胸腹水細胞塊切片結合免疫組化用于病理診斷的價值體會

劉露露

271000泰安市婦幼保健院，山東泰安

胸腹腔積液屬于臨床發生率較高的一種疾病，表現出復雜的發病機制。對其良惡性實施判定，對于疾病的診治及預后具有顯著價值。在進行診斷期間，胸腹水脫落細胞學檢查方法的應用較為普遍，但是細胞形態學的單純采用無法對病理診斷準確性做出保證，并且對于正確診斷會產生一定程度的影響[1]。本次研究將探討進行病理診斷期間胸腹水細胞塊切片+免疫組化方法的應用可行性，為疾病臨床順利診治奠定基礎。

資料與方法

2017年1月-2019年2月 收 集 臨 床送檢胸腹水標本140 例，男90 例，女50 例；年齡19～73 歲，平均(45.29±2.35)歲。

方法：①合理展開常規細胞涂片操作：對140 例送檢胸腹水標本，每例均約為100 mL，于陰涼位置保持5 min 靜置，之后選擇50 mL 自然沉淀標本于離心管中進行安置，之后保持2 500 r/min轉速進行10 min 離心，并且將上清液進行吸出。選擇沉淀物展開涂片操作，利用乙醇(95%)展開10 min固定操作，利用蘇木素進行3 min染色。之后利用鹽酸酒精(1%)進行5 s 分化，并且保持5 min 流水反藍，5 s 伊紅染色，進行1 次水洗；利用梯度酒精展開脫水操作，二甲苯透明以及中性樹膠封片操作。安排高年資細胞病理醫生2名展開涂片形態學觀察[2-3]。②合理完成細胞沉渣切片制作：針對常規細胞涂片疑似的23 例惡性胸腹腔積液標本，將完成常規細胞學檢查所剩余的細胞學標本于離心管(20～50 mL)移入，之后保持2 500 r/min 進行10 min 離心。完成后，針對上清液利用吸管吸掉，并且準備中性福爾馬林(10%，20 mL)于含沉淀物離心管中加入，將振蕩儀放入保持10 min 振蕩。完成后，繼續進行10 min離心，將上清液祛除，針對沉淀物利用鑷子取出，并且利用擦鏡紙進行包裝。依據常規完成脫水以及透明等系列操作。如果胸腹水中表現出較多的血性成分，準備20 mL 乙醇混合液+冰醋酸加入，混合后展開離心操作[4-5]。③合理完成免疫組化染色操作：主要利用EnVision 兩步法展開免疫組化操作，系列操作依據說明書嚴格展開。針對CK7 以及TTF-1 等進行檢測。針對石蠟切片合理展開脫蠟至水操作，利用蒸餾水進行2～3 次清洗，時間為2 min。合理展開高壓抗原修復操作。之后在室溫(3%H2O2)條件下進行10 min 孵育，以將內源性過氧化物酶活性充分消除。利用PBS 進行2～3 次清洗，各控制5 min 時間。準備正常山羊血清封閉液進行滴加，于室溫中進行10 min 放置，準備Ⅰ抗進行滴加，保證4℃過夜。陰性對照主要選擇PBS 對Ⅰ抗進行代替，準備Ⅱ抗進行滴加，實施DAB染色以及蘇木素復染操作。利用鹽酸乙醇展開分化操作，之后展開切片脫水等系列操作[6]。

結 果

對于23 例疑似惡性胸腹水標本展開離心沉渣包埋以及完成免疫組織化學染色后發現，屬于鱗狀細胞癌4 例，腺癌12例，惡性間皮瘤1例，屬于小細胞癌3例，屬于反應性間皮細胞2 例，屬于惡性淋巴瘤1 例。對患者實施細胞塊切片HE染色，發現細胞呈現出豐富密集的特點，能夠做到結構清晰以及染色分明，表現出一定的組織結構。通過實施免疫組織化學染色，表現出陽性信號定位準確的特點，并且呈現出背景干凈以及對比度好的優點。

討 論

臨床在進行胸腹水脫落細胞檢查期間，呈現出操作簡易、方法簡單以及經濟快速的特點，于臨床的應用率較為廣泛。對患者實施常規胸腹水脫落細胞學圖片檢查，表現出較低的陽性率，并且對于系列病理，無法對其組織來源進行明確。針對典型細胞判斷的準確性可以做出保證，但是有時往往表現出蛻變間皮細胞以及炎性胸腹水增生同腺癌細胞等呈現出混淆的現象，進而增加困難度。

在傳統細胞涂片基礎上實施細胞快切片，可以發揮顯著輔助干預效果。并且將免疫組化方法同胸腹水細胞快進行結合，可以將常規細胞涂片表現出的系列不足進行有效補充。胸腹水細胞沉渣石蠟切片的有效應用，呈現出技術操作便捷的特點，不僅可以將胸腹水標本診斷效果顯著提升，而且可以將細胞學診斷效果顯著提升。完成細胞沉渣石蠟包埋處理后，能夠確保同常規活檢組織塊相同展開連續切片操作；呈現出細胞比較集中的特點，能夠將遺漏有效減少。通過蠟塊完成的切片制作，可以將因為涂片過厚而造成的細胞成團、細胞重疊以及結構不清現象進行充分避免；此外，對于掉片現象可以充分避免。通過染色定位，呈現出可靠及準確的特點，因為背景清晰，從而可對診斷的準確性做出保證。此外，通過胸腹水沉渣蠟塊，能夠做到反復連續切片，能夠依據診斷結果，合理完成免疫組化染色、細胞化學染色與原位核酸分子雜交染色等。

本次研究結果發現，對于23 例疑似惡性胸腹水標本展開離心沉渣包埋以及完成免疫組織化學染色后發現，鱗狀細胞癌4 例，腺癌12 例，惡性間皮瘤1例，屬于小細胞癌3 例，反應性間皮細胞2例，屬于惡性淋巴瘤1例。對患者實施細胞塊切片HE染色，發現細胞呈現出豐富密集的特點，能夠做到結構清晰以及染色分明，表現出一定的組織結構。通過實施免疫組織化學染色，表現出陽性信號定位準確的特點，并且呈現出背景干凈以及對比度好的優點。

綜上所述，臨床在實施胸腹水病理診斷期間，將細胞沉渣石蠟切片、免疫組化技術同常規胸腹水脫落細胞學檢查方式進行充分結合，可以使得診斷效果顯著提升，臨床推廣意義顯著。