紫斑牡丹花粉乙酸乙酯部位化學成分研究

王新娣，石曉峰，劉東彥，范 彬，李 運，沈 薇，馬趣環

1甘肅省醫學科學研究院；2甘肅中醫藥大學 敦煌醫學與轉化省部共建教育部重點實驗室；3蘭州市食品藥品檢驗所，蘭州 730030

紫斑牡丹Paeonia rockii為毛茛科 Ranunculaceae芍藥屬PaeoniaL.多年生木本植物，因花瓣基部有一個明顯的紫斑而得名，主要分布于四川北部、甘肅南部、陜西秦嶺中段以西，是我國中西部地區的特有中藥材和花中珍品，其根皮作為藥用丹皮被甘肅省中藥材標準收載，具有清熱涼血，活血化瘀的功效[1]。牡丹花粉是其雄蕊中的雄性生殖細胞，含有黃酮類、多酚類、激素、核酸和有機酸等多種天然活性成分[2]，具有抑制前列腺增生、預防心血管疾病、調節血糖、促進造血、調節體內代謝和內分泌等諸多功能[3]。截止目前，國內外有關紫斑牡丹花粉的化學成分和藥理活性的研究報道甚少。本課題組前期實驗表明紫斑牡丹花粉以50%和75%乙醇提物具有較強的抗氧化能力[1]，通過對其安全性評價證實安全無毒。為了探尋該植物資源的藥食價值和活性因子， 本實驗對產自甘肅的紫斑牡丹花粉的化學成分進行了系統研究，從其70% 乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分離得到了18個化合物，分別鑒定為腺苷(1)、芹菜素(2)、檸檬黃素(3)、8-甲氧基山萘酚(4)、槲皮素(5)、檸檬素-3-β-D-葡萄糖苷(6)、sexangularetin-3-O-y1-β-D-sophoroside(7)、limocitrin-3-O-y1-β-D-sophoroside(8)、芍藥苷(9)、芍藥內酯苷(10)、氧化芍藥苷(11)、β-谷甾醇(12)、沒食子酸(13)、肉豆蔻酸(14)、亞油酸(15)、對羥基苯甲醛(16)、鄰苯二甲酸二戊酯(17)和蔗糖(18)，以上化合物均為首次從紫斑牡丹花粉中分離得到，其中化合物3、4、6為首次從該屬植物中分離得到。

1 儀器與材料

Varian Inova-600 MHz 核磁共振儀(TMS 內標 ，美國瓦里安公司)；Brucker Daltonics Apex II 質譜儀(美國 Varian 公司)；1260 infinity H 制備型高效液相色譜儀(Agilent 公司)；ZF-20D 暗箱式紫外分析儀(鞏義市予華儀器有限責任公司)；Sephadex LH-20(美國GE公司)；聚酰胺(100～200目，北京慧德易有限公司)；柱色譜層析硅膠、薄層色譜層析用硅膠(青島海洋化工廠)；試劑均為分析純。

實驗室所用紫斑牡丹花粉于2017年5月采自蘭州新區中川牡丹園，其原植物(標本號 20170501)經蘭州牡丹園藝開發公司趙潛龍高級工程師鑒定為Paeoniarockii(S.G.Haw et L.A.Lauener) T.Hong et J.J.Li。

