辛伐他汀與阿司匹林共無定形復合物的制備

姚鴻萍，賀琬茸，楊廣德，曾愛國*

(1.西安交通大學第一附屬醫院藥學部，西安 710061；2.西安交通大學藥學院，西安 710061)

共無定形復合物是將2種或2種以上的小分子物質通過合適的方法制備得到的無定形單相體系[1-4]。該體系可改善藥物的理化性質[5-10]，提高藥物的藥效，降低藥物的毒性和不良反應[11]。

辛伐他汀是HMG-CoA還原酶抑制劑，能降低總膽固醇和血清低密度脂蛋白的質量濃度，減少基質金屬蛋白酶的產生，抑制巨噬細胞的活性，改善內皮依賴性血管擴張功能[12-13]。阿司匹林是目前應用最廣泛的抗血栓藥物[14-15]。臨床實驗表明，在抗動脈粥樣硬化、不穩定性心絞痛、擴張性心肌病、糖尿病和高血壓導致的心血管疾病中，阿司匹林與他汀類藥物聯用效果優于單獨使用。但這類患者往往服用藥物多，易漏服或呈現藥物相互作用，導致治療效果降低、不良反應增加。筆者擬制備辛伐他汀與阿司匹林共無定形復合物，以減少患者服用藥品的種數，提高患者用藥順應性，減少藥物間的相互作用，提高藥效，降低毒性和不良反應。

1 儀器與試藥

1.1儀器 DSC822e型差示掃描量熱儀(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)；LCMS-8040型高效液相色譜-質譜聯用儀(日本島津公司)；XRD-6100型X射線衍射儀(日本Shimadzu公司)；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鄭州長城科工貿易有限公司)。

1.2試藥 辛伐他汀(質量分數>99.1%)，阿司匹林(質量分數>98.0%)，均購自西安海鑫生物科技有限公司；乙腈為色譜純(Muskegon USA)；甲醇(山東浩中化工科技有限公司)和氯仿(成都市科隆化學品有限公司)均為分析純。水為自制三蒸水。

2 方法

2.1辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物的制備 分別精密稱取研磨成粉的阿司匹林0.354 0，0.602 0和0.925 0 g，分別置于3個干燥的蒸發皿中，加入少量氯仿，室溫下攪拌至溶解，分別超聲10 min。分別加入精密稱取的辛伐他汀1.646 0，1.398 0和1.075 0 g(辛伐他汀與阿司匹林的摩爾比分別為2∶1，1∶1和1∶2)，室溫下攪拌至溶解，再加入20 mL氯仿，超聲5 min，置于通風櫥下自然揮發12 h，至氯仿完全揮干。

2.2辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物的表征

2.2.1差示掃描量熱分析法(DSC) 精密稱取各樣品5 mg，置于鋁坩堝中，蓋上蓋，置于DSC分析儀中的S位置；將1個空白坩堝置于DSC分析儀的R位置；打開STAReDSC應用軟件，設置參數：起始溫度為25 ℃，結束溫度為160 ℃，升溫速率為10 ℃·min-1。當溫度降至25 ℃時，取出樣品，得到樣品的DSC曲線。

2.2.2粉末X射線衍射法(PXRD) 采用Cu-Kα靶，波長為1.540 6 ?，管壓為40 kV，管流為30 mA，步長為0.02°，掃描速度為6°·min-1，掃描范圍為5°～35°。數據用Jade 6.5軟件分析。比較分析辛伐他汀原料藥、阿司匹林原料藥和辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物的PXRD圖譜。

2.3辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物樣品的溶出度測定

2.3.1色譜條件 辛伐他汀：Tianhe C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動相：乙腈-0.020 mol·L-1磷酸二氫鈉(70∶30)，濾過并超聲后使用；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：238 nm；進樣量：20 μL；柱溫：25 ℃。阿司匹林：Tianhe C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動相：乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-三蒸水(20∶5∶5∶70)，濾過并超聲后使用；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：276 nm；每次進樣量：20 μL；柱溫：25 ℃。

