中國傳統(tǒng)民族老鷹茶黃酮類成分研究進(jìn)展

秦昭，馮堃，王文蜀，2，3，*

（1.中央民族大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，北京100081；2.中央民族大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院化學(xué)實驗中心，北京100081；3.中央民族大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院轉(zhuǎn)化神經(jīng)科學(xué)中心，北京100081）

老鷹茶，別名老蔭（陰）茶、老茶和白茶，通常由毛豹皮樟（Litsea coreana Levl.var.lanuginosa）的幼嫩枝葉經(jīng)水潦、揉捻和干燥后制成，原產(chǎn)于貴州大婁山，是當(dāng)?shù)刎罾凶?、苗族、和土家族等民族的傳統(tǒng)茶飲[1]。毛豹皮樟是老鷹茶的主流優(yōu)選原料植物[1-2]，為樟科（Lauraceae）木姜子屬（Litsea）常綠喬木，其嫩枝、葉柄和嫩葉雙面均密被灰黃色長柔毛，通常生于海拔300 m～2 300 m的山谷雜木林中，僅在中國浙江、安徽、湖南、湖北、四川和貴州等省有分布。民族植物學(xué)研究表明，老鷹茶是我國特有的古茶種，始飲于貴州大婁山、赤水河流域等夏季高溫濕熱的地區(qū)，距今已有幾百年的飲用歷史[1]。相傳，貴州的少數(shù)民族居民通常將毛豹皮樟的嫩芽（葉）從沸水中撈起來后便陰干存放，當(dāng)有貴客來時才拿出來飲用，故稱“撈陰茶”，因發(fā)音相近，逐漸被稱為“老鷹茶”；也有傳聞?wù)f毛豹皮樟生長在崇山峻嶺之間，只有老鷹才能飛上枝頭，故而得名“老鷹茶”。

作為被《中國茶經(jīng)》收錄的特色茶種資源之一，老鷹茶有許多獨特之處，如茶湯呈琥珀色，夏季隔夜不餿，可連飲數(shù)日；其口感因含有大量可溶性糖而甘飴回甜[3]；其茶氣散發(fā)蘭麝之香，主要成分為芳香油，具有一定的體外抗氧化、抗菌、降血糖和抗癌作用[4]；其營養(yǎng)價值與綠茶相當(dāng)[5]，且不含咖啡因[5-6]，具有不影響睡眠的優(yōu)勢。據(jù)《本草綱目》記載，老鷹茶具有“止咳、祛痰、平喘、醒酒、解毒、消暑解渴、理氣健脾、和胃怡神”的功效，屬于藥食同源植物。據(jù)文獻(xiàn)調(diào)查[1，7]，當(dāng)前老鷹茶主要產(chǎn)自中國四川、重慶、貴州和安徽等地，其中川桂黔三地的許多農(nóng)民至今仍保留自制自飲老鷹茶的習(xí)慣。長期的飲用歷史和經(jīng)驗證明，老鷹茶是有益于人體健康的安全飲品[1]。隨著當(dāng)代慢性病人群的不斷擴(kuò)大和食品工業(yè)的迅速崛起，食品保健和食品安全問題成為開始越發(fā)受到人們重視，綠色保健食品和天然食品添加劑的研發(fā)已然成為熱點，老鷹茶的天然防餿特點和健康功效保證了其在食品工業(yè)內(nèi)的發(fā)展?jié)摿Α樽屛覈鴤鹘y(tǒng)茶飲得以傳承，讓老鷹茶在食品工業(yè)內(nèi)得到更深遠(yuǎn)地發(fā)展，為民族地區(qū)經(jīng)濟(jì)創(chuàng)造更多價值，本文對老鷹茶黃酮類成分的提取工藝、化合物結(jié)構(gòu)及主要生物活性進(jìn)行了綜述。