2 提取與分離

紫斑牡丹花粉800 g，加8倍量70% 乙醇加熱回流提取3次，2 h/次，過濾，合并三次提取液，減壓濃縮至干得總浸膏182 g。將總浸膏分散于水中再經石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取。萃取液分別減壓濃縮至干，得石油醚萃取物(80 g)、乙酸乙酯萃取物(52 g)、正丁醇萃取物(50 g)。石油醚萃取物主要用于脂肪酸含量測定，正丁醇萃取物留待下一步進行苷類和多羥基類等化合物的分離。本實驗將乙酸乙酯萃取部位經硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇體系(100 ∶0→0∶100)梯度洗脫， 經TLC檢測合并，得到7個流份Frs.1～7。Fr.2 (10 g) 經硅膠柱色譜層析，石油醚-乙酸乙酯體系(30∶1→1∶1)梯度洗脫，經TLC檢測合并得到10個流份Frs.2-1～2-10。 Fr.2-3(1 g)流份經硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯體系(12∶1→0∶1)，梯度洗脫得到3個流份Frs.2-3-1～2-3-3。Fr.2-3-2(100 mg)經反復硅膠柱得到化合物15(10 mg)和14(8 mg)。Fr.2-5(50 mg)流份進一步重結晶得化合物16(8 m)。Fr.2-8 (1 g)流份經硅膠柱層析，石油醚-丙酮體系(30∶1→1∶1)，梯度洗脫得到5個流份Frs.2-8-1～2-8-5。Fr.2-8-3(20 mg)經反復重結晶純化得化合物12(10 mg)。 Fr.2-10(50 mg)經Sephadex LH-20柱色譜洗脫 (氯仿-甲醇 1∶1) 純化后，得化合物17(10 mg)。Fr.3(5 g)經硅膠柱層析，氯仿-甲醇體系 (20∶1→0∶1) 梯度洗脫，經TLC檢測合并，得到流份Fr.3-1～ Fr.3-10。Fr.3-5(10 mg)經反復重結晶得化合物2(5 mg)。Fr.3-8 (50 mg)流分經Sephadex LH-20柱色譜洗脫(氯仿-甲醇 1∶1)反復純化后，得化合物3(5 mg)、4(8 mg)和5(6 mg)。Fr.4(6.2 g)經硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇體系(10∶1→0∶1)梯度洗脫，經TLC檢測合并，得到流份Fr.4-1～Fr.4-10。 Fr.4-8(15 mg)流份經反復重結晶得化合物18(7 mg)。Fr.4-5(2.0 g) 經聚酰胺柱層析，丙酮-甲醇體系(10∶1)等度洗脫，所得流份經Sephadex LH-20柱色譜洗脫(甲醇)，得化合物6(8 mg)。Fr.5 (6.4 g) 經硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇體系(10∶1→1∶1)梯度洗脫， 經TLC檢測合并，得到流份Fr.5-1～Fr.5-5。Fr.5-3(30 mg)經制備液相(乙腈-1%甲酸水15∶85)，得到化合物7(10 mg) 和8(5 mg)。Fr.6(3.0 g)經反復制備薄層色譜及Sephadex LH-20色譜柱洗脫(甲醇)，得化合物9(8 m)、10(5 mg)和11(6 mg)。Fr.7(1.0 g)經過Sephadex LH-20色譜柱洗脫(甲醇)，得化合物1(4 mg)和13(6 mg)。

3 結構鑒定

化合物1白色粉末(CH3OH)；HR-ESI-MS：m/z268.103 6 [M+H]+，確定其相對分子質量為 267，分子式為 C10H13N5O4；1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：8.12(1H，s，H-2)，8.34(1H，s，H-8)，7.37(2H，s，NH2)，5.87(1H，d，J=6.3 Hz，H-1′)，5.47(1H，d，J=4.0 Hz，OH-5′)，5.46(1H，d，J=3.0 Hz，OH-2′)，3.65(2H，m，H-5′)，5.21(1H，d，J=4.6 Hz，OH-3′)，4.61(1H，dd，J=5.9，6.3 Hz，H-2′)，4.20(1H，dd，J=5.0，3.3 Hz，H-3′)，4.11(1H，q，J=3.3 Hz，H-4′)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：61.7(C-5′)，70.6(C-3′)，85.9(C-4′)，87.9(C-1′)，119.3(C-5)，139.9(C-8)，149.0(C-4)，152.4(C-2)，156.1(C-6)。以上數據與文獻[4]對比基本一致，故鑒定該化合物為腺苷(adenosine)。

化合物2黃色粉末(CH3OH)；HR-ESI-MS：m/z271.071 7 [M+H]+，確定其相對分子質量為 270，分子式為 C15H10O5；1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：12.96(1H，s，5-OH),7.93(2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′)，6.92(2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′)，6.78(1H，s，H-3)，6.47(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.18(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：94.0(C-8)，98.8(C-6)，102.8(C-3)，103.6(C-10)，115.9(C-3′,5′)，121.1(C-1′)，128.5(C-2′，6′)，157.3(C-9)，161.2(C-4′)，161.4(C-5)，163.7(C-7)，164.2(C-2)，181.7(C-4)。以上數據與文獻[5]對比基本一致，故鑒定該化合物為芹菜素(apigenin)。