2.3.2對照品溶液的制備 精密稱取辛伐他汀對照品0.50 mg，置于50 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得辛伐他汀質量濃度為10 μg·mL-1的對照品溶液。精密稱取阿司匹林對照品20 mg，置于50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得阿司匹林質量濃度為400 μg·mL-1的對照品溶液。

2.3.3線性關系考察 辛伐他汀：精密量取2.3.2項下制備的辛伐他汀對照品溶液0.5，1，2，4，6和8 mL，分別置于10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按照辛伐他汀的色譜條件進行HPLC 測定，以峰面積積分值為縱坐標(y1)、質量濃度為橫坐標(x1)，進行線性回歸，方程為：y1=47 616x1+3 644，r1=0.999 5，線性范圍為0.5～8 μg·mL-1。阿司匹林：精密量取2.3.2項下制備的阿司匹林對照品溶液0.5，1，3，5，6和8 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按照阿司匹林的色譜條件進行HPLC測定,以峰面積積分值為縱坐標(y2)、質量濃度為橫坐標(x2)，進行線性回歸，得回歸方程為：y2=6 296x2-19 889，r2=0.999 9，線性范圍為20～320 μg·mL-1。

2.3.4藥物的溶出度測定 精密稱取辛伐他汀原料藥、阿司匹林原料藥和辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物，采用《中國藥典》2015年版四部溶出度與釋放度測定法中第二法，即槳法進行測定。轉速為50 r·min-1，溫度為37.0±0.5 ℃，釋放介質選擇經脫氣處理的蒸餾水，并于2，5，10，15，20，30，45，60，90，120，180和240 min分別取樣1 mL(同時補加同溫度等量溶出介質)，以0.22 μm 微孔濾膜濾過，取續濾液20 μL 進行HPLC測定，測定結果代入標準曲線方程計算質量濃度，并換算成累積溶出率。

3 結果與討論

3.1辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物的制備 辛伐他汀與阿司匹林摩爾比為1∶1和1∶2時得到淡黃色黏稠狀物質，不能得到固體產物。而辛伐他汀與阿司匹林的摩爾比為2∶1時可得到白色、類白色的固體產物，將該固體產物在真空烘干箱中烘干，從蒸發皿中剝離，研磨成粉末，待用。

3.2差示掃描量熱分析 見圖1。由圖1可知，辛伐他汀和阿司匹林分別在144.6和138.6 ℃處有單一且尖銳的吸熱熔融峰，摩爾比為2∶1的辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物(圖1C中的a)在40.4 ℃有一玻璃化轉變溫度特征峰，初步判斷其可能形成了共無定形體系藥物。而其他2個摩爾比的樣品溶液并未出現類似的特征峰，初步判斷其可能未形成共無定形體系的藥物，需要結合其他表征測定方法進一步確定。

圖1DSC曲線

A.辛伐他汀；B.阿司匹林；C.辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物； a：辛伐他汀∶阿司匹林=2∶1；b：辛伐他汀∶阿司匹林=1∶2；c：辛伐他汀∶阿司匹林=1∶1。

Fig.1 DSC curves

A.simvastatin；B.aspirin；C.simvastatin-aspirin co-amorphous complex；a.simvastatin∶aspirin=2∶1；b:simvastatin∶aspirin=1∶2； c:simvastatin∶aspirin=1∶1.