1 老鷹茶總黃酮的提取工藝

老鷹茶總黃酮（total flavonoids of L.coreana Levl.var.lanuginosa，TFLC）的傳統(tǒng)提取方式主要包括醇提取法和水提取法兩種。陸維麗等[8]研究發(fā)現(xiàn)，在TFLC的提取過程中，水提取-大孔樹脂法更優(yōu)于乙醇提取-正丁醇萃取法，該工藝化學(xué)污染小、操作簡單，所得固體產(chǎn)物中的黃酮含量高達(dá)55.85%，這也證明TFLC是老鷹茶的主要成分。隨著研究的深入，TFLC的提取技術(shù)在近年逐步得以優(yōu)化和創(chuàng)新（表1），2011年計紅芳等[9]確定了TFLC水浴提取工藝的最佳條件，并對TFLC常溫超高壓提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化[10]；同年，楊曉鳳[11]首次運用纖維素酶成功提取了TFLC，并得出最佳酶解條件；賈學(xué)靜等[12]隨后確定了微波輔助提取TFLC的最佳工藝條件。以上這些成果都為TFLC在食品工業(yè)中更深入的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供了技術(shù)支持和參考。

2 老鷹茶中的黃酮類化合物

TFLC通常采用聚酰胺柱色譜、硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜等柱層析法分離純化，所得黃酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)一般借助紫外-可見吸收光譜分析法（ultraviolet-visible spectroscopy，UV-Vis）、核磁共振波譜分析法（nuclear magnetic resonance spectroscopy，NMR）和質(zhì)譜分析法（mass spectrometry，MS）等波譜法及化學(xué)方法鑒定。從老鷹茶中已分離鑒定黃酮18種，其黃酮母核可分為山奈酚、槲皮素、兒茶素和松屬素四類（見圖 1），其中山奈酚（1）、山奈酚-3-0-β-D-葡萄糖苷（2）和槲皮素-3-0-β-D-葡萄糖苷（3）由郁建平等[13]在2001年首次從老鷹茶中得到；2008年，陳玉璞等[14]首次發(fā)現(xiàn)了老鷹茶中的槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷（4）和山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷（5）；隨后劉斌[15]從老鷹茶中中分離鑒定了槲皮素（6）、金絲桃苷（7）、紫云英苷（8）、槲皮苷（9）和異槲皮苷（10）等黃酮單體；2012年，張義龍等[16]從老鷹茶醇提物的正丁醇部分首次分離得到山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷（11）、山奈酚-3-O-β-D-（6-O-trans-p-香豆酰基）吡喃葡萄糖苷（12）和山奈酚-3-O-β-D-（6-O-trans-p-香豆酰基）吡喃甘露糖苷（13）；2014年，王靜等[17]又從相同萃取部位首次獲得兒茶素（14）、表兒茶素（15）、山奈酚-3-O-β-D-蕓香糖苷（16）、松屬素-7-O-β-D-葡萄糖苷（17）和香樹素-3-O-α-L-阿拉伯糖苷5種黃酮類化合物。

圖1 老鷹茶中主要的黃酮母核類型Fig.1 The main type of flavonoids in Hawk tea

3 老鷹茶黃酮的生物活性

3.1 抗氧化活性

TFLC具有顯著的抗氧化活性（anti-oxidant）。2004年，葉輝等[18]率先對老鷹茶黃酮類提取物的抗氧化活性進(jìn)行了報道，其發(fā)現(xiàn)化合物（1）、（2）、（3）具有明顯的抗氧化能力，其中化合物（1）活性相對最大。TFLC的抗氧化能力會受到提取方法的影響，Ji H.等[19]發(fā)現(xiàn)，相對傳統(tǒng)水浴法，采用超高壓提取法獲得的TFLC的抗氧化活性更高；Ji H.F.等[20]又相繼發(fā)現(xiàn)老鷹茶的乙酸乙酯提取物、水提取物及石油酯提取物的抗氧化活性均不如其甲醇提取物。TFLC的抗氧化能力還與茶葉成熟度有關(guān)，賈學(xué)靜等[12]運用微波輔助法對成熟葉老鷹茶的總黃酮進(jìn)行了提取，并用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除法和鐵離子還原/抗氧化能力法（ferric-reducing/antioxidant power，F(xiàn)RAP）測得TFLC具有良好的抗氧化活性，且在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈較佳的效量關(guān)系；而Yuan M.等[21]對比研究了不同成熟度老鷹茶茶葉的抗氧化能力后發(fā)現(xiàn)，嫩芽老鷹茶清除DPPH自由基和還原鐵原子的能力最佳，且能有效防止紅細(xì)胞溶血。另外，肖璇等[22]的研究成果表明TFLC的抗氧化能力與季節(jié)變化也存在一定關(guān)系，其發(fā)現(xiàn)3月份的老鷹茶醇提取物抗氧化活性最佳，故建議將3月作為老鷹茶的最佳收獲期。Tan H.L.等[2]采用多個測試方法綜合評價了TFLC的抗氧化活性，結(jié)果表明，TFLC具有理想的抗氧化活性，在DPPH自由基清除法、2，2'-聯(lián)氮雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）[2，2'-azino-bis（3-ethylbenzthiazoline）6-sulphonic acid，ABTS] 自由基清除法和羥基自由基清除能力測定法中，TFLC的半抑制濃度分別為0.059、1.094 mg/mL和2.415 mg/mL；在FRAP法中，TFLC的吸光度為0.684；在β-胡蘿卜素-亞油酸法中，TFLC的脂質(zhì)過氧化抑制率達(dá)65.5%。上述研究成果說明TFLC可作為開發(fā)安全性高、無副作用的天然抗氧化劑的新來源。

