紫錐菊的藥理藥效學(xué)、毒理學(xué)研究及其在犬臨床中的應(yīng)用現(xiàn)狀

馮言言，孔梅，鄭莉 ，魏秀麗，李龍飛，常雪，崔進，吳連勇*

(1.齊魯動物保健品有限公司，濟南 250100；2.山東省獸藥質(zhì)量檢驗所/山東省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測與風(fēng)險評估重點實驗室，濟南 250022)

隨著我國社會經(jīng)濟的發(fā)展，我國的寵物文化也相應(yīng)有了較大的提升，越來越多的寵物進入到人們的日常生活中，其中以寵物犬的飼養(yǎng)率最高，犬的健康問題也越來越引起人們的重視。寵物犬在飼養(yǎng)中遇到的常見病比較多，其中犬瘟熱和犬細小病毒病因傳染性強、發(fā)病率及死亡率高，已成為危害養(yǎng)犬業(yè)的主要傳染病。目前，對犬瘟熱和犬細小病毒病的治療尚無有效藥物，疫苗免疫對預(yù)防這兩種病取得了一定效果，但由于受疫苗自身、免疫程序、母源抗體及個體差異等多種因素的影響，造成免疫保護率低，免疫失敗而爆發(fā)疾病，為防止不必要的經(jīng)濟損失，有效的辦法就是使用增強機體抵抗力或增強疫苗效價的藥物，如免疫增強劑，來提高機體的免疫力以及增強疫苗效價。

紫錐菊作為一種天然植物中藥，是一種較好的免疫增強劑，具有安全、無毒的優(yōu)勢。紫錐菊除了具有增強機體免疫的作用外，還可以提高疫苗的免疫效果。紫錐菊與犬的主要傳染病疫苗(如犬瘟熱疫苗、犬細小病毒疫苗)聯(lián)合使用，能提高寵物免疫后的抗體效價，提高寵物的免疫力和抵抗力，減少寵物發(fā)病率。將紫錐菊擴大應(yīng)用到寵物犬，可填補國內(nèi)寵物臨床免疫增強劑產(chǎn)品稀缺的現(xiàn)狀，具有廣闊的應(yīng)用前景。

1 藥理活性

紫錐菊的主要活性成分為咖啡酸類衍生物、多糖及糖蛋白和烷基酰胺類化合物[1-2]。紫錐菊及其活性成分具有豐富的藥理活性，包括免疫調(diào)節(jié)活性、抗炎活性、抗菌、抗病毒活性以及抗氧化能力等[3-5]。

1.1 免疫調(diào)節(jié)活性 紫錐菊具有顯著的免疫調(diào)節(jié)能力，可增強機體的免疫功能(非特異性免疫和特異性免疫)，其免疫調(diào)節(jié)作用與增強巨噬細胞、淋巴細胞功能，刺激細胞因子和抗體的產(chǎn)生有密切關(guān)系。免疫調(diào)節(jié)活性是紫錐菊最重要的生物活性。

紫錐菊可促進免疫器官的生長和發(fā)育[3]。郝智慧等[6]報道日糧中紫錐菊提取物能夠明顯增加肉仔雞的平均日增重，降低料肉比，提高胸腺和法氏囊指數(shù)。馮善祥[7]報道紫錐菊可顯著提高雞腔上囊、胸腺和脾臟指數(shù)，促進免疫器官的發(fā)育，從而增強機體的特異性與非特異性免疫功能。

紫錐菊可調(diào)節(jié)免疫細胞的功能與增殖。紫錐菊可顯著提高肉雞自然殺傷細胞(NK細胞)的殺傷能力，可明顯刺激T淋巴細胞的增殖，并且對外周血單個細胞的增殖有促進作用[8]。紫錐菊提取物能夠明顯提高傳染性法氏囊病病毒疫苗免疫的羅斯308肉雛雞的外周血T淋巴細胞亞群CD/CD比值[9]。

紫錐菊可改善血液的免疫功能和生化指標(biāo)。紫錐菊不僅能夠提高小鼠血清免疫球蛋白水平并降低總膽固醇水平，而且可以提高肉雞的紅細胞RBC-C3bR花環(huán)率(紅細胞免疫功能)和白細胞介素-2與腫瘤壞死因子-α含量，還能夠改善血常規(guī)指標(biāo)[10]。另有研究報道紫錐菊能夠提高雞血漿中的總蛋白和白蛋白的含量，并且降低甘油三酯水平[11]。