化合物3黃色粉末(CH3OH)；HR-ESI-MS:m/z347.111 0 [M+H]+，確定其相對分子質量為 346，分子式為 C17H14O8；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.25(1H，s，H-6)，7.95(1H，d，J=1.9 Hz，H-2′)，6.96(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，7.83(1H，dd，J=8.4，1.9 Hz，H-6′)，3.94(6H，s，3′-OCH3，8-OCH3)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：116.5(C-3)，177.7(C-4)，156.4(C-7)，156.1(C-5)，137.6(C-3)，99.6(C-6)，150.3(C-9)，129.1(C-8)，104.7(C-10)，156.0(C-2)，124.4(C-1′)，147.8(C-3′)，123.1(C-6′)，112.4(C-2′)，150.1(C-4′)，116.5(C-5′)，62.0(8-OCH3)，56.5(3′-OCH3)。以上數據與文獻[6]對比基本一致，故鑒定化合物為檸檬黃素(limocitrin)。

化合物4黃色針狀結晶(CH3OH)；HR-ESI-MS：m/z317.132 9 [M+H]+，確定其相對分子質量為 316，分式為 C16H12O7；1H NMR(600 MHz，CD3COCD3)δ：8.21(2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′)，3.32(3H，OCH3)，6.31(1H，s，H-6)，7.05(2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′)；13C NMR(150 MHz，CD3COCD3)δ：146.9(C-2)，136.7(C-3)，176.8(C-4)，157.2(C-5)，99.1(C-6)，157.4(C-7)，128.6(C-8)，149.7(C-9)，104.1(C-10)，123.5(C-1′)，130.4(C-2′，6′)，116.4(C-3′，5′)，160.2(C-4′)，61.8(8-OCH3)。以上數據與文獻[7]對比基本一致，故鑒定該化合物為8-甲氧基山萘酚(8-methoxykaempferol)。

化合物5黃色粉末(CH3OH)；HR-ESI-MS：m/z303.114 9 [M+H]+，確定其相對分子質量為 302，分子式為 C15H10O7；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.41(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.88(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，7.56(1H，q，J=2.2，8.5 Hz，H-6′)，7.68(1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，9.31(1H，s，4′-OH)，9.60(1H，s，3′-OH)，10.79(1H，s，7-OH)，12.50(H，s，5-OH)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：176.3(C-4)，164.39(C-7)，161.2(C-5)，156.6(C-9)，148.1(C-4′)，147.2(C-2)，145.5(C-3′)，136.1(C-3)，122.4 (C-1′)，120.4(C-6′)，116.0(C-5′)，115.5(C-2′)，103.4(C-10)，98.6(C-6)，93.8(C-8)。以上數據與文獻[5]對比基本一致，故鑒定該化合物為槲皮素(quercetin)。

化合物6黃色粉末(CH3OH)；HR-ESI-MS：m/z509.126 7 [M+H]+，確定其相對分子質量為 508，分子式為 C23H24O13；1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：12.27(1H，s，5-OH)，7.96(1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.51(1H，dd，J=6.5，2.0 Hz，H-6′)，6.94(1H，d，J=6.5 Hz，H-5′)，6.27(1H，s，H-6)，5.57(1H，d，J=7.5 Hz，H-1′′)，3.83(3H，s，3′-OCH3)，3.80(3H，s，8-OCH3)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：177.4(C-4)，155.9(C-5)，157.5(C-7)，156.1(C-2)，148.5(C-9)，132.9(C-3)，127.5(C-8)，103.5(C-10)，99.1(C-6)，149.5(C-4′)，146.9(C-3′)，121.9(C-6′)，121.2(C-1′)，115.3(C-5′)，113.3(C-2′)，100.9(C-1′′)，77.5(C-5′′)，76.4(C-3′′)，74.3(C-2′′)， 69.8(C-4′′)，65.0(C-6′′)，60.9(8-OCH3)，55.58(3′-OCH3)。以上數據與文獻[8]對比基本一致，故鑒定該化合物為檸檬素-3-β-D-葡萄糖苷(limocitrin-3-β-D-glucoside)。