表1 TFLC的提取工藝及特點Table 1 Extraction methods of TFLC

3.2 抗紫外線作用

綠茶因含有豐富的茶多酚而具有較好的抗紫外線活性（anti-ultraviolet activity），是世界公認(rèn)的綠色美容飲品，也是許多“藥妝”的植物原料；而老鷹茶的多酚類含量雖不如綠茶，但其黃酮類含量卻明顯高于綠茶[5]。陳曉明等[23]以人皮膚纖維細(xì)胞為模型，對比研究了蒙山綠茶與老鷹茶的抗紫外線作用，結(jié)果表明老鷹茶提取液在較低濃度（1.25 mg/mL和2.5 mg/mL）時的防護(hù)作用明顯大于同一濃度綠茶提取液，而在較高濃度（5 mg/mL）時老鷹茶提取液防護(hù)作用與同濃度綠茶提取液相當(dāng)，其認(rèn)為這可能與TFLC有關(guān)。由此可知，老鷹茶不僅是具有紫外線防護(hù)功效的保健飲品，而且有望成為綠色添加劑的新原料。

3.3 抗炎免疫作用

安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院的陳琳等[24]于2004年首先發(fā)現(xiàn)TFLC具有較強的抗炎作用（anti-inflammatory activity），并說明其機(jī)制與抑制白細(xì)胞介素-1的生成有關(guān)。該院其他研究者還相繼發(fā)現(xiàn)TFLC能夠調(diào)節(jié)受試大鼠的免疫功能，對佐劑性關(guān)節(jié)炎[25-26]和膠原性關(guān)節(jié)炎[27]具有顯著療效，且對角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足腫脹有明顯的抑制作用[28]。這些數(shù)據(jù)為老鷹茶的免疫增強作用提供了一定證據(jù)，為其成為新的天然保健食品提供了依據(jù)。

3.4 保肝作用

非酒精性脂肪肝（aonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）的病程包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎和脂肪性肝纖維化，最后可能演變?yōu)橹拘愿斡不透伟43]。倪鴻昌等[29]在2006年確定了老鷹茶防治脂肪性肝炎的有效部位是黃酮；隨后王建青[30]的研究結(jié)果證實TFLC能夠通過抑制腫瘤壞死因子-α的生成對非酒精性脂肪性肝炎起到較佳的治療效果。同時，近年也有研究顯示TFLC能夠防治脂肪性肝纖維化。2010年，Huang C.等[31]發(fā)現(xiàn)TFLC可以阻止實驗性大鼠肝纖維化；同年孫玲[32]等又發(fā)現(xiàn)TFLC的抗肝纖維化作用可能與其能阻斷肝纖維細(xì)胞中的Smads信號傳導(dǎo)通路有關(guān)，隨后該成果也得到了黃成等[33]的進(jìn)一步研究和證實。

