ml、22.76 pg/ml、24.45 pg/ml、15.46 pg/ml，對照組腹腔液中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α單側95%參考值范圍上限分別為14.04 pg/ml、17.25 pg/ml、70.74 pg/ml、16.08 pg/ml分別計算出四種指標診斷子宮內膜異位癥的敏感性和特異性，結果顯示血清和腹腔液中MCP-1診斷子宮內膜異位癥的特異性和敏感性均較高，具有極高的臨床診斷參考價值，其次是TNF-α，血清中診斷子宮內膜異位癥特異性最低的是IL-8，敏感性最低的是IL-6，腹腔液中診斷子宮內膜異位癥特異性與敏感性最低的是IL-8。見表3和表4。

表3 血清中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α診斷子宮內膜異位癥的敏感性和特異性

表4 腹腔液中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α診斷子宮內膜異位癥的敏感性和特異性

3.子宮內膜異位癥分期與血清和腹腔液IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α的表達情況

III-IV期子宮內膜異位癥患者血清以及腹腔液中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α表達水平明顯高于I-II期子宮內膜異位癥患者(P< 0.05)，見表5和表6。

表5 子宮內膜異位癥分期與血清中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α的表達情況

*P<0.05

表6 子宮內膜異位癥分期與腹腔液中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α的表達情況

*P<0.05

討論

子宮內膜異位癥的發病機制目前尚不清楚。研究認為子宮內膜異位癥的發生及發展與免疫機制有著重要的聯系，患者由于免疫監視功能減弱，無法清除異位內膜，使得不斷增多的內膜碎片經黏附分子誘導在腹腔定植免疫系統，由監視、清除作用轉變成免疫促進作用，免疫調節功能失控，造成免疫細胞產生多種細胞因子和炎癥介質，這些分泌的因子影響自身和相鄰細胞，導致趨化增殖以及促分化，進一步促進異位內膜生長及增殖，使得病情加快發展[4-5]。

IL-6屬于標志性的炎癥細胞因子，主要分泌于巨噬細胞，子宮內膜異位癥患者也可以從異位內膜間質細胞中大量分泌，IL-6受體在異位內膜組織中與在位內膜組織相比顯著降低，因此異位內膜對IL-6介導的生長抑制具有免疫作用[6]。異位內膜組織的不斷增殖造成腹腔中的IL-6水平持續處在高位，使得患者內環境中的炎癥和免疫反應加劇。IL-8屬于促炎細胞因子，主要分泌于巨噬細胞和上皮細胞，其濃度的升高可對血管生成起到促進作用，而異位內膜則需要大量的新生血管，因此IL-8的濃度升高促進了異位內膜生長。IL-8在子宮內膜異位癥患者子宮內膜內具有高表達性，子宮內膜在反流進入腹腔的時候將IL-8同時帶入腹腔，而在慢性炎癥的刺激下促使免疫反應變得活躍，使得巨噬細胞進一步釋放出大量IL-8，IL-8同時能夠上調機體中金屬蛋白酶9表達，提高子宮內膜的間質黏附能力，具有濃度依賴關系[7]。TNF-α主要產生于淋巴細胞、巨噬細胞以及激活的單核細胞，屬于血管活性因子之一，是多種生物活性的細胞因子，對炎癥和免疫反應具有介導促進作用，能夠對卵泡分泌及發育等多個生殖過程起到調節作用[8]，另一方面TNF-α還參與到免疫病理損傷。在機體出現子宮內膜異位癥時，異位子宮內膜能夠刺激機體產生體液以及細胞免疫應答，增加腹腔液內巨噬細胞和外周血液內淋巴細胞的活化程度以及數量[9]。MCP-1可特異性的激活巨噬細胞和單核細胞，促進腹腔液巨噬細胞活化，導致局部免疫炎癥發生發展[10]。李萍[11]等人研究證實宮內膜異位癥患者腹腔液與異位的子宮內膜組織中MCP-1表達水平顯著高于對照組。Arici[12]等研究發現子宮內膜異位癥的病情嚴重程度與患者腹腔液內MCP-1濃度呈正相關性，子宮內膜異位癥患者所分泌的細胞因子對腹膜間皮細胞形成刺激，從而產生MCP-1，MCP-1進一步對異位內膜誘導及活化，形成正反饋級循環放大效應。申輝[13]等人研究發現子宮內膜異位癥患者的血清中IL-6、TNF-α和IgG水平升高，可能與炎性因子導致免疫性病理損傷等相關。周曉紅[14]等人研究結果表明，子宮內膜異位癥患者血清中IL-2、IL-6 以及 IL-10 水平明顯升高，并且隨著子宮內膜異位癥分期升高，IL-2、IL-6 及 IL-10水平顯著升高。本研究通過ELISA檢測發現IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α在觀察組血清以及腹腔液中表達水平明顯高于對照組(P<0.05)，且血清和腹腔液中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α診斷子宮內膜異位癥時均具有較高的敏感性和特異性。結果提示IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α在血清以及腹腔液中表達水平可能與子宮內膜異位癥發病機制具有一定的相關性。

r-AFS分期可反映子宮內膜異位癥患者的病情嚴重程度、病變范圍以及粘連程度，但其仍需結合腹腔鏡檢查或者剖腹探查進行確診，目前對于疾病嚴重程度與細胞因子之間的相關性的研究結論差異較大，不少研究[15-17]認為子宮內膜異位癥患者的分期進展與IL-6，CA125以及TNF-α濃度具有正相關性，而也有研究[18]結果表明子宮內膜異位癥患者I-II期與III-IV期血清和腹腔液中IL-6，CA125以及TNF-α濃度對比差異均無統計學意義(P>0.05)，本研究未對CA125水平進行對比，而是對比了不同分期患者血清和腹腔液中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α水平，結果表明III-IV期子宮內膜異位癥患者不論血清和腹腔液中IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α濃度均顯著高于I-II期患者，差異具有統計學意義(P<0.05)。筆者認為出現不同結果的原因可能是r-AFS分期評分沒有把病灶活性納入，缺乏疼痛指標，對患者生育需求評估有限，而且該評分主觀性較大，不同觀察者存在不同的評估標準，因此外周血清和腹腔液檢測四種炎性因子的表達情況對子宮內膜異位癥分期判斷還需要進一步加大樣本量證實。