化合物7黃色粉末(CH3OH)；HR-ESI-MS：m/z641.170 7 [M+H]+，確定其相對分子質量為 640，分子式為 C28H32O17；1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：8.07(2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′)，6.95(2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′)，6.19(1H，s，H-6)，5.73(1H，d，J=7.5 Hz，H-1′′)，4.63(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′′′)，3.86(3H，s，OCH3)，5.57～2.51 (m，sophorosyl)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：177.7(C-4)，160.4(C-4′)，156.5(C-2，7)，155.3(C-5)，148.9(C-9)，133.1(C-3)，131.1(C-2′，6)，127.6(C-8)， 121.6(C-1′)，115.8(C-3′，5′)，104.5(C-1′′′)，103.0(C-10)，99.7(C-6)，98.5(C-1′′)， 82.8(C-2′′)，77.9(C-5′′)，77.5(C-5′′′)，77.0(C-3′′′)，74.8(C-2′′′)，70.1(C-3′′)， 70.0 (C-4′′′)，61.2(C-6′′)，61.1(OCH3)，60.9(C-6′′′)。以上數據與文獻[9]對比基本一致，故鑒定該化合物為5,7,4′-三羥基-8-甲氧基黃酮醇-3-O-β-D-槐糖苷(sexangularetin-3-O-y1-β-D-sophorosi-de)。

化合物8黃色粉末；HR-ESI-MS：m/z671.181 0 [M+H]+，確定其相對分子質量為 670，分子式為 C29H34O18：1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.79(1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.61(1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-6′)，6.91(1H，d，J=9.0 Hz，H-5′)，6.25(1H，s，H-6)，5.73(1H，d，J=7.5 Hz，H-1′′)，4.61(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′′′)，3.82(3H，s，3′-OCH3)，3.73(3H，s，8-OCH3)，5.33～2.51(m,sophorosyl)；13C NMR(150 MHz， DMSO-d6)δ：177.4(C-4)，156.6(C-7)，155.8(C-5)，149.3(C-9)，133.0(C-3)， 99.8(C-6)，155.8(C-2)，123.3(C-8)，102.4(C-10)，122.2(C-1′)，112.6(C-2′)，123.3(C-6′)，115.2(C-5′)，147.3(C-3′)，148.8(C-4′)，104.5(C-1′′′)，98.5(C-1′′),79.9(C-2′′)，77.9(C-5′′)，77.4(C-5′′′)，76.3(C-3′′′)，74.8(C-2′′′)，69.5(C-3′′)， 69.3(C-4′′′)，61.2(C-6′′)，61.1(8-OCH3)，55.8(3′-OCH3)，60.9(C-6′′′)。以上數據與文獻[9]對比基本一致，故鑒定該化合物為 limocitrin-3-O-y1-β-D-sophoroside。

化合物9白色無定形粉末(CH3OH)；ESI-MS:m/z481 [M+H]+，確定其相對分子質量為480，分子式為 C23H28O11；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：8.07(2H，d，J=7.5 Hz，H-2′′，6′′)，7.63(1H，t，J=7.5 Hz，H-4′′)，7.51(2H，t ，J=7.5 Hz，H-3′′，5′′)，5.44 (1H，s，H-9)，4.78(1H，d，J=4.0 Hz，H-8)，4.55(1H，d，J=7.5 Hz，H-1′)，3.85 (1H，d，J=11.5 Hz，H-6′β)，2.59(1H，d，J=7.0 Hz，H-5)，2.52(1H，dd，J=7.0，11.0 Hz，H-7β)，2.22(1H，d，J=12.5 Hz，H-3β)，1.98(1H，d，J=7.0 Hz，H-7α)， 1.84(1H，d，J=7.5 Hz，H-3α)，1.38(3H，s，H-10)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：168.0(C-7′′)，134.4(C-4′′)，131.2(C-1′′)，130.6(C-2′′，6′′)，129.6(C-3′′，5′′)， 106.3(C-4)，102.3(C-9)，100.2(C-1′)，89.3(C-1)，87.2(C-2)，77.9(C-3′，5′)， 75.0(C-2′)，72.2(C-6)，71.7(C-4′)，62.9(C-6′)，61.7(C-8)，44.5(C-3)，43.9 (C-5)，23.4(C-7)，19.5(C-10)。以上數據與與文獻[10]對比基本一致，故鑒定該化合物為芍藥苷(paeoniflorin)。

