從中醫理論發現二甲雙胍對白塞病的干預作用①

陳 永 管劍龍

(復旦大學附屬華東醫院免疫風濕科，上海200040)

白塞病最早是1937年由土耳其醫師Hulusi Beh?et(1889～1948) 首先報道的以口腔潰瘍、生殖器潰瘍以及眼色素膜炎 “三聯征”為主要表現的復發性自身免疫性疾病。隨著疾病的發展，皮膚、胃腸道、血管、肺部、關節、泌尿系統甚至神經系統都會出現病變[1]。我國東漢末年張仲景在《金匱要略》中描述到“狐惑之為病，狀如傷寒，默默欲眠，目不得閉，臥起不安，蝕于喉為惑，蝕于陰為狐，不欲飲食，惡聞食臭，其面目乍赤、乍黑、乍白……”所述的“狐惑之為病”已經達到了白塞病的診斷標準[2]，并以甘草瀉心湯，治療該病?？梢娭嗅t藥干預白塞病在中國有著漫長的歷史淵源。

白塞病的口腔潰瘍等臨床癥狀反復發作，極大地影響了患者的生活質量，當前臨床治療以控制癥狀為主，但仍有提高的空間；缺少可供選擇的藥物。尤其在藥物出現副作用和特殊人群(孕婦、兒童)中這些問題更為突出。我們在前期臨床工作中，發現二甲雙胍對白塞病有一定療效，有較好的臨床運用價值[3]。雖然二甲雙胍對免疫系統的調節作用有大量的研究[4]，但有趣的是，形成二甲雙胍干預白塞病的這一假說卻來源于中醫理論。

1 狐惑之為病與單純皰疹病毒(HSV-1)的關系及二甲雙胍的抗病毒作用

中醫學認為BD的發病原因與“蟲”、“毒”密切相關，例如隋代巢元方《諸病源候論·傷寒病諸候》指出“蟲食所致”，明朝趙以德在《金匱玉涵經二注》指出：“狐惑病，謂蟲蝕上下也”。 古代醫家，對狐惑病的觀察和推斷，是基于肉眼的觀察?，F代醫學研究發現在白塞病的發病過程中，患者病原微生物感染，包括各種病毒和細菌、結核分枝桿菌以及受到關注的鏈球菌屬感染聯合其他危險因素，如飲食、不良情緒等外因，作用于存在基因(如HLA-B51)缺陷、皮膚黏膜抗病原能力下降的易感人群而發病。目前認為交叉免疫反應學說，即易感人群與鏈球菌、HSV-1等病原微生物抗原成分之間存在的同源性是其重要發病機制[5]。

目前認為與白塞病相關的病原微生物并不具有特異性，可能在不同的個體中，誘發疾病的病原并不相同，但HSV-1在白塞病中的發病機制被廣泛研究。白塞病患者的外周血白細胞、唾液及生殖器潰瘍中可以檢出HSV。華東醫院對82例白塞病患者血清HSV-1檢測發現其陽性率為80.5%，明顯高于正常人群的20.0%。我們也重復了韓國學者用HSV-1接種到小鼠皮下，成功復制了白塞病動物模型(圖1)。

流行病學及體內、體外研究證實，二甲雙胍可能通過提高細胞對胰島素的敏感性具有一定抗病毒能力，尤其是在丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒方面研究較為充分，但對HSV-1是否具有抵抗能力尚不明確[6]。我們的研究顯示，二甲雙胍治療白塞病小鼠模型后，白塞病樣癥狀得到了改善(圖1)，且血清中的病毒HSV-1拷貝數經治療后明顯下降(圖2A)。在臨床標本中，這一結論也得到了進一步證實(圖2B)。

2 白塞病與足厥陰肝經循行及糖代謝關系

白塞病三聯征累及部位與經絡學說中足厥陰肝經循行所過部位十分吻合。狐惑病以肝經濕熱為病機，上害則目赤作紅，下注于陰，蝕為陰部潰爛，傳于胃經，胃火上炎則口舌生瘡糜爛。足厥陰肝經循行所通過的部位包括小腿內側(白塞病結節紅斑好發部位)、外生殖器、胃、咽喉、口腔及眼均為白塞病病變的好發部位。中醫認為該病病機以脾失健運為本，肝經濕熱瘀毒為標[7]。當然，我們認為中醫脾的本質就是解剖學的胰腺(Pancreas)[8]。那么中醫的脾失健運、肝經濕熱與胰島素抵抗即有著密切的因果關系。在糖代謝中，單糖經小腸黏膜吸收后，由門靜脈到達肝臟，在肝內轉變為肝糖原而貯存。肝糖原在調節血糖濃度以維持其穩定中具有重要作用。當勞動、饑餓、發熱時，血糖大量消耗，肝細胞又能把肝糖原分解為葡萄糖進入血液循環。肝臟通過如糖原生成、肝糖分解、糖酵解、糖質新生(Gluconeogenesis)等多種途徑調節糖代謝以保證血糖的平衡。并且對這些途徑中的多種急性或慢性生成的酶的調節形成了復雜的互編系統(Interwoven systems)[9]。

圖1 二甲雙胍對白塞病樣癥狀小鼠模型的治療前后對比Fig.1 Comparison of mouse modle of Behcet′s-like symptoms treated with metforminNote: Upper line：Bechet′s-like symptoms were established in mice after HSV-1 incubation；under line：symptoms were relieved after metformin treatment，and recovered faster than mice without treatment.