3.3粉末X射線衍射 分別將辛伐他汀原料藥、阿司匹林原料藥和摩爾比為1∶1，1∶2和2∶1的3個辛伐他汀-阿司匹林的樣品進行PXRD測定，結果見圖2。由圖2可知，原料藥辛伐他汀具有高度的結晶形態，原料藥阿司匹林的相對結晶程度較小，摩爾比為1∶1和1∶2的辛伐他汀-阿司匹林樣品溶液PXRD曲線有較強的結晶態峰，呈疊加狀，結合DSC曲線判定辛伐他汀與阿司匹林摩爾比為1∶1和1∶2時未形成共無定形體系。摩爾為2∶1的辛伐他汀-阿司匹林樣品溶液的PXRD曲線中晶態峰消失，此結果與DSC曲線結果一致，因此判定辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物的摩爾比為2∶1。

圖2PXRD曲線

A.辛伐他汀；B.阿司匹林；C.辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物；a：辛伐他汀∶阿司匹林=2∶1；b：辛伐他汀∶阿司匹林=1∶2；c：辛伐他汀∶阿司匹林=1∶1。

Fig.2 PXRD curves

A.simvastatin；B.aspirin；C.simvastatin-aspirin co-amorphous complex；a.simvastatin∶aspirin=2∶1；b:simvastatin∶aspirin=1∶2； c:simvastatin∶aspirin=1∶1.

3.4辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物樣品的溶出度測定 鑒于辛伐他汀與阿司匹林摩爾比為1∶1和1∶2時，DSC和PXRD表明其未形成共無定形體系，故只測定了摩爾比為2∶1的辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物的溶出度。辛伐他汀溶出曲線見圖3。由圖3可知，辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物(2∶1)樣品中辛伐他汀在溶出介質中能較快溶解；辛伐他汀原料藥的溶出曲線比辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物中辛伐他汀的溶出曲線低，溶出度小。辛伐他汀原料藥在25 min時溶出達到第1個峰值，質量濃度為2.25 μg·mL-1，辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物中辛伐他汀的溶出達到第1個峰值的時間稍晚于其原料藥，但溶出質量濃度為4.75 μg·mL-1，是原料藥的2.5倍。在第7個時間點時，辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物中辛伐他汀的溶出質量濃度可達到原料藥的3倍。以上均證明將辛伐他汀制備為辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物(2∶1)有利于提高辛伐他汀的溶出速率和溶出度。

阿司匹林溶出曲線見圖4。由圖4可知，阿司匹林原料藥的溶出穩定，而辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物(2∶1)中阿司匹林的溶出曲線低于阿司匹林原料藥的溶出曲線，原因可能是與辛伐他汀形成共無定形后，存在一些作用力，限制了阿司匹林進一步的溶出，具體原因還需進一步研究。

圖3辛伐他汀(b)與辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物(2∶1)(a)中辛伐他汀的溶出曲線

Fig.3 Dissolution curves of simvastatin in co-amorphous complex (simvastatin∶aspirin=2∶1)(a) and simvastatin(b)

圖4阿司匹林(a)與辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物(2∶1)(b)中阿司匹林的溶出曲線

Fig.4 Dissolution curves of aspirin (a) and aspirin in co-amorphous complex (simvastatin∶aspirin=2∶1)(b)

4 小結

共無定形藥物是在晶型藥物、共晶藥物、無定形藥物的基礎上發現的新的藥物固體形態[10,14]。它克服了無定形藥物在制備、儲存和給藥等過程中易發生轉晶的穩定性問題[16-20]，且與無定形藥物一樣，都屬于單相體系。藥物與藥物形成的共無定形藥物可通過研磨法、低溫研磨法、溶劑揮發法和熔融-驟冷法等方法制備[21]，本課題以三氯甲烷為溶劑，辛伐他汀和阿司匹林作為原料藥，通過溶劑揮發法制備摩爾比為1∶1，1∶2和2∶1的辛伐他汀-阿司匹林樣品。經過DSC和PXRD 2種表征法確定所制比例的藥物中摩爾比為2∶1的辛伐他汀-阿司匹林樣品可通過此方法成功制得辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物。結果表明，辛伐他汀-阿司匹林共無定形復合物(2∶1)中辛伐他汀的溶出度較原料藥有了很大的提高。但阿司匹林的溶出卻降低，其原因需要進一步研究。