TFLC對過量飲酒引起的酒精性脂肪性肝（alco holicfatty liver，AFL）也有明顯效果。2007年王媛媛等[34]發(fā)現(xiàn)TFLC對AFL的防治作用可能與其具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和抗氧化活性的能力有關(guān)。隨后，呂雄文等[35]的報道顯示，TFLC對小鼠急性酒精性肝損傷具有一定保護(hù)作用。2013年胡成穆等[36]進(jìn)一步報道了TFLC在體外對AFL大鼠模型肝細(xì)胞脂肪變性的影響，發(fā)現(xiàn)TFLC可減少肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的沉積、抑制AFL大鼠肝細(xì)胞的脂肪變性。

此外，陳昭琳[37]發(fā)現(xiàn)老鷹茶中的槲皮素（6）能夠濃度依賴性地抑制人肝癌耐藥BEL/5-FU細(xì)胞中ABC轉(zhuǎn)運蛋白（MDR1/P-gp、MRP2）的表達(dá)，有作為多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑或輔助增敏藥的潛能。

上述研究肯定了TFLC的保肝功效，揭示出其作為保肝類保健食品開發(fā)和應(yīng)用價值。

3.5 降血糖作用

Li D.Q.等[38]發(fā)現(xiàn)TFLC對α-葡萄糖苷酶有明顯抑制作用，能夠防治糖尿?。╝nti-diabetic activity）。2012年，Lu Y.X.等[39]研究發(fā)現(xiàn)TFLC能夠改善2型糖尿病大鼠的高血糖癥狀，并可減緩其體內(nèi)氧化應(yīng)激和胰島素抵抗。這說明老鷹茶有望成為糖尿病患者的保健飲料。周衛(wèi)鳳等[40]的研究結(jié)果表明，TFLC能夠明顯抑制2型糖尿病實驗大鼠胰腺中關(guān)鍵負(fù)調(diào)節(jié)蛋白酪氨酸磷酸酶1B蛋白的表達(dá)，從而達(dá)到保護(hù)胰島和降低血糖的作用。

3.6 抗菌活性

TFLC 具有抗菌活性（anti-microbial activity），尤對真菌類表現(xiàn)出較強的滅活能力[41]，計紅芳等[42]的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)TFLC對供試的炭疽桿菌、變形桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草桿菌等菌種均有不同程度的抑制作用，且在一定濃度范圍呈劑量依賴性。上訴研究成果不僅從科學(xué)地層面解釋了老鷹茶隔夜不餿的原因，也說明TFLC有成為天然防腐劑和抗菌劑的潛力。

4 存在問題

當(dāng)前老鷹茶的茶源大多來自各個產(chǎn)地農(nóng)戶，大規(guī)模規(guī)范化生產(chǎn)商品較少，缺乏可靠的品質(zhì)鑒定方法。由于質(zhì)檢手段的缺乏，其市場價格混亂，售價從每公斤幾十元到幾百元不等[43]。因此，制定老鷹茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是深入廣泛開發(fā)一優(yōu)質(zhì)保健品資源的首要任務(wù)。黃酮是老鷹茶的主要活性部位，可根據(jù)其含量的多少建立相應(yīng)的老鷹茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，但現(xiàn)有研究多關(guān)注于其活性方面，因此具體運用哪一種或幾種黃酮化合物作為檢測其質(zhì)量的化學(xué)標(biāo)記物有待進(jìn)一步研究。

老鷹茶茶湯具有天然防腐防餿的特點，是一種理想的天然防腐劑和抗菌劑來源，但是目前有關(guān)TLFC抗菌活性的研究較少、且不夠深入，了解其對不同菌種的抗菌活性有利于其作為天然添加劑在食品等領(lǐng)域獲得更好地開發(fā)利用。

5 結(jié)論

現(xiàn)代研究顯示，黃酮是一類重要的保健食品基料[44]。植物中的黃酮具有多種生物活性，一直是國內(nèi)外生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點[45]。老鷹茶無毒副作用[46]，不含咖啡因[5-6]，含有豐富的黃酮類成分[8]，具有抗氧化[19]、抗紫外線[23]、抗炎免疫[26]、保肝[36]、降血糖[40]和抗菌[42]等功能，有望成為市場前景良好的綠色保健飲品；加深其黃酮抗菌活性的研究，有望使其成為食品等工業(yè)中無毒副作用的天然抗氧化劑、抗菌劑和防腐劑的植物原料，為民族地區(qū)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)地加速發(fā)展獻(xiàn)出力量。