保心寧膠囊質量標準提升研究

何玉濤 林凡友 卞常芝 秦承盟

【摘?要】?目的：提升保心寧膠囊質量標準。方法：采用薄層色譜法（TLC）對保心寧膠囊中丹參、三七、枳殼進行定性鑒別，采用高效液相色譜法對保心寧膠囊中丹參酮ⅡA含量進行定量檢測，色譜柱為Agilent?C18柱，以甲醇-乙腈-水=（325∶100∶125）為流動相，檢測波長為270nm。結果：TCL斑點清晰，分離效果好，陰性樣品無干擾。丹參酮IIA在3.62～28.96?μg·mL-1范圍內具有良好的線性關系（r=0.9998），平均回收率為98.81%，RSD為2.55%。結論：所建立的定性和含量檢測方法能有效的檢測保心寧膠囊質量，可以作為質控檢測標準。

【關鍵詞】?保心寧膠囊;質量標準;HPLC;丹參酮ⅡA

【中圖分類號】R921.2?【文獻標志碼】?A【文章編號】1007-8517（2019）22-0046-04

Improvement?of?the?Quality?Standard?of?Baoxinning?Capsules

HE?Yutao1?LIN?Fanyou2*?BIAN?Changzhi2?QIN?Chengmeng2

1.Renhetang?Pharmaceutical?Co.，?Ltd.，?Linyi?276600，?China;?Sunhover?Pharmaceutical?Co.，?Ltd.，?Linyi?276023，?China

Abstract：Objective?To?improve?the?quality?control?standard?of?Baoxinning??Capsules.?Method?TLC?was?used?for?identification?of?herbal?medicine?Danshen，?pseudo-ginseng?and?fructus?aurantii?in?Baoxinning?Capsules.HPLC?was?used?for?quantitative?determination?of?tanshinone?IIA?in?Baoxinning?capsules.The?Agilent?C18?column?was?used?with?the?mobile?phase?of?mixture?of?methanol?-?acetonitrile?-?water=（325∶100∶125），?the?detection?wavelength?was?270?nm.?Result?TLC?sports?developed?were?fairy?clear，?and?the?blank?test?showed?no?interference.The?linear?relationship?of?tanshinone?IIA?was?good?in?the?range?of?3.62～28.96??μg·mL-1（r=0.9998）.?The?average?recovery?rate?was?98.81%，?RSD=2.55%?（n=9）.Conclusion?The?established?qualitative?and?content?detection?methods?can?effectively?detect?the?quality?of?Baoxinning?capsules，?and?can?be?used?as?the?quality?control?detection?standard.

Keywords：Baoxinning?Capsules;?Quality?standard;?HPLC;?Tanshinone?IIA

保心寧膠囊是由丹參、當歸和枳殼的干浸膏及三七4味藥組成，具有活血化瘀、行氣止痛之功效。臨床上用于心絞痛、心律失常，改善冠心病癥狀等[1]。本產品執行標準為衛生部藥品標準中藥成方制劑第十一冊藥品標準，檢驗項目極其簡單，沒有含量檢測等定量控制指標。為了更好地控制該產品的質量，定量定性檢測有效成分，特對質量標準進行提高。研究表明丹參具有較強的藥理作用[2-3]，多以治療心血管系統疾病為主，主要成分為丹參酮IIA、丹參素等，為準確控制藥品質量，用甲醇提取有效成分，高效液相檢測，進行丹參含量測定。三七、枳殼分別增加薄層鑒別檢查項，定性檢測其成分，為控制產品質量提供更有效措施。

1?儀器與試藥

Agilent?1260高效液相色譜儀，MS105DU型電子天平。丹參對照藥材（批號120923-201615）;枳殼對照藥材（批號120981-201605）;丹參酮IIA對照品（批號110766-201721）;人參皂苷Rg1對照品（批號110754-201324）;三七皂苷R1對照品（批號110745-201318）對照品均來源于中國食品藥品檢定研究院，甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。保心寧膠囊樣品來源于翔宇藥業股份有限公司提供，批號為150101、150302、150401、150402、150403、150902、160503、161001、161102、170302。

2?方法與結果

2.1?薄層鑒別

2.1.1?三七?取本品內容物，研細，稱取1.0g，加甲醇15mL，超聲處理1h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5mL使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rg1對照品、三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1mL各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2015年版四部通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各5?μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-正丁醇-甲醇-水（2∶4∶1∶2）的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%?硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數分鐘。供試品色譜圖中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色斑點，而陰性供試品溶液在相應位置無斑點。

2.1.2?丹參?取本品內容物，研細，稱取4.0g，加甲醇40mL，加熱回流提取1h，放冷，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇5mL使溶解，作為供試品溶液。取丹參酮IIA?1.0?g、丹參對照藥材1.0?g，同法制成對照品及對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2015年版四部通則0502）試驗，吸取上述溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮（95∶5）為展開劑，展開，取出，晾干，日光下檢視。供試品色譜圖中，在與對照品、對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，而陰性供試品溶液在相應位置無斑點。

2.1.3?枳殼?取本品內容物，研細，取約0.5?g，加甲醇10?mL，超聲處理30min，濾過，濾液揮干，殘渣加乙醇5?mL使溶解，作為供試品溶液。另取枳殼對照藥材0.2?g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2015年版四部通則0502）試驗，吸取上述溶液各5?μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，在105?℃加熱約5?min，置紫外光燈（365?nm）下檢視。供試品色譜圖中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，而陰性供試品溶液在相應位置無斑點。見圖1。

2.2?含量測定

2.2.1?色譜條件?色譜柱為?thermo?C18柱（4.6?mm?×?250?mm，5?μm）;流動相為甲醇-乙腈-水=（325∶100∶125），檢測波長270?nm，流速1.0?mL·min-1，柱溫為室溫25?℃，進樣量為10?μL。理論板數按丹參酮IIA峰計不低于3000。

