遂寧地區表觀健康人群低血紅蛋白密度參考區間的建立

肖光軍，劉艷婷，楊 娜，席 源，范 嬋，涂建華，李祥坤

(四川省遂寧市中心醫院檢驗科，四川 遂寧 629000)

目前臨床用于機體鐵缺乏(ID)篩查及相關貧血類型鑒別的指標較多，多涉及鐵代謝、紅細胞、網織紅細胞等相關參數，其在臨床運用時存在一定的局限性[1]。因此，美國Beckman Coulter公司提出了一個由平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)經過數學公式計算得到的新的紅細胞參數—低血紅蛋白密度(LHD)[1-4]，有研究表明它在缺鐵性貧血(IDA) 和其他伴有缺鐵的貧血中升高，對IDA診斷的敏感度優于以往的MCHC，可以作為反映鐵代謝狀態的良好指標[1-6]。但目前LHD的相關研究較少，不同文獻報道的健康人群參考區間不同，且與采用衛生行業標準《WS/T 405-2012血細胞分析參考區間》[7]中MCHC的參考區間直接轉換所得的LHD參考區間有較大差異，影響其在臨床的運用，故本研究檢測遂寧地區表觀健康人群外周血中的MCHC水平，嘗試建立本地區該人群中LHD的參考區間。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1—12月在本院體檢的9950例20～89歲的表觀健康者，均來自遂寧地區，其中男6095例，年齡20～89歲；女3855例，年齡20～88歲。將所有對象按性別分組后，再根據年齡分為6個亞組：20～29歲組、30～39歲組、40～49歲組、50～59歲組、60～69歲組、≥70歲組，男性各組依次為1216例、1237例、1514例、1162例、589例及377例，女性各組依次為1011例、1072例、917例、514例、230例及111例。根據參考區間的分組情況，每組另收集2017年10月2—6日健康體檢者各20例對建立的參考區間進行驗證[7]。

1.2 納入及排除標準 納入標準：(1)肝功、腎功、血脂、血糖、血清鐵均正常；(2)女性無月經量過大，且未處于妊娠期或哺乳期；(3)近半年內無獻血史、輸血史及手術治療史；(4)無其他慢性疾病史及家族史[7-8]。排除標準：采用2001年WHO和聯合國兒童基金會制定的貧血診斷標準排除貧血，即排除血紅蛋白<130 g/L的14歲以上男性體檢者和血紅蛋白<120 g/L的14歲以上女性(非孕婦)體檢者。

1.3 儀器與試劑 全血細胞計數(CBC)使用Sysmex XN2000全自動血細胞分析儀及其配套校準品、試劑進行檢測；肝功、腎功、血脂、血糖及血清鐵均使用日立7600全自動生化分析儀檢測，除血清鐵檢測試劑及其配套校準品由日本和光提供外，其余試劑及配套校準品均由四川邁克提供。所有檢測項目均參加了2016年衛計委臨檢中心舉辦的室間質量評價活動(EQA)，且偏倚均小于1/2總允許誤差(TEa)，說明實驗室檢測正確度驗證通過；樣本檢測前儀器性能良好，室內質控均在控。

1.4 方法

1.4.1 樣本采集與檢測 使用EDTA-K2真空抗凝采血管采集所有對象清晨空腹靜脈血2 ml，輕輕顛倒混勻6～8次，并于采血后2 h內完成全血細胞計數的檢測，收集數據。因遂寧地區屬四川盆地中部丘陵低山地區，海拔為400～600 m，按衛生行業標準《WS/T 441-2013人群貧血篩查方法》[9]的要求本地區血紅蛋白檢測結果不需要外部校正。

1.5 統計學方法

1.5.1 離群值檢驗 采用Dixon檢驗的方法剔除離群值，即以極大值與極小值之間的差值為R，以極大或極小值與相鄰值之間的絕對差值為D，如果D/R≥1/3時，該值應作為離群值被剔除[10-11]。

2 結 果

2.1 年齡及LHD水平的總體分布情況 入選的9950例表觀健康體檢者，經離群值檢驗，男性及女性各組均未發現離群值。按性別分組后，其年齡及LHD水平均呈偏態分布(均P<0.01)，男性年齡及LHD水平依次為43(32～53)歲、5.12(3.27～8.77)%；女性則為37(29～48)歲、8.77(5.60～13.68)%，兩組間年齡及LHD水平的差異均有統計學意義(P<0.01)。