紫錐菊可增強體液免疫。研究表明，紫錐菊可提高犬對犬瘟熱疫苗和犬細小病毒疫苗的免疫應(yīng)答，增強抗體效價[12-13]。能夠顯著提高肉雞外周血的IBDV與新城疫疫苗抗體滴度，能夠明顯增強NDV抗體效價[14]。紫錐菊可顯著提高豬瘟、豬呼吸繁殖障礙綜合征疫苗以及豬丹毒的抗體水平[15-17]。

1.2 抗炎活性 紫錐菊的根和地上部分含有多元不飽和異丁基酰胺，有免疫調(diào)節(jié)功能，可阻止病原體引起的炎癥，具有較強的抗炎活性。此外，紫錐菊的菊苣酸、多糖部分也都具免疫抗炎活性，菊苣酸能夠抑制透明質(zhì)酸酶，保護膠原蛋白Ⅲ免受可導(dǎo)致降解的自由基的影響[1]。

1.3 抗菌、抗病毒活性 紫錐菊中的菊苣酸和咖啡酸，對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌有顯著的抗菌作用。紫錐菊中的多糖可通過調(diào)動機體的免疫防御功能而發(fā)揮抑菌殺菌作用[18]。此外，紫錐菊可預(yù)防白色念珠菌引起的感染[4]。

紫錐菊莖葉及提取物表現(xiàn)出抗病毒活性，其作用機理與免疫刺激以及抗透明質(zhì)酸有關(guān)。紫錐菊對流感、孢疹病毒有一定的抑制作用，同時還能抑制透明質(zhì)酸酶的活性，從而阻斷細胞表面的病毒受體的結(jié)合[19]。

1.4 抗氧化能力 紫錐菊根部及其衍生物是一種很好的天然抗氧化物質(zhì)，且能用于防治由自由基誘導(dǎo)所致的危害。紫錐菊中的菊苣酸和多酚具有抗氧化和凈化體內(nèi)自由基的能力，可保護皮膚的膠原蛋白不受自由基的損害[5,20-21]。

2 安全藥理學(xué)

紫錐菊在治療范圍或治療范圍以上劑量時，對犬、貓、小鼠等動物的心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)不存在潛在的不希望出現(xiàn)的不良影響。

龐云露等[22]研究了紫錐菊對清醒比格犬心率、心電、血壓和呼吸的影響。研究結(jié)果顯示，口服0.125～1.25 g/kg紫錐菊對清醒比格犬心率有明顯降低作用，對心電圖P波、T波、R波、Q-T間期、QRS間期、P-R間期及血壓、呼吸均無顯著影響(P>0.05)，這表明，紫錐菊對犬的呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)均無顯著影響，在藥效劑量應(yīng)用時安全可靠。

張英濤等[23]研究報道，以相當(dāng)于生藥量5、10、20 g/kg的松果菊提取物經(jīng)十二指腸給予麻醉貓后，對貓的血壓、心電圖、心率、心律、呼吸頻率、呼吸深度未見明顯影響；以松果菊生藥5、10、20 g/kg給小鼠灌胃，每日1次，連續(xù)7 d，對小鼠自發(fā)活動及神經(jīng)系統(tǒng)均未見明顯影響。

張偉等[24]對健康昆明小鼠連續(xù)一周灌服不同濃度的紫錐菊根末生藥液，觀察其對健康昆明小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和心率的影響，以考察紫錐菊根末的潛在不良反應(yīng)。研究結(jié)果表明，紫錐菊根末對健康昆明小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和心率均無明顯影響。

3 毒理學(xué)研究

紫錐菊及其提取物毒性較低，安全范圍較大，是一種安全的中草藥。紫錐菊無致癌、致畸和致突變作用，無生殖遺傳毒性。

EMA報道[25]紫錐菊具有較低的急性毒性，新鮮壓制的紫錐菊汁液的LD50值高于推薦使用的最高劑量，例如高于大鼠口服給藥劑量15 g/kg bw，高于大鼠靜脈注射劑量5 g/kg，高于小鼠口服給藥劑量30 g/kg bw，高于小鼠靜脈注射劑量10 g/kg。

EMA報道了新鮮壓制的紫錐菊汁液的重復(fù)給藥毒性，以800、2400或8000 mg/kg bw/day劑量給藥，連續(xù)給藥4周，與對照組相比，臨床化學(xué)指標(biāo)以及尸檢指標(biāo)均未改變。EMA報道紫錐菊無致突變性。關(guān)于紫錐菊的致癌性，EMA稱考慮到紫錐菊無致突變性，因此，認為沒有必要開展致癌性研究。