化合物10白色粉末(CH3OH)；ESI-MS：m/z481 [M+H]+， 確定其相對分子質量為 480，分子式為 C23H28O11；1H NMR (600 MHz，CD3OD)δ：2.41(2H，dd，J=6.6，15.0 Hz，H-3β)，2.07(1H,d，J=15.0 Hz，H-3α)，4.28(1H，dd，J=4.0，5.0 Hz，H-4)，2.93(1H，t，J=5.0 Hz，H-5)，2.05(1H，d，J=10.8 Hz，H-7α)，2.81(1H，dd，J=6.5，10.8 Hz，H-7β)，4.80(1H，d，J=12.0 Hz，H-8α)，4.68(1H,d，J=12.0 Hz，H-8β)，1.53(3H，s，H-10)，4.54(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.20～3.32(4H，m，H-2′，3′，4′，5′)，3.61(1H，dd，J=5.4，12.0 Hz，H-6′α)，3.85(1H，d，J=12.0 Hz，H-6′β)，8.08(2H，dd，J=1.0，7.0 Hz，H-2′′，6′′)，7.49(2H，t，J=6.5 Hz，H-3′，5′)，7.62 (1H，m，J=1.0，6.0 Hz，H-4′′)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：177.9(C-9)，168.0(C-7′′)，134.3(C-4′′)，131.3(C-1′′)，130.7(C-2′′，6′′)，129.6(C-3′′，5′′)，100.1(C-1′)，93.4(C-2)，86.9(C-1)，78.1(C-3′)，78.1(C-5′)，74.9(C-2′)，71.7(C-4′)，68.4(C-4)，62.0(C-8)，62.8(C-6′)，56.9(C-6)，41.7(C-3)，41.7(C-5),28.5(C-7)，20.5(C-10)。以上數據與文獻[11]對比基本一致，故鑒定該化合物為芍藥內酯苷(albiflorin)。

化合物11白色粉末(CH3OH)； ESI-MS:m/z497 [M+H]+，確定其相對分子質量為496，分子式為 C23H28O12；1H NM R(600 MHz，DMSO-d6)δ：2.19(1H，d，J=12.5 Hz， H-3β)，1.83(1H，d，J=12.5 Hz，H-3α)，2.49(1H，dd，J=7.0，11.0 Hz，H-7β)，1.95(1H，d，J=11.0 Hz，H-7α)，4.76(2H，d，J=2.5 Hz，H-8)，5.42(1H，s，H-9)， 1.41(3H，s，H-10)，4.54(1H，d，J=7.5 Hz，H-1′)，3.84(1H，d，J=12.0 Hz，H-6′β),8.05(2H，d，J=9.0 Hz，H-2′′，6′′)，7.01(2H，d，J=9.0 Hz，H-3′′，5′′)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：87.9(C-1)，85.8(C-2)，43.1(C-3)，104.9(C-4)，42.5(C-5)，70.8(C-6)，22.0(C-7)，60.2(C-8)，100.9(C-9)，18.1(C-10)，98.8(C-1′)，72.5 (C-2′)，73.6(C-3′)，70.3(C-4′)，76.6(C-5′)，61.5(C-6′)，120.6(C-1′′)，133.0 (C-2′′，6′′)，116.7(C-3′′，5′′)，162.7(C-4′′)，166.6(C-7′′)。以上數據與文獻[12]對比基本一致，故鑒定該化合物為氧化芍藥苷(oxypaeoniflora)。