2.2 不同年齡、不同性別組間LHD水平 各年齡組LHD水平均呈偏態分布(均P<0.01)，且男女間的差異具有統計學意義(均P<0.01)，故需同時按性別和年齡段分組分別制定參考區間。見表1。

表1 不同年齡、不同性別組間LHD水平比較

注：1)表示男性兩年齡組間差異具有統計學意義；2)表示女性兩年齡組間差異具有統計學意義

2.3 男性各年齡組LHD水平及其參考區間 男性30～39歲組、40～49歲組及50～59歲組3組間差異無統計學意義(P>0.05)，參考區間可以合并，合并后差異仍具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.4 女性各年齡組LHD水平及其參考區間 女性20～29歲組、30～39歲組與40～49歲組3組間以及50～59歲組與60～69歲組兩組間的差異均無統計學意義(P>0.05)，參考區間可以合并。合并后女性差異仍具有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表2 男性各年齡組LHD水平及其參考區間

表3 女性各年齡組LHD水平及其參考區間

2.5 參考區間的驗證 根據參考區間的分組情況，每組另收集2017年10月2—6日本院體檢中心健康體檢者各20例對建立的參考區間進行驗證，其檢測結果均在建立的參考區間范圍內，驗證通過。

3 討 論

ID容易導致IDA的發生，而IDA是最常見的貧血類型，至今仍是全球關注的健康問題；另一方面，機體缺鐵時可引起人體免疫力低下，導致兒童生長發育遲緩，甚至影響其智力發育[1]，因此，及早發現并給予相應預防治療措施，具有重要意義。LHD是由MCHC經過數學公式計算得到的， LHD與鐵的可獲得性及可利用性相關，可用于ID及貧血類型的診斷和鑒別診斷[1-6]。

本研究建立的男性和女性各年齡組的參考區間與張麗霞等[3]報道的參考區間[(1.86±0.77)%]、曾思強等[5]報道的參考區間[(2.37±0.81)%]明顯不一致，這可能與參考個體所在的地區、種族、生活飲食習慣、經濟條件、自然礦物質含量等因素不同有關[6]，同時受參考個體的納入和排除標準不一致的影響[7]。與采用衛生行業標準中MCHC的參考區間(男/女：316 g/L～354 g/L)直接轉換所得的LHD參考區間(男/女：1.00%～23.05%)相比較一致[7]。遂寧地區男性20～59歲組和60～69歲組的參考區間比行業標準窄；女性20～49歲組和50～69歲組以及男性和女性≥70歲組的參考區間上、下限均高于行業標準，但仍存在一定的差異，這可能與女性生理性周期失血及圍絕經期激素紊亂易導致功能性子宮出血、老年人骨髓造血功能下降且是痔瘡的高發人群等因素有關[12]，人體少量失血將導致鐵的丟失，生成少量的小細胞低色素紅細胞，從而導致外周血中LHD水平升高。另一方面，行業標準的參考個體選自東北、華北、西北、華南、華東、西南6個地區20～79歲的城鄉成人健康人群[7]，而本研究與行業標準的參考人群存在一定差異，也可能導致兩者間LHD參考區間存在一定的差異。故新的檢測項目運用于臨床前各地區需建立適宜于該地區的參考區間，若引用外部的參考區間使用前必須驗證或評估適用性。

本研究也存在一定的局限性：(1)研究對象的納入和排除標準不嚴謹，未能排除大便隱血試驗陽性者以及吸煙和酗酒者；(2)納入的研究對象范圍仍不夠大，未聯合本地區其他醫院及體檢中心，且未包含嬰幼兒、青春期少年等特殊人群。

綜上所述，本研究成功建立了遂寧地區20～89歲表觀健康者人群外周血中LHD的參考區間，有助于LHD聯合鐵代謝、網織紅細胞、外周血紅細胞形態、骨髓鐵染色等檢測結果在ID篩查及相關貧血類型鑒別診斷中的運用[13-14]。今后要制定更加合理的參考個體納入和排除標準，在保證檢測結果一致性的條件下與本地區多中心合作，擴大標本量，驗證或重新建立本地區人群中LHD的參考區間[15]。