2.2.2?溶液的制備

2.2.2.1?供試品溶液的制備?取本品內容物適量，研細，稱取0.5?g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25?mL，稱定重量，超聲處理（功率140W，頻率42kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.2.2?對照品溶液的制備?取丹參酮IIA對照品適量，精密稱定，加甲醇制成高濃度的對照品儲備液，取對照品儲備液適量再加甲醇稀釋至每1mL約含15μg的溶液，即得對照品溶液。

2.2.2.3?陰性供試品溶液制備?取除丹參外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備缺丹參的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺丹參的陰性樣品溶液。

2.2.3?專屬性試驗?分別精密量取對照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀中測定。結果表明理論板數按丹參酮IIA峰計算大于3000，丹參酮IIA和樣品中其它組分峰可基線分離，且與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5;陰性供試品溶液對主峰檢測無干擾，表明該方法專屬性良好。如圖2所示。

2.2.4?線性試驗?精密吸取丹參酮IIA對照品溶液儲備液適量，分別加甲醇稀釋成濃度為3.62?μg·mL-1、7.24?μg·mL-1、14.48?μg·mL-1、18.1?μg·mL-1、21.72?μg·mL-1、28.96?μg·mL-1的溶液，分別精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，測定其峰面積。以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，其回歸方程為：A=60.395C-20.83，r=0.9998。結果表明丹參酮IIA在3.62～28.96?μg·mL-1范圍內具有良好的線性關系。

2.2.5?精密度試驗?取對照品溶液重復進樣6次，測定峰面積。結果表明：丹參酮IIA的峰面積的RSD為0.22%，表明該方法的系統精密度良好。

2.2.6?穩定性試驗?將150402批供試品溶液于室溫條件下放置12h，分別于0、1、2、4、6、8、12h精密量取10μL注入液相色譜儀測定。結果表明，在室溫條件下放置12h內，所得丹參酮IIA的峰面積的RSD為0.29?%，供試品溶液在12h內穩定性良好，保心寧膠囊的丹參酮IIA含量為0.22mg·粒-1。

2.2.7?回收率試驗?取同一批樣品（批號：150402，含量為0.22?mg·粒-1，每粒0.45g），設計高、中、低3個不同濃度，高、中、低濃度丹參酮IIA對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.5∶1、1∶1、0.5∶1，各分別制備3份供試品溶液進行測定。結果見表1，丹參酮IIA的平均回收率為98.81%，RSD為2.55%。

2.2.8?耐用性試驗?分別使用正常色譜條件，不同柱溫（25±5）℃、不同波長（270±2）nm、不同流速（1.0±0.1）?mL·min-1、不同流動相比例、不同色譜柱thermo?C18?（250mm?×?4.6mm，5μm）、Agilent?C18?（250mm?×?4.6mm，5μm）進行測試，分別計算對丹參酮IIA含量進行考察。結果所有丹參酮IIA含量的RSD為1.54%，含量耐用性較好。

2.2.9?樣品含量測定?測定10批保心寧膠囊，依次吸取對照品溶液和供試品溶液10?μL，注入高相液相色譜檢測丹參酮IIA含量。結果見表2。

從以上10批保心寧膠囊樣品的含測結果可知，每粒樣品中丹參酮IIA的含量范圍為0.19～0.29mg，考慮到丹參藥材產地、采收季節、工業大生產中有效成分轉移率、有效成分穩定性等因素對樣品中丹參酮IIA含量的影響，為保證產品在有效期內有效成分含量符合質量標準要求，暫定每粒樣品中含丹參以丹參酮IIA計不得少于0.12?mg。

3?討論

3.1?TLC鑒別?在保心寧膠囊原有標準中，鑒別項僅規定了最大吸收波長及一個顯色鑒別，不能準確控制產品有效成分，經查閱文獻及實驗研究，對保心寧膠囊中的三七、丹參和枳殼都增加了TLC鑒別項。分別查閱不同文獻[4-6]研究不同的展開劑對鑒別的影響，考察高溫高濕等條件對TLC方法進行耐用性驗證，制定最有效的鑒別方法，經考察陰性供試品對樣品的定性鑒別無干擾，該方法的專屬性較強。

3.2?含量檢測?丹參為方中君藥，主要成分為丹參酮IIA、丹參素等，因此將丹參中丹參酮IIA作為本品質量控制的指標成分。本文以甲醇為提取劑，采用高效液相色譜法測定丹參中丹參酮IIA含量。采用紫外分光光度計對丹參酮IIA溶液進行全波長掃描，結果在270nm波長處有最大吸收，故選擇270nm作為本品的測定波長。分別考察甲醇-乙腈-水（325∶100∶125）、甲醇-水（75∶25）為流動相，結果以甲醇-乙腈-水（325∶100∶125）為流動相時，丹參酮IIA峰形對稱，分離度大于1.5，理論板數大于3000，故確定甲醇-乙腈-水（325∶100∶125）為流動相。該方法經方法學驗證，丹參酮IIA在3.62～28.96μg·mL-1范圍內線性關系良好，平均回收率為98.81%，耐用性RSD為1.54%，對10批樣品含量進行檢測結果穩定，說明該方法準確度高，耐用性強，能有效控制保心寧膠囊的質量。

綜上所述，采用高效液相色譜法對保心寧膠囊中丹參酮IIA含量進行檢測，專屬性好，準確度高;并對處方中的三七、丹參和枳殼都增加了鑒別項進行定性控制，能有效控制保心寧膠囊的質量，對保心寧膠囊質量標準的制定有一定提升作用。

參考文獻

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（收稿日期：2019-09-04?編輯：劉?斌）