惠州地區女性體檢人群中HPV感染情況調查

楊育英 朱少美 劉集鴻 周瀟 張麗科

(惠州市第一人民醫院檢驗科，惠州 516003)

宮頸癌是全球女性的第四大常見惡性腫瘤，每年新發病例有528000例，死亡數高達266000例，嚴重威脅女性健康，受到廣泛的重視[1]。研究證實，人乳頭瘤病毒(human papilloma virus, HPV)的持續感染是引起女性宮頸癌的主要病因，然而不同基因亞型對其發生發展影響不同[2-3]。據報道，目前已分離鑒定的HPV亞型就有100多種，能感染女性生殖道的有40多種，根據致病性的差異，分為高危型和低危型，其中低危型主要與外生殖器尖銳濕疣相關，而高危型與宮頸癌和癌前病變密切相關[4]。研究表明，不同地區的感染類型差異較大[5]，對不同地區進行HPV基因型的篩查具有十分重大的意義。因此，本研究針對廣東惠州地區女性體檢人群，用流式熒光技術進行HPV感染情況的篩查，分析其型別特征年齡分布特點及宮頸病變，為該地區宮頸癌的早期發現、預防和控制提供有力的流行病學數據及參考。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2016年8月—2017年6月來廣東省惠州市第一人民醫院體檢中心就診的702例女性人群，年齡范圍在19～77歲(中位年齡41歲)，準入標準為無宮頸癌、無宮頸手術史、無盆腔放射治療史，目前無妊娠。按年齡區間分為≤30歲、31～40歲、41～50歲、≥50歲年齡組，例數分別是91、237、271、103例。702例體檢女性均進行了HPV分型檢測，其中92例HPV分型陽性患者同時進行了液基薄層細胞檢測(thinprep cytologic test, TCT)。

1.2 標本采集

用一次性使用無菌宮頸取樣器插入宮頸外口順時針轉動4～5圈，采集宮頸表面及宮頸管內的脫落細胞，然后將取樣器置于上海透景生命科技股份有限公司專用的細胞保存液中，在管口處沿刷柄折斷，刷頭留在保存液中，做好標識，-20℃保存。

1.3 HPV分型

取出含宮頸脫落細胞的待處理標本，將在室溫下完全溶解，震蕩混勻，取1mL樣品13000r/min離心5min，棄上清，用1mL生理鹽水進行清洗后，用透景公司的核酸提取盒進行核酸提取，用人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒(流式熒光雜法)經Luminex 200的流式熒光儀檢測后進行分型，步驟參考試劑說明書。可鑒定27種人乳頭瘤病(HPV)的基因型，包括高危型(1種)：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、26、53和82，低危亞(1種)：6、11、40、42、43、44、55、61、81和83。

1.4 TCT檢測

由病理科細胞學專職醫師待檢宮頸脫落細胞標本經制片、95%酒精固定、染色后鏡檢。根據2001年國際防癌協會推薦的TBS(the bethesda system)分級診斷標準進行閱片。TBS分級標準：未見上皮內病變細胞(negative for intraepithelial lesion or malignancy,NIM)，非典型鱗狀細胞(atypical squamous cells,ASC)，低度鱗狀上皮內病變(low-grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)，非典型鱗狀細胞不能排除高級別上皮內病變(atypical squamous cells incapable of excluding high-grade squamous intraepithelial lesion,ASCH)，高度鱗狀上皮內病變(high-grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)。

1.5 統計學分析

用SPSS 21.0進行統計學分析，組間用χ2檢驗，以P＜0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1 HPV基因型分布情況

女性體檢人群HPV總感染率為14.4%(101例/702例)，單一感染、多重感染分別占82.2%(83例/101例)、17.8%(18例/101例)。HPV單一感染共83例，以高危亞型為主，占83.1%(69例/83例)，前3位感染亞型分別是52(24.1%，20例/83例)、16(10.8%，9例/83例)和58(10.8%，9例/8例)。HPV單一感染中16.9%(14例/83例)是低危亞型，前3位感染亞型分別是81(4.8%，4例/8例)、43(3.6%，3例/83例)、61(3.6%，3例/83例)。多重亞型感染18例，有2種、3種、4種亞型混合感染，分別占多重亞型感染人數的55.6%(10例/18例)、33.3%(6例/18例)、11.1%(2例/18例)。多重亞型感染人群中含高危亞型占89.7(17例/18例)，僅1例不含高危亞型感(40，43，44型)(表1)。