我們通過酶聯免疫吸附法(ELISA)對實驗動物血漿的胰島素、磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK-α)檢測發現，白塞病小鼠模型血漿胰島素、AMPK-α水平較正常小鼠明顯升高，而治療后，尤其是高劑量二甲雙胍組小鼠的胰島素、AMPK-α水平能夠較模型組下降(圖3)。除了在三大物質代謝方面的重要調節作用，最近的研究顯示，AMPK激活可通過抑制中性粒細胞、巨噬細胞等多種途徑抑制、減輕炎癥反應[10]。在我們的研究中，模型組AMPK被激活，而治療后，炎癥減輕，AMPK水平趨于正常。

3 “上火”——炎癥性疾病的共同機制，二甲雙胍的中醫治療靶點

“濕熱蘊結”是白塞病發病的重要中醫病理機制，如果“濕”理解為存在的胰島素抵抗，那么“熱”可以理解為炎癥的通路。白塞病的臨床癥狀，可以與中醫的 “上火”有著密切的聯系，并且在臨床上，存在患者因服用“清熱解毒”中藥，癥狀得到了一定控制。有趣的是“上火”一詞的英文即為：“Catch inflamed”。從幾年的研究不難發現胰島素抵抗、調節性T細胞/Th17細胞失衡以及腫瘤壞死因子-α、NF-κB、VitA[11]等炎癥相關因子，信號通路改變普遍存在于糖尿病、高血壓、腫瘤等多種自身免疫性疾病或炎癥相關性疾病中，且炎癥因子或通路的改變趨勢是一致的[12]。這種多種疾病普遍存在的炎癥通路改變形成了“上火”的物質基礎,并且與朱震亨所提出的人體發病多由“陰常不足、陽常有余”(體現了一個陽亢、上火的病理狀態)如出一轍[13]。

圖2 二甲雙胍對白塞病樣癥狀小鼠模型的HSV-1拷貝數影響Fig.2 Effect of metformin on HSV-1 copy number in mouse model of Behcet′s disease-like symptomsNote:A.Virus copies in mice with metformin treatment after 20 and 30 days，were significantly lower than model group that without metformin treatment (Health control：health mice，Model：model mice，High Met：high dose metformin treatment，Low Met：low dose metformin treatment);B.Virus copies were significantly decreased in Behcet′s patients after metformin treatment.(0.74±0.42)×108 vs (0.27±0.12)×108,*.P<0.05，**.P<0.01，***.P<0.001.

圖3 二甲雙胍對白塞病樣癥狀小鼠模型AMPK-α及胰島素的影響Fig.3 Effect of metformin on AMPK-α and insulin in mouse model of Behcet′s disease-like symptomsNote: The serum insulin，AMPK-α levels in model mice were increased than health mice.However，after metformin treatment，especially high dose mice group，insulin，AMPK-α levels were decreased compared with model group.****.P<0.000 1.

圖4 二甲雙胍對白塞病樣癥狀小鼠模型的脾臟Treg細胞、Th17細胞比率影響Fig.4 Effect of metformin on ration of spleen Treg cells and Th17 cells in mouse model of Behcet′s disease-like symptomsNote: Flow cytometry technique revealed Treg cells (CD4+CD25+Foxp3+) and Th17 cells (CD4+IL-17+Ror-γt+) both increased in model mice compared with health mice.However，after metformin treatment，especially in high dose group，Treg cells and Th17 cells were verging to normal levels.*.P<0.05；***.P<0.001.

我們課題組前期研究發現，白塞病患者存在著Treg/Th17調節軸的紊亂。在白塞病的發病機制中，維持免疫耐受的Treg細胞其功能減弱[14]，促進炎癥機制的Th17細胞功能增強[15]。在小鼠白塞病模型中Treg細胞、Th17細胞較正常小鼠升高，而經二甲雙胍治療后，尤其是高劑量組，Treg細胞、Th17細胞趨于正常(圖4)。

4 展望

現代醫學能夠豐富中醫基礎理論，中醫基礎理論亦可以指導現代醫學的正確發展方向，兩種醫學能夠相輔相成[16]。我們提出二甲雙胍干預白塞病假說的原因，并不是基于目前對于二甲雙胍這一藥物在免疫調節方面的研究，而是基于從白塞病的中醫發病機制脾失健運，肝經濕熱，以及二甲雙胍在血糖調節方面的作用，即對中醫“脾”的作用而形成的假說。臨床觀察和動物研究進一步證實這一假說的合理性，為白塞病的治療提供了一個候選方案；也揭示了二甲雙胍這一經典藥物的“健脾除濕”的功效。