化合物12白色針狀結晶(CHCl3)；HR-ESI-MS：m/z413.340 6 [M-H]+，確定其相對分子質量為 414，分子式為 C29H50O ；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：0.67(3H，s，H-18)，1.00(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，3.53(1H，m，H-3)，5.36(1H， m，H-6)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：11.8(C-18)，11.9(C-29)，18.8(C-21)， 19.0(C-26)，19.4(C-27)，19.8(C-19)，21.1(C-11)，23.0(C-28)，24.2(C-15)，26.0(C-23)，28.2(C-16)，29.1(C-25)，45.8(C-24)，31.8(C-2)，31.9(C-8)，31.4(C-7)，33.9(C-22)，36.1(C-20)，36.5(C-1)，37.2(C-10)，39.8(C-12)，42.3(C-13)，45.8(C-4)，50.1(C-9)，56.0(C-14)，56.7(C-17)，71.8(C-3)，121.7 (C-6) ，140.9 (C-5)。以上數據與文獻[13]對比基本一致，故鑒定該化合物為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物13白色針晶(CH3OH)；ESI-MS：m/z171 [M+H]+，確定其相對分子質量為170，分子式為 C7H6O5；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.92(2H，s，H-2，6)，8.82(1H，s，4-OH)，9.19(2H，s，3-OH，5-OH)，12.23(1H，s，COOH)；13C NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ：167.9(C-7)，145.8(C-3，5)，138.4(C-4)，120.8(C-1)，109.1(C-2)。以上數據與文獻[12]對比基本一致，鑒定該化合物為沒食子酸(gallic acid)。

化合物14白色粉末 (CH3OH)； ESI-MS：m/z228 [M]+，確定其相對分子質量為 228，分子式為 C14H28O2；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：0.88(3H，t，J=7.2 Hz，H-14)，1.62(2H，m，H-3)，2.36(2H，t，H-2)，1.25～1.34 (20H，m，H-4～H-13)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：180.2(C-1)，34.0(C-2)，31.9(C-12)，22.6(C-13)，14.0(C-14)，29.0～29.6 (C4～C11)。以上數據與文獻[14]對比基本一致，故鑒定該化合物為肉豆蔻酸(myristic acid)。

化合物15淡黃色油狀液體； ESI-MS：m/z279 [M-H]-， 確定其相對分子質量為 280，分子式為 C18H32O2；1H NMR(600 MHz，CDCl3)，δ：5.37(4H，m，H-9，10，12，13)，2.76(2H，m，H-11)，2.36(2H，t，J=7.4 Hz，H-2)，2.05(4H，m，H-8，14)，1.63 (2H，m，H-3)，1.30～1.38(14H，m，H-4～7，H-15～17)，0.89 (3H，t，J=7.0 Hz，H-18)；13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ：179.6(C-1)，33.2(C-2)，24.6(C-3)，29.0～29.7(C-4～7)，27.6(C-8)，130.1(C-9)，128.0(C-10)，25.6(C-11)，129.9(C-12)，127.9(C-13)，27.1(C-14)，29.5(C-15)，32.5(C-16)，22.5(C-17)，14.0(C-18)。以上數據與文獻[15]對比基本一致，故鑒定該化合物為亞油酸(linoleic acid)。

化合物16白色針晶； ESI-MS：m/z123 [M+H]+，確定其相對分子質量為 122，分子式為 C7H6O2；1H NMR (600 MHz，CD3COCD3)δ：9.75(1H，s，CHO)，7.82(2H，d，J=8.6 Hz，H-2，6)，7.02(2H，d，J=8.6 Hz，H-3，5)；13C NMR(150 MHz，CD3COCD3)δ：191.1(CHO)，163.8(C-4)，132.7(C-2，6)，130.4(C-1)，116.6(C-3，5)。以上數據與文獻[16]對比基本一致，故鑒定該化合物為對羥基苯甲醛(p-hydroxybenzaldehyde)。