2.2 HPV感染的年齡特征

702例女性體檢人群的年齡范圍在19～77歲(中位年齡41歲)，按如表2所示，年齡區間分為≤30歲、31～40歲、41～50歲、>50歲年齡組，例數分別是91、237、271和103例，HPV陽性率分別為18.7%、14.4%、14.0%和11.7%，各年齡組間感染率無統計學差異(χ2=6.065,P=0.733)。如表2和圖1所示，各年齡段均以高危型感染為主，其中≤30歲的高危型感染率和多重感染率均最高，分別為13.2%和4.4%。不同年齡組HPV基因型52、16和58的檢出情況見表3，≤30歲、31～40歲、41～50歲年齡組以52型為主，感染率分別為5.49%、2.11%、3.31%，>50歲年齡組以58型為主，感染率為1.94%。

2.3 HPV感染的宮頸病變情況

92例HPV分型陽性體檢女性同時進行了TCT檢測，結果見表4。25%人群宮頸有炎癥細胞或出血，10.9%人群出現了非典型鱗狀細胞不能排除高級別上皮內病變(ASC-H)和低度鱗狀上皮內病變(LSIL)。不同感染類型間病變程度無統計學差異(χ2=3.151,P＞0.05)。

3 討論

宮頸癌是危害女性健康的重大惡性腫瘤之一。人乳頭瘤病毒(HPV)與宮頸癌的發生發展密切相關。HPV分為高危型和低危型，不同型別的篩查對宮頸癌的預防和控制有重大意義。研究表明，不同地區、不同人群的HPV流行率、感染型別有明顯差異[6]。了解當地體檢女性人群的HPV感染狀況及基因型分布對該地區的宮頸癌防控具有必要性。

表1 HPV陽性樣品基因型分布情況Tab. 1 The distribution of genotypes in HPV infected positive paitientssamples

據報道，我國女性人群宮頸HPV感染率為25.0%，不同地理區域的感染率差異較大(20%～34.6%)。其中華南地區最低，感染率為20.0%[7]。也有報道普通女性篩查人群中HPV感染率為15.7%[8]。本研究中廣東省惠州地區體檢人群的感染率為14.4%，低于華南地區的平均水平。造成這種結果的原因，可能是由于研究對象為健康體檢女性人群，不包括門診患者。有研究已經明確指出，門診就診女性感染率顯著高于體檢人群，如遵義地區的門診就診女性HPV陽性率為37.47%，而體檢女性則為13.24%[9]。廣東省地區的整體感染亞型以高危型為主，前3位感染亞型分別是16型、52型、58型[10]。本研究中廣東省惠州地區的感染亞型也以高危型為主，感染亞型與省內整體報道相近，前3位的亞型分別是52型(24.1%)、16型(10.8%)和58型(10.8%)，與廣州地區情況基本一致[11]。

表2 HPV在各年齡組的檢出情況Tab. 2 The detection of HPV in alldifferent age groups

圖1 各年齡組HPV的感染率Fig.1 HPV infection rates in aldifferentl age groups

表3 不同年齡組HPV基因型52、16和58的檢出情況Tab. 3 The detection of HPV genotype 52, 16 and 58 in different age groups

表4 不同感染類型體檢人的液基細胞檢測結果Tab. 4 Test the result of thin-prep cytology test for in different types of healthy peplewomen with different types of infection

HPV感染高低主要取決于人群的年齡和性行為習慣。有文獻表明，不同年齡階段的女性人群感染率有統計學差異，感染率最高的是≥61歲組(33.7%)，其次為≤20歲組(33%)，最低的是31～40歲組(16.4%)[12]。也有文獻報道無統計學差異[10]。本研究中發現≤30歲、31～40歲、41～50歲、≥50歲年齡組HPV陽性率無統計學差異(P＞0.05)，陽性率最高的是≤30歲年齡組(18.7%)，最低的是≥50歲年齡組(11.7%)，可能與性行為活躍程度有關。在各年齡組感染情況均以高危型為主，≤30歲、31～40歲、41～50歲年齡組以52型為主，≥50歲年齡組以58型為主(表3)。因此，不同年齡層女性人群都應加強HPV的篩查，尤其是高危型的檢測。

有研究表明，HPV高危亞型與宮頸病變程度相關，其感染率越高，病變程度越嚴重(P＜0.01)[13]。在本研究中，本研究檢測了HPV感染女性體檢人群的宮頸病變。TCT結果顯示10.9%人群出現了非典型鱗狀細胞意義不明確(ASC-US)和低度鱗狀上皮內病變(LSIL)。但不同感染類型間病變程度無統計學差異，可能是由于體檢人群中大部分尚未出現宮頸病變或病變程度低。然而，HPV的感染，尤其是高危型的感染，仍是宮頸癌變的重要病因，其作為篩查方式十分必要。本研究中使用的是流式熒光雜交法，可同時分出最常見的27種型別，具有較高的臨床應用價值。

綜上所述，HPV感染普遍存在于廣東惠州地區各年齡層女性體檢人群中，主要以高危亞型為主。流式熒光技術可以精確分出27種最常見的HPV亞型，加強HPV亞型的篩查對宮頸癌的防治具有十分重要的臨床意義。