趙丹等[26]研究了紫錐菊粉對大鼠的致畸作用，評價紫錐菊的生殖毒性。試驗將性成熟SD大鼠雌雄合籠交配，將孕鼠隨機分成紫錐菊高(1 g/kg)、中(0.5 g/kg)、低(0.05 g/kg)3個劑量組，陰性對照組和陽性對照組，于孕期7～16 d經(jīng)口給予受試物，觀察母鼠和胎鼠的生長發(fā)育情況。研究結(jié)果顯示，受試物各劑量組的孕鼠增重、活胎的體重、身長和尾長均顯著高于陽性對照組(P<0.01)，而吸收胎數(shù)、死胎數(shù)、畸形率均顯著低于陽性對照組。受試物各劑量組與陰性對照組間的所有指標(biāo)均無顯著差異。結(jié)果表明，紫錐菊粉對大鼠無母體毒性、胚胎毒性和致畸作用。

徐培渝等[27]研究了紫錐菊提取物浸膏對孕鼠和胎鼠的毒性和致畸性。研究根據(jù)人體推薦劑量，設(shè)3個劑量組，分別為833.3、1666.6和3333.3 mg/kg，分別相當(dāng)于人體推薦劑量的25、50和100倍，另設(shè)一個陰性對照組和一個陽性對照組。試驗在孕期7～16 d經(jīng)口給予受試物，檢查孕鼠和胎鼠相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果顯示，各劑量組孕鼠增重正常，對每窩活胎鼠的平均體重、身長和尾長無明顯的影響，未發(fā)現(xiàn)外觀畸形和內(nèi)臟畸形，各劑量組孕鼠增重?zé)o明顯減少。研究表明，紫錐菊無母體毒性和胚胎毒性，未見致畸性。

趙丹等[28]通過對紫錐菊提取物進行昆明小鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變試驗，評價紫錐菊提取物的潛在致突變性。試驗用紫錐菊提取物制備混懸液進行Ames試驗，采用平板滲入法，計數(shù)TA97、TA98、TA100、TA102標(biāo)準(zhǔn)測試株在4個不同濃度下，于37 ℃培養(yǎng)48 h后的回復(fù)突變菌落數(shù)。結(jié)果顯示無論在+S9和-S9的情況下，各劑量組均未引起測試菌株回變菌落數(shù)的明顯增加，Ames試驗結(jié)果為陰性。這表明，紫錐菊提取物不引起鼠傷寒沙門氏菌的回復(fù)突變數(shù)增加，無致基因突變性。

于蒙等[29]研究了紫錐菊提取物的遺傳毒性。試驗選用常規(guī)方法進行骨髓細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗和Ames試驗。研究結(jié)果顯示，紫錐菊提取物各劑量組與陰性對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與陰性對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。研究可以得出結(jié)論，紫錐菊提取物對小鼠未見生殖遺傳毒性，對鼠傷寒沙門氏菌無致突變性。

4 臨床應(yīng)用

紫錐菊可增強犬對犬瘟熱疫苗、犬細小病毒疫苗以及狂犬病疫苗的抗體效價，對犬免疫系統(tǒng)具有正向促進作用，并且安全無毒副作用，可作為臨床上用于增強犬對犬瘟熱疫苗和犬細小病毒疫苗等免疫效果的免疫增強劑。

余殷興[12]研究了紫錐菊根末在犬臨床上的應(yīng)用。研究將試驗犬隨機分成4組，分別為紫錐菊根末低、中、高劑量組及空白對照組，觀察7d后，再連續(xù)給藥21 d，停藥后觀察7 d，試驗期共28 d，分別在試驗第7、14、21、28天，前肢橈靜脈采血后分離血清，檢測血清犬瘟熱病毒(CDV)、犬細小病毒(CPV)抗體含量，測定白細胞介素(IL-2、IL-6、IFN-α、LYS)含量。研究結(jié)果顯示，紫錐菊根末能夠提高免疫犬外周血清中IL-2含量，降低IL-6含量，增加LYS含量，并且能夠在一定時間內(nèi)保持一定濃度水平。

Guan等[13]研究了紫錐菊根制劑對犬瘟熱病毒(CDV)和犬細小病毒疫苗(CPV)的免疫增強作用。試驗選用25只健康貴賓犬幼犬，隨機分到5個試驗組，每組5只。所有試驗犬接種弱毒活疫苗，連續(xù)三天觀察副作用。試驗第1～4組犬分別以0.1 g/kg、0.2 g/kg、0.4 g/kg或0.8 g/kg的劑量每日口服紫錐菊制劑，第 5組犬作為不給藥對照組。在給予紫錐菊制劑21 d后，再繼續(xù)觀察7 d，整個試驗周期為28 d。在研究第7、14、21和28天使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定血清抗體對CPV和CDV的效價，使用單因素方差分析進行結(jié)果分析。研究結(jié)果顯示，口服紫錐菊制劑后抗體效價明顯升高，并且與劑量呈正相關(guān)，0.8 g/kg(第4組)犬的犬瘟熱病毒抗體和犬細小病毒抗體在所有時間點均有明顯升高。研究表明，紫錐菊可以作為增強犬對犬瘟熱疫苗和犬細小病毒疫苗效價的免疫增強劑。

牛小飛等[30]研究了紫錐菊對犬瘟熱疫苗免疫效果的影響。試驗將健康犬隨機分為2組，即試驗組和對照組，每組8只，根據(jù)抗體水平的檢測結(jié)果在第45日齡時所有犬只接種犬瘟熱疫苗，試驗組在45～60日齡時每日分別灌服紫錐菊提取物20 ml，對照組灌服同樣劑量的生理鹽水。研究在45、60、75日齡對試驗犬進行前肢靜脈采血，離心，制備血清。采用血清微量中和試驗測定血清中犬瘟熱病毒(CDV)抗體效價。研究結(jié)果顯示，幼犬在45日齡時母源抗體效價較低，處于有效保護的臨界點，此時接種犬瘟熱疫苗，到60日齡時幼犬重新處于有效的抗體保護狀態(tài)下，其中試驗組犬只抗體效價顯著高于對照組；75日齡時抗體效價有所下降，但仍處在有效保護范圍內(nèi)，試驗組犬抗體效價仍顯著高于對照組。研究表明，飼喂紫錐菊提取物的試驗組犬瘟熱病毒抗體效價明顯高于正常飼喂的對照組，紫錐菊對犬的疫苗免疫有增強作用。

Torkan等[31]研究口服紫錐菊提取物對犬免疫系統(tǒng)的作用。研究選用14只健康犬，隨機分到兩個治療組，第一組給予5%紫錐菊提取物，每天兩次，連續(xù)給藥兩個月，第二組動物飲水作為對照組。在第0、30和60天對試驗犬采血進行血液學(xué)和免疫學(xué)試驗，血液試驗包括紅細胞積壓、血紅蛋白、紅細胞計數(shù)、白細胞計數(shù)、中性粒細胞計數(shù)、淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞和B細胞，進一步使用血液樣本進行IgM和巨噬細胞吞噬百分數(shù)檢測。研究結(jié)果顯示，紫錐菊給藥組犬血液中紅細胞積壓、血紅蛋白、紅細胞計數(shù)、白細胞計數(shù)、中性粒細胞計數(shù)、淋巴細胞、吞噬百分數(shù)和IgM數(shù)量明顯升高。同時，在試驗中觀察到紫錐菊對免疫系統(tǒng)具有正向促進作用。紫錐菊給藥組動物的紅細胞積壓、血紅蛋白、吞噬百分數(shù)以及IgM隨著時間具有明顯的改變。研究表明，紫錐菊提取物對犬具有免疫刺激活性。

Sgorlon等[32]研究了犬在飼喂過程中分別添加紫錐菊等4種營養(yǎng)劑的作用。研究選用74只犬進行試驗，24只健康犬作為對照，試驗組犬連續(xù)60 d飼喂分別含有包括紫錐菊在內(nèi)的4種營養(yǎng)劑，其中紫錐菊試驗組犬為14只。在試驗開始前(第0天)以及試驗結(jié)束時(第60天)對試驗犬稱重，并采集血漿樣品。紫錐菊營養(yǎng)劑添加組犬的作用體現(xiàn)在血漿中腫瘤壞死因子(TNF)和核因子(NFKB1)水平明顯降低，血漿中鋅濃度升高。研究結(jié)果顯示，紫錐菊作為營養(yǎng)劑可以調(diào)節(jié)動物機體的免疫反應(yīng)，能夠提高動物機體的健康狀態(tài)。

5 結(jié) 語

紫錐菊在動物保健上的免疫增強作用逐漸被認可，我國先后批準(zhǔn)紫錐菊末、紫錐菊口服液用于提高雞新城疫疫苗的免疫效果，批準(zhǔn)紫錐菊根末用于增強豬藍耳病滅活疫苗和雞新城疫疫苗的免疫效果，批準(zhǔn)紫錐菊顆粒用于增強豬瘟疫苗和雞新城疫疫苗的免疫應(yīng)答。目前，國內(nèi)無相關(guān)紫錐菊產(chǎn)品被批準(zhǔn)用于犬上，因此，開發(fā)紫錐菊應(yīng)用于犬以增強犬的疫苗免疫效果具有廣闊的市場應(yīng)用前景。