細(xì)菌檢驗(yàn)中PCR檢驗(yàn)法的應(yīng)用價值分析

史 業(yè) 成

(尉氏縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 開封 475500)

陰道細(xì)菌感染是致陰道炎的常見誘發(fā)因素，病情呈進(jìn)行性發(fā)展，甚至?xí)屡枨桓腥炯案共扛腥荆够颊叱霈F(xiàn)異位妊娠，或失去生育能力[1]。在陰道炎治療中，應(yīng)先了解陰道內(nèi)細(xì)菌感染情況及感染程度，采取針對性治療方案。另外由于抗菌藥物廣泛應(yīng)用，抗菌耐藥性不斷增強(qiáng)，用藥效果欠佳。因此需先了解陰道炎細(xì)菌感染狀況，細(xì)菌培養(yǎng)法是既往檢測細(xì)菌常用手法。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷進(jìn)步，PCR檢驗(yàn)法得到應(yīng)用日漸廣泛，并取得較高檢測準(zhǔn)確性[2]。筆者就以我院收治的75例陰道炎患者為例，對其分別采取細(xì)節(jié)培養(yǎng)及PCR檢驗(yàn)法行細(xì)菌檢驗(yàn)，分析其檢驗(yàn)結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)抽取我院在2017年1月～2018年7月期間行細(xì)菌檢驗(yàn)的陰道炎患者75例，患者知情本次研究，簽署同意書。患者均為育齡期女性，精神正常；患者因陰道炎、陰道瘙癢、陰道異味及白帶分泌物增加等表現(xiàn)而就診；患者近2d內(nèi)未有過性生活；近期陰道未用藥。患者年齡20～56歲，平均年齡(36.84±6.82)歲，病程3個月～4年，平均病程(11.36±3.48)個月。

1.2 檢驗(yàn)方法

75例陰道炎患者先采集陰道分泌物，取無菌棉簽輕輕插入陰道穹隆部位，輕柔旋轉(zhuǎn)，蘸取陰道分泌物，并放置2mL無菌生理鹽水保存。

細(xì)菌培養(yǎng)：將陰道分泌物置于陰道瓊脂培養(yǎng)基接種，在37℃恒溫箱中孵育培養(yǎng)48h，至培養(yǎng)基出現(xiàn)菌落后，選擇半菌落光滑、灰色透明樣、類似露滴狀的菌群，生化鑒定。

PCR法檢驗(yàn)：先對標(biāo)本離心15min，12000r/min，丟棄上清液，取堿性裂解液，添加至標(biāo)本的下層沉淀中。將離心后標(biāo)本放置60℃水浴中進(jìn)行加熱，時間15min，待充分裂解后，再次進(jìn)行離心，10min；取上清液作DNA模板，PCR擴(kuò)增為空白對照，取緩沖液、雙蒸餾水、引物、模板，依次加入對照品，隨后以PCR儀進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.3 觀察指標(biāo)

按照《微生物檢驗(yàn)操作規(guī)程》行細(xì)菌檢驗(yàn)，觀察細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR檢驗(yàn)對細(xì)菌陽性檢出率，對比兩種檢驗(yàn)方法對腸球菌、戛納桿菌及棒狀桿菌檢出率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采取SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理本次研究內(nèi)相關(guān)數(shù)據(jù)，對等級資料(%)采取秩和檢驗(yàn)。P<0.05時，代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法細(xì)菌檢驗(yàn)陽性率比較

PCR檢驗(yàn)法對細(xì)菌檢驗(yàn)陽性率89.33%，高于細(xì)菌培養(yǎng)法的61.33%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩種方法對細(xì)菌檢驗(yàn)陽性率比較[例(%)]

組別陽性率陰性率觀察組(n=75)67(89.33%)8(10.67%)對照組(n=75)46(61.33%)19(38.67%)Z7.4277.427P0.0060.006

2.2 兩種方法不同致病菌檢出率比較

PCR檢驗(yàn)法對腸球菌、戛納桿菌及棒狀桿菌檢出率分別為20%、34.67%、32%，均高于細(xì)菌培養(yǎng)法的12%、28%、21.33%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩種方法不同致病菌檢出率比較[例(%)]

組別腸球菌戛納桿菌棒狀桿菌觀察組(n=75)16(20%)27(34.67%)24(32%)對照組(n=75)9(12%)21(28%)16(21.33%)Z4.4914.1035.197P0.0140.0290.013

3 討論

對陰道炎細(xì)菌檢驗(yàn)時，多采取陰道分泌物檢查，可直接觀察陰道炎性感染程度，確定陰道內(nèi)細(xì)菌分布情況[3]，細(xì)菌檢驗(yàn)具較高的準(zhǔn)確性，能準(zhǔn)確反映疾病狀況。因女性陰道內(nèi)有大量上皮細(xì)胞、陰道桿菌、革蘭陽性球菌等多種菌群，而陰道內(nèi)菌群失調(diào)，陰道防御能力降低，細(xì)菌侵入性增加，使大量益生菌死亡，影響上皮細(xì)胞代謝功能，使陰道內(nèi)酸堿水平紊亂，致陰道炎發(fā)生[4～5]。為此，進(jìn)一步肯定了細(xì)菌檢驗(yàn)對陰道炎的判斷有積極作用。

細(xì)菌培養(yǎng)法是臨床病原菌檢驗(yàn)的常用方法，具較高的細(xì)菌檢出率，但細(xì)菌培養(yǎng)法操作復(fù)雜，檢驗(yàn)過程較為繁瑣，對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求較高，需耗費(fèi)較長的檢驗(yàn)時間，臨床應(yīng)用受到一定限制[6]。

PCR檢驗(yàn)法為分子生物學(xué)檢測范疇，操作簡單方便，具較高的診斷靈敏度，其檢驗(yàn)靈敏度高達(dá)90%；另外PCR檢驗(yàn)法結(jié)合PCR高敏感性及DNA雜交特點(diǎn)，屬于熒光定量檢測，無需耗費(fèi)太長的檢驗(yàn)時間，對檢驗(yàn)環(huán)境無較大要求，更適用于在基層醫(yī)院的廣泛開展[7～8]。本次研究中，PCR檢驗(yàn)法對細(xì)菌檢驗(yàn)陽性率89.33%高于細(xì)菌培養(yǎng)法61.33%，對不同致病菌陽檢出率也高于細(xì)菌培養(yǎng)法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。因此，與細(xì)菌培養(yǎng)法相比，PCR檢驗(yàn)法的應(yīng)用，操作簡單，具較高靈敏度及準(zhǔn)確性，更利于細(xì)菌檢驗(yàn)。

在PCR檢驗(yàn)法過程中應(yīng)注意：(1)在采集陰道分泌物時，應(yīng)避免陰道分泌物被尿液或其他體液干擾，以免影響檢驗(yàn)結(jié)果；(2)提高檢驗(yàn)醫(yī)生的采集、檢驗(yàn)水平，嚴(yán)格控制標(biāo)本的采集、檢驗(yàn)，確保標(biāo)本的檢驗(yàn)質(zhì)量及檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

鑒于此，在細(xì)菌檢驗(yàn)中，較細(xì)菌培養(yǎng)法相比，PCR檢驗(yàn)法具有較高的細(xì)菌檢出率，檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，操作簡單，更具應(yīng)用效果，值得臨床推廣應(yīng)用，并適用于基層醫(yī)院的開展。