化合物17無色透明的液體； ESI-MS：m/z307 [M+H]+， 確定其相對分子質量為 306， 分子式為 C18H26O4；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.71(2H，dd，J=3.2，5.6 Hz，H-3，6)，7.53(2H，dd，J=3.2，5.6 Hz，H-4，5)，4.30(4H，t，J=6.8 Hz ，H-8，8′)，1.45(4H，m，H-10，10′)，1.72(4H，m，H-9，9′)，1.25(4H，s，H-11，11′)，0.95(6H，t，J=7.2 Hz，H-12，12′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：132.3(C-1，2)，128.8 (C-3，6)，130.9(C-4，5)，167.7 (C-7，7′)，65.6(C-8，8′)，30.6(C-9，9′)，29.7(C-10,10′)，19.2 (C-11，11′)，13.7(C-12，12′)。以上數據與文獻[17]對比基本一致，故鑒定該化合物為鄰苯二甲酸二戊酯(di-n-pentyl phthalate)。

化合物18無色透明塊狀晶體(CH3OH)；ESI-MS：m/z365 [M+Na]+，確定其相對分子質量為 342，分子式為 C12H22O11；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：5.40(1H，d，J=4.0 Hz，H-1)，4.12(1H，d，J=8.8 Hz，H-3′)，4.05(1H，d，J=8.6 Hz，H-4′)，3.84 (1H，m，H-5′)，3.76(5H，m，H-4，6，6′)，3.71(1H，t，J=9.6 Hz，H-3)，3.66(2H，s，H-1′)，3.59(1H，m，H-2)，3.44(1H，t，J=9.5 Hz，H-5)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：93.6(C-1)，73.2(C-2)，74.4(C-3)，71.4(C-4)，75.7(C-5)，63.3(C-6)，64.1(C-1′)，105.3(C-2′)，83.8(C-3′)，79.4(C-4′)，74.7(C-5′)，62.2(C-6′)。以上數據與文獻[18]對比基本一致，故鑒定該化合物為蔗糖(sucrose)。

4 結果與討論

本文從紫斑花粉70% 乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分離得到18個化合物，涉及黃酮類、單萜苷類、有機酸類、甾醇類、核苷類以及其他類；其中黃酮類成分主要為芹菜素、檸檬黃素、8-甲氧基山萘酚、槲皮素、limocitrin-3-β-D-glucoside、sexangularetin-3-O-y1-β-D-sophoroside、limocitrin-3-O-y1-β-D-sophoroside；文獻報道，天然來源的芹菜素具有抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、抗真菌、抗炎、抗痛風、降糖、減肥等多種藥理活性[19]，槲皮素具有抗氧化、抗病毒、抗炎作用，在細胞和動物實驗中可以用來治療肝、心、脾、肺、腎、骨科疾病、神經系統疾病等[20]。單萜苷類成分芍藥苷、芍藥內酯苷和氧化芍藥苷具有廣泛的生物活性，以芍藥苷、芍藥內酯苷(白芍苷)、氧化芍藥苷為主要成分的白芍總苷具有很好的免疫抑制活性[3]，在臨床上用于類風濕性關節炎的輔助治療[21]；芍藥苷在抗腫瘤、抗氧化、抗抑郁、免疫調節和補血等方面作用顯著，且毒副作用較小，其藥用價值日益受到關注[22]。沒食子酸是化學結構最簡單的天然多酚類化合物，具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒等多種生物活性[23]；亞油酸是一種功能性多不飽和脂肪酸，具有軟化心腦血管、促進血液循環、減緩衰老、調節內分泌、促進新陳代謝及、降脂降壓等作用；植物甾醇類成分β-谷甾醇以其特有的生物學特性和物理化學性質被較多地應用到醫藥行業中，具有抗氧化、抗炎、抗癌、降血壓、降血脂等作用[24]。以上分離得到的這些化合物大多具有生物活性，為紫斑牡丹花粉開發利用提供了參考。

雙環單萜苷類成分為芍藥屬中一個特征性成分，多為芍藥苷衍生物，具有廣泛的生物活性，依此可將其作為質量標志物用于紫斑牡丹花粉的含量測定和質量控制；sexangularetin-3-O-y1-β-D-sophoroside、limocitrin-3-O-y1-β-D-sophoroside為首次從細葉芍藥(PaeoniatenuifoliaL.) 雄蕊中分離得到的2個新黃酮類化合物[9]，本試驗從紫斑牡丹Paeoniarockii花粉中分離得到它們，也說明芍藥屬植物